乳腺癌組織中HSG和EGFR基因mRNA表達(dá)與其臨床病理因素的相關(guān)性研究

章 駿 趙 怡 王 群 張 舟 邢戍健

乳腺癌是女性惡性腫瘤中最為常見(jiàn)的腫瘤之一，具有高度的異質(zhì)性，主要體現(xiàn)在其臨床特點(diǎn)、病理特征、不同預(yù)后及分子生物學(xué)的差異[1]。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，分子生物學(xué)領(lǐng)域得到很好的發(fā)展，為臨床早期診治及預(yù)后提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。增殖抑制基因(hyperplasia suppressor gene,HSG)亦稱(chēng)作線粒體融合素基因，其主要作用是抑制細(xì)胞的增殖，對(duì)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生一定影響[2]。表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)屬于跨膜糖蛋白的1種，酪氨酸激酶型受體，定位在人類(lèi)的第7號(hào)染色體上，主要促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂[3]。本文通過(guò)比較乳腺癌組織及正常乳腺組織中HSG及EGFR的表達(dá)情況，分析與乳腺癌患者的臨床病理因素的關(guān)系，為臨床乳腺癌的診斷及預(yù)后提供治療經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2011年1月2012年6月在我院就診的乳腺癌患者50例作為研究對(duì)象，同時(shí)選取正常乳腺組織標(biāo)本40例及乳腺纖維腺瘤組織標(biāo)本40例，所有組織均取自女性患者，年齡22～67歲，所有乳腺癌患者均經(jīng)病理檢查確診。浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌34例，浸潤(rùn)性小葉癌10例，導(dǎo)管內(nèi)癌4例及髓樣癌2例。TNM分期，其中Ⅰ期、Ⅱ期共29例，Ⅲ期共21例。所有乳腺癌患者未進(jìn)行過(guò)放、化療干預(yù)，術(shù)前均未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

1.2 主要試劑

HSG鼠抗人單克隆抗體及EGFR小鼠抗人多克隆抗體均購(gòu)于武漢博士德生物公司。免疫組化染色試劑盒SP-9000、DAB顯色液及磷酸鹽緩沖液(PBS)等均購(gòu)于北京賽馳生物科技有限公司。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)監(jiān)測(cè)，乳腺癌組織、乳腺纖維腺瘤組織和正常乳腺組織中HSG和EGFR的mRNA表達(dá)情況。

1.4 免疫組化染色

標(biāo)本用10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，采用免疫組化SP法，染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為空白對(duì)照，以乳腺癌陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HSG、EGFR在人乳腺癌組織、纖維腺瘤組織、正常乳腺組織中的表達(dá)。

1.5 結(jié)果判定

以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中有棕黃色顆粒為HSG和EGFR表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。評(píng)價(jià)HSG和EGFR陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)采用四級(jí)分類(lèi)方法[4]：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%、25%～50%及>50%分別記為0、1、2、3分。同時(shí)結(jié)合染色強(qiáng)度：無(wú)著色細(xì)胞、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3分。兩者分值之和為最后得分：0～1分為陰性，記為(-)；2～3分為弱陽(yáng)性，記為(+)；4分為中度陽(yáng)性，記為(++)；5分以上為強(qiáng)陽(yáng)性，記為(+++)。本研究中所有陰性患者記為(-)，所有陽(yáng)性患者均記為(+)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HSG和EGFR基因mRNA表達(dá)比較

單因素方差分析表明，正常乳腺組、纖維腺瘤組及乳腺癌組中HSG、EGFR mRNA表達(dá)均具有顯著性差異(P<0.05)，其中乳腺癌組HSG mRNA表達(dá)水平顯著低于正常乳腺組和纖維腺瘤組(P<0.05)，EGFR mRNA表達(dá)水平顯著高于正常乳腺組和纖維腺瘤組(P<0.05)，而正常乳腺組與纖維腺瘤組HSG、EGFR mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表1。

表1 各組HSG和EGFR mRNA表達(dá)情況

注：與正常乳腺組織及纖維腺瘤組織比較，★為P<0.05。

2.2 不同乳腺組織中HSG、EGFR mRNA表達(dá)情況

乳腺癌組HSG mRNA表達(dá)率明顯低于正常乳腺組和乳腺纖維腺瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；乳腺癌組EGFR mRNA表達(dá)率明顯高于正常乳腺組和乳腺纖維腺瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常乳腺組與乳腺纖維腺瘤組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組乳腺組織中HSG、EGFR mRNA表達(dá)情況比較

2.3 乳腺癌組織中 HSG和EGFR mRNA表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

HSG和EGFR mRNA表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、ER和HER-2表達(dá)顯著相關(guān)(P<0.05)；HSG、EGFR mRNA表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期和患者年齡等無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 乳腺癌組織中HSG與EGFR、HER-2、ER、PR表達(dá)的相關(guān)性

在乳腺癌組織中，HSG與EGFR mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，γ=-0.427，P<0.05；與HER-2表達(dá)呈正相關(guān)性，γ=0.311，P<0.05；與ER表達(dá)呈正相關(guān)性，γ=0.301，P<0.05；與PR表達(dá)無(wú)相關(guān)性，P>0.05。

表3 HSG和EGFR的 mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，眾多生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子及體內(nèi)激素參與乳腺癌腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及遠(yuǎn)處組織的轉(zhuǎn)移[5]。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸增多，大量關(guān)于分子標(biāo)志物與乳腺癌的研究發(fā)展迅速，腫瘤特異性基因改變漸漸為人們所認(rèn)識(shí)，越來(lái)越多基因最為腫瘤的標(biāo)志基因被研究，在評(píng)估分子標(biāo)志物與乳腺癌的治療效果及乳腺癌病理發(fā)生機(jī)制發(fā)揮重要作用[6]。

增殖抑制基因(HSG)，主要位于人類(lèi)1號(hào)染色體短臂位置，這一區(qū)域的缺失或者易位，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生腫瘤[7]。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，HSG以激活抗癌基因的表達(dá)，有效阻止細(xì)胞周期并抑制多種細(xì)胞的增殖的作用，同時(shí)在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中，也發(fā)揮重要作用[8]。本實(shí)驗(yàn)中，HSG在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于乳腺纖維腺瘤組織和正常乳腺組織，有研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中HSG低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與本研究結(jié)果一致[9]。淋巴結(jié)是人體免疫的重要防線，同時(shí)也是腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要途徑，隨著腫瘤組織學(xué)分級(jí)的升高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展，HSG的表達(dá)逐漸下降，使正常組織中的細(xì)胞增殖分化出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致細(xì)胞分化不良，細(xì)胞隨之出現(xiàn)異常增殖傾向。HSG的變達(dá)在臨床乳腺癌分級(jí)及治療效果評(píng)價(jià)中可作為重要參考指標(biāo)。

表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，基因位于7q11.13，是連接糖蛋白中的1種，眾多研究證實(shí)EGFR的過(guò)度表達(dá)與細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)，而與發(fā)病年齡及腫塊大小表現(xiàn)無(wú)明顯相關(guān)性[10]。在多種腫瘤中，EGGR的過(guò)度表達(dá)，通常伴有癌基因的異常擴(kuò)增。在不同種類(lèi)的腫瘤中，EGFR的表達(dá)也有差異，腫瘤的分化程度不同，其表達(dá)的多少也存在差異，浸潤(rùn)性及分化程度差的腫瘤有較高水平的表達(dá)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的EGFR的陽(yáng)性率也較高。本研究結(jié)果顯示，EGFR陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期、年齡等因素?zé)o明顯關(guān)系，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級(jí)等差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，對(duì)HSG及EGFR的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HSG與EGFR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，通過(guò)研究?jī)烧咧g的相關(guān)性及表達(dá)關(guān)系，能夠加深對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的理解，對(duì)腫瘤的臨床防治提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)對(duì)腫瘤的治療提供更加有效的治療方案。檢測(cè)乳腺癌的HSG、EGFR的水平，明確其表達(dá)情況，能夠準(zhǔn)確的評(píng)估乳腺癌的分型，判斷乳腺癌的生物學(xué)行為，更好的為臨床提供個(gè)性化治療。HSG和EGFR或許能夠成為今后治療乳腺癌的新的靶點(diǎn)，通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，防止因細(xì)胞過(guò)度增殖導(dǎo)致的腫瘤的發(fā)生，對(duì)臨床治療惡性腫瘤性疾病提供新的治療方案及研究方向，有重要的臨床意義，值得臨床進(jìn)一步研究。

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