免疫膠體金快速診斷技術在獸醫診斷上的應用

劉俊國

摘 要 免疫膠體金標記技術是近年來隨著醫療技術水平的發展提高而研究的一項新型免疫標記技術，該技術主要以膠體金作為示蹤標志物，在抗原抗體反應中具有良好應用效果。鑒于此，就免疫膠體金快速診斷技術在獸醫診斷上的應用進行了簡單的分析。

關鍵詞 免疫膠體金快速診斷技術；獸醫；診斷；應用

中圖分類號：S854.43 文獻標志碼：B 文章編號：1673-890X（2014）21--02

免疫膠體金快速診斷技術最早主要用于尿液和血清的檢驗，檢測方法與ELISA比較類似，而這種檢測技術整個過程只需要5 min。在20世紀90年代初期，國外著名醫學研究者Chun等提出用膠體金代替酶作為標記物用于滲濾試驗，并成功的制備了檢測抗人類免疫缺陷病毒（ HIV） 抗體的試劑盒，而得到廣泛應用[1-2]。隨著醫療技術水平的發展提高及醫學研究的深入，該項技術已在人醫臨床檢驗中得到了廣泛應用，如蛋白質檢測、傳染病原抗體檢測、妊娠試驗等，而目前臨床上關于該項技術在獸醫診斷的報道卻較少見。

1 概述

1.1 基本原理

免疫膠體金快速診斷技術主要是以微孔濾膜為固相載體，包被已知抗原或抗體，將待測樣本加入之后，通過微孔膜的滲濾作用促進標本中的抗體或抗原與膜上包被的抗原結合，再發生一系列化學反應產生紅色，并以此判定結果。目前，臨床上應用的主要包括免疫滲濾試驗和免疫層析試驗[3]。

1.2 優勢

免疫膠體金快速診斷技術整個試驗過程只需要試劑盒或試紙條，而不需要任何實驗儀器，大大提高操作的方便性，反應結果非常明顯，可通過肉眼直接判別，反應時間也非常短，一般情況下，5～10 min便可獲得檢測結果；同時，免疫膠體金快速診斷技術具有很高的靈敏度和特異性。

2 應用

免疫膠體金快速診斷試劑主要應用于獸醫診斷基層單位，尤其是對于專業人員和專業設備比較缺乏的基層單位。目前，市面上已出現了很多已經免疫膠體金快速診斷家禽家畜及寵物用金標診斷試劑，用于檢測豬口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬瘟、豬旋毛蟲、雞傳染性法氏囊病、雞新城疫、禽流感、犬瘟熱、犬細小病毒及寵物用旋毛蟲病等疾病的快速診斷試劑。歸納起來，其應用主要包括2個方面。

2.1 抗體的檢測

這種方法主要是應用于檢測NC膜上包，具體方法為：用膠體金標記相應抗原，也可以標記SPA，如果檢測樣品為陽性，則可以在標記物中看到紅色斑點。我國著名農學研究者張書永[4]等應用該方法對豬瘟抗體進行了檢測，選擇100份豬血清進行豬瘟抗體檢測比較，研究結果顯示僅有一例出現不符，符合率達99.0%。另外，一名研究者陳劍閣[5]等建立的豬瘟金標免疫層析試紙測試60份標準陽性血清和36份標準陰性血清，試驗結果顯示器符合率達百分之百。曹三杰等建立了斑點免疫金染色法能有效對PPV抗體進行檢測，并通過對豬細小病毒病抗體進行了檢出試驗，試驗結果顯示器檢出量為1.008×10-10 g/mL，不同的試驗標本混合可出現交叉反應，比如豬布魯氏菌病、豬衣原體病、豬偽狂犬病等等。方瑩等通過試驗提出了的RRRS抗體免疫金標試紙，并對60份豬血清及血液樣品進行抗體水平檢測，檢測結果顯示其符合率達百分之百。王春仁等研究出的斑點免疫金滲濾試驗能有效對綿羊腦多頭蚴病進行檢測及診斷，具有很高的符合率；另外一些臨床研究者還建立了EDS-76病毒抗體的斑點免疫金測定法、豬偽狂犬病抗體水平免疫膠體金快速檢測試紙法、特異性地檢測豬流行性乙型腦炎病毒抗體的斑點金免疫滲濾測定法等方法，并提出共同的結論，采用免疫膠體金快速診斷在多種動物疾病抗體的檢測中具有很高的符合率、靈敏度和特異性。

2.2 病原的檢測

病原檢測方法有很多，常見的比如雙抗體夾心法，該方法主要是以2種抗該病原的抗體分別用來包被NC 膜和標記膠體金，陽性樣品的病原會與金標抗體和NC 膜上的抗體相結合，從而對病原進行檢測。我國著名醫學研究者等建立了檢測犬細小病毒的膠體金免疫層析法。并用該方法對60份犬糞便樣品進行了檢測，檢測結果顯示與HA結果相比可獲得40倍以上的效價，還有一些研究者也紛紛建立了檢測PRRSV的斑點免疫金滲濾法、快速診斷雞新城疫的免疫層析測試條等多種方法和試劑，并得出共同的結論，免疫膠體金快速診斷在多種病原的檢測中具有較高效價，可獲得較高檢出率，值得在臨床上推廣應用。

3 結語

免疫膠體金快速診斷技術是隨著醫療技術水平的發展提高而研究的一項新型的獨特的診斷技術，該技術與免疫酶標技術、放射免疫技術、免疫熒光技術并列為四大免疫標記技術，具有非常重要的臨床價值，在未來也具有廣闊的發展空間。目前，該技術在獸醫診斷上得到了逐步推廣，但還需進一步研究。

參考文獻

[1]艾嘉亮，鄧國華，王君偉.膠體金免疫層析技術及其在獸醫診斷上的應用[J].黑龍江畜牧獸醫，2009，5：88-89.

[2]楊雪林，張福官，楊衛華，等.膠體金快速診斷技術在獸醫臨床診斷中的應用[J].安徽農學通報，2010，2：36-37.

[3]莊金秋，梅建國，沈志強.膠體金免疫層析技術在獸醫臨床診斷中的應用進展[J].中國動物檢疫，2012，9：70-75.

[4]張書永.免疫膠體金快速診斷技術的臨床應用與質量控制[J].中國醫學裝備，2013，5：37-39.

[5]陳劍閣.膠體金免疫技術在豬瘟診斷上的應用進展[J].中國動物保健，2011，6：14-17.

（責任編輯：趙中正）endprint