丙酰左卡尼汀對酒精所致肝損傷小鼠的保護作用

陳 卓

(鄭州大學附屬腫瘤醫院 河南省腫瘤醫院，河南 鄭州 450052)

丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(PLC)是左卡尼汀(LC)的酯化物，其生理活性與LC相似，主要藥理作用表現在改善受損心肌的物質與能量代謝。PLC具有較強的抗氧化活性，對酒精誘導的胃黏膜急劇損傷有部分保護作用，可以保護胃黏膜免受無水酒精損傷并促進潰瘍愈合，預防硫代巴比妥酸活性反應物的增加和脂質過氧化，增加胃中谷胱甘肽的量和超氧化物歧化酶(SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，但是對胃組織中過氧化氫酶(CAT)無影響〔1〕。但是，關于其對酒精性肝損傷的保護作用還未見報道，本研究采用酒精誘導肝損傷研究PLC對酒精性肝損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1實驗動物 昆明種小鼠，雄性，體重(20±2)g，由鄭州大學實驗動物中心提供。在恒溫21～24 ℃，相對濕度45%～55%的環境中適應飼養1 w后實驗，期間自由飲食飲水。

1.2試劑與儀器 乙醇(天津市光復科技發展有限公司，分析純)，PLC片劑(500 mg/片，Sigma-tau公司，批號：20110318)，復方益肝靈片(21 mg水飛薊素/片，吉林省博威藥業有限公司，批號：20101225)，谷丙轉氨酶(ALT)測定試劑盒、谷草轉氨酶(AST)測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒、還原性谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均來自南京建成生物工程研究所，山梨醇脫氫酶(SDH)酶聯免疫試劑盒(上海逸峰生物科技有限公司)。Sartorius BP 211 D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)，TG16-WS高速離心機(南賽特儀器廠產品)，UV-2409型紫外分光光度計(日本島津)，Olympus BX-50型顯微鏡，DQP-9010石蠟冷凍切片機(上海華巖儀器設備有限公司)，ZN17-2102A型全自動酶標儀(北京中諾遠東科技有限公司)。

1.3實驗方法

1.3.1方法 昆明種小鼠72只隨機分成正常組，模型組，陽性藥物益肝靈組，PLC低劑量組(0.15 g/kg)，PLC中劑量組(0.3 g/kg)，PLC高劑量組(0.6 g/kg)，每組12只。按照文獻方法〔1〕：每日灌胃給藥30 min后，除正常組外，其余各組小鼠均灌胃35°二鍋頭白酒16 ml/kg，正常組灌胃等容積的蒸餾水。第10天給酒后，禁食不禁水，20 h后眼靜脈采血，常規離心后分離血清測定ALT、AST和SDH活力。同時迅速剖取肝臟，取小鼠肝左葉，-4 ℃下制備10%肝勻漿，備用。另取肝右葉作病理組織學檢查。

1.3.2指標測定 檢測血清中ALT、AST和SDH及肝組織中的GSH-Px、MDA和SOD含量考察PLC對酒精性肝損傷的保護作用。所有測定方法按所購試劑盒說明進行。

1.3.3病理觀察 將5%甲醛溶液固定的肝組織石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察其病變。

2 結 果

2.1PLC對小鼠血清ALT、AST和SDH的影響 與正常組對比，模型組中血清ALT、AST和SDH顯著升高(P<0.05)；與模型組對比，PLC高、中劑量組能顯著降低血清中ALT、AST和SDH水平(P<0.05)；PLC低劑量組雖能降低血清中ALT、AST和SDH水平，但是無顯著性差異(P>0.05)，表明PLC能夠顯著降低血清中ALT、AST和SDH活性。見表1。

表1 PLC對小鼠血清ALT、AST和SDH的影響

2.2PLC對肝組織中GSH、MDA和SOD的影響 與空白組對比，模型組中肝組織GSH和SOD含量明顯降低(P<0.05)，MDA含量顯著升高(P<0.05)；與模型組對比，PLC高、中劑量組能顯著升高肝組織GSH和SOD含量(P<0.05)，降低MDA含量(P<0.05)，而PLC低劑量組雖能升高肝組織中GSH和SOD含量，降低MDA含量，但是無顯著性差異(P>0.05)，表明PLC能顯著降低肝組織中的MDA含量，升高GSH和SOD含量。見表2。

表2 PLC對小鼠肝組織中GSH、MDA和SOD的影響

2.3PLC對小鼠肝組織病理變化的影響 HE染色，在光鏡下發現，正常組肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細胞核明顯，結構正常。模型組小鼠肝組織中央靜脈明顯擴張，肝細胞壞死嚴重，胞質連成一片，幾乎看不到細胞膜，周圍大量炎性細胞浸潤，不同程度的氣球樣變及嗜酸性變；PLC低劑量組相對模型組肝細胞有些許改善，但是損傷依然嚴重；PLC中、高劑量組能明顯改善這種損傷，壞死細胞也已經修復，中央靜脈周圍只有少量的炎性細胞。見圖1。

圖1 各組小鼠肝組織病理變化(HE，200×)

3 討 論

酒精性肝損傷的致病因素單一明確，即長期大量的酒精攝入，但發病機制較為復雜，可能與酒精及其代謝產物的毒性作用、氧化應激、免疫介導和細胞因子、細胞凋亡、內毒素等多種因素有關〔2〕。

乙醇和乙醛的直接毒性作用是導致酒精性肝病的主要因素〔3〕。乙醇對肝的毒性是乙醇脫氫酶介導過度產生還原型腺嘌呤二核苷酸以及具有高度毒性的乙醛的結果。乙醇在代謝過程中發生異常的氧化還原反應，氧化型輔酶Ⅰ(NAD)轉變為還原型輔酶Ⅰ(NADH)，而NADH/NAD比值增高及乙醛所致的脂代謝和糖代謝紊亂是肝細胞損傷發生和加重的主要原因。

乙醛是高活性物質，可與肝細胞成分結合產生毒性。研究表明，乙醛對肝臟的毒性比乙醇更強，與酒精性肝損傷的發展密切相關。肝細胞線粒體內的乙醛可被乙醛脫氫酶氧化為乙酸，當乙醛脫氫酶活性降低時，未被氧化的乙醛進入血內，通過黃嘌呤氧化酶轉變為超氧化物，導致脂質過氧化，破壞細胞膜脂質，促進肝損傷。乙醛可作用于線粒體、微管、質膜等，引起肝細胞退變。此外，乙醛還可與細胞膜結合形成一種絡合物，這種絡合物作為一個新的抗原刺激物導致肝細胞再度損傷。總之，乙醛的肝毒性作用在酒精性肝損傷的發生發展中起重要的作用。

在肝細胞損傷、細胞膜通透性增加時，細胞內轉氨酶也可由于這種濃度梯差而滲漏入血中，可使血中酶活性增高1倍，因此轉氨酶是肝細胞損害的敏感標志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標，酒精性肝炎AST多增高且增高明顯。乙醇損害各種細胞器和酶的結構功能，并損害脂肪酸線粒體β-氧化，引起脂質過氧化反應，抑制谷胱甘肽的生物合成，減弱超過氧化酶的抗氧化功能，導致各種肝損傷，ALT、AST等指標升高〔4〕。MDA是脂質過氧化的終產物，它既能反映人體內氧化反應，也能作為損害因子對人體進行損傷。MDA具有強交聯性質，可使胞質、膜蛋白及某些酶交聯成二聚體或更大的聚合物，使其本身喪失活性、結構改變，乃至整個細胞功能喪失。GSH是一種低分子清除劑，是GSH-Px的底物，對脂自由基及脂質過氧化自由基等具有較強的清除作用〔5〕。機體氧化反應亢進時，GSH不斷消耗，可導致GSH不足以清除自由基，形成自由基的損傷。

已有研究表明，PLC對酒精誘導的胃黏膜急劇損傷有部分保護作用，可以保護胃黏膜免受無水酒精損傷并促進潰瘍愈合，預防硫代巴比妥酸活性反應物的增加和脂質過氧化，增加胃中谷胱甘肽的量和SOD與谷胱甘肽過氧化物酶(GST)活性，但是對胃組織中CAT無影響，其機制很有可能就是PLC的抗氧化作用〔6〕。

本結果顯示，PLC中和高劑量對酒精性肝損傷有一定的保護作用，可顯著降低血清ALT、AST和SDH，降低肝組織中MDA含量，升高GSH和SOD含量，顯著改善肝組織病理損傷，且呈明顯的量效關系，表明PLC抗酒精性肝損傷作用可能與其抗氧化、清除自由基相關，具體作用機制有待于進一步研究。

4 參考文獻

1秦冬梅,胡利萍,曹文疆,等.維藥菊苣提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用〔J〕.中國實驗方劑學,2011；17(7)：138-41.

2孫 龍,張 填,楊世忠.PPAR-α在老年大鼠酒精性肝損傷脂質過氧化中的作用〔J〕.中國老年學雜志,2006；26(12)：1671-3.

3賈 丹.肝臟磷脂酰膽堿對酒精性肝損傷的保護作用研究〔D〕.遼寧師范大學,2007.

4周可軍,鄧 雅.脂肝清膠囊對酒精性肝損傷的保護作用〔J〕.現代中西醫結合雜志,2009；18(33)：4069-70.

5李 勇,孔令青,高 洪,等.自由基與疾病研究進展〔J〕.動物醫學進展,2008；29(4)：85-8.

6熊 微.丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的合成及制劑研究〔D〕.華中科技大學,2006.