urantide對實驗性動脈粥樣硬化大鼠肝臟的影響

趙 娟 宋成軍 姜菊花 毛曉霞 苗光新 于海榮 李 穎 劉莎莎

(承德醫學院病理生理學教研室，河北 承德 067000)

動脈粥樣硬化(AS)時由于血脂水平明顯升高，超過了肝臟的代謝能力，導致脂肪肝。Schwimmer等〔1〕認為脂肪肝不僅僅是AS的檢測指標，而且還是AS早期調節因子，促進AS發生發展。Urantide是在人尾加壓素Ⅱ(hUⅡ)基礎上衍生的肽類尾加壓素Ⅱ(UⅡ)受體拮抗劑，本課題組已證實urantide對AS大鼠胸主動脈有一定的抗損傷作用〔2～4〕，本實驗擬進一步研究urantide對AS大鼠肝臟的作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物、藥品及高脂飼料的配制 健康雄性Wistar大鼠160只，體質量180～200 g，由吉林大學白求恩醫學部動物部提供〔許可證號：SCXK(吉)-2009-0004〕。urantide由上海華大天源生物科技有限公司合成；氟伐他汀(Flu)購自北京諾華制藥有限公司。高脂飼料的配制：基礎飼料，3.5%膽固醇，10%豬油，0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉，5%白糖。

1.2方法

1.2.1大鼠AS模型復制及實驗分組 Wistar大鼠隨機分為2組：①正常(NC)組，飼以普通飼料；②模型組，實驗開始時在飼以高脂飼料基礎上，每只大鼠給予腹腔注射維生素D3(Vit D3)70 U/kg，連續3 d，實驗周期為6 w。AS模型復制成功后，模型組再隨機分3組：AS組、陽性藥(Flu)組、urantide組。正常組和AS組每日尾靜脈注射生理鹽水30 μg/kg，連續14 d；陽性藥組每日給予Flu 5 μg/kg，連續14 d；urantide組每日尾靜脈注射urantide 30 μg/kg，給藥時間分別為3、7、14 d。

1.2.2標本采集 ①一般狀態：每周觀察大鼠精神狀態及飲食。②胸主動脈標本的采集：大鼠取血后，取胸主動脈約1 cm，用4%多聚甲醛固定，待形態學檢測。③肝臟標本采集：大鼠取血后，立即摘取肝臟，生理鹽水洗去血跡后稱重，計算肝系數(肝系數=肝臟重量/體重)，4%多聚甲醛固定，待形態學檢測。

1.2.3肝形態學檢測結果判定標準 按肝臟變性細胞或泡沫細胞的數量分以下4級：①Ⅰ級：正常肝細胞；②Ⅱ級(輕度)：變性細胞或泡沫細胞數﹤25%；③Ⅲ級(中度)：變性細胞或泡沫細胞數≥25%(﹤50%)；④Ⅳ級(重度)：變性細胞或泡沫細胞數≥50%。

2 結 果

2.1urantide對AS大鼠胸主動脈的影響 實驗6 w，NC組大鼠胸主動脈內膜、中膜和外膜分界清楚，血管內皮完整，中膜可見梭形平滑肌細胞，彈力纖維層結構清晰完整，呈環行排列，外膜為疏松結締組織。模型組大鼠胸主動脈內膜下出現明顯的鈣化、炎細胞浸潤、VSMC增生及泡沫樣細胞，彈力纖維發生變性、斷裂和崩解，中膜萎縮，為典型AS病理變化。表明成功建立AS大鼠模型。見圖1。

2.2urantide對AS大鼠肝系數的影響 AS組(6.13±0.23)與NC組(3.13±0.15)相比，肝系數明顯增加(P<0.01)；urantide組(3 d：5.36±0.13，7 d：4.93±0.06，14 d：4.60±0.20)〕及Flu組(4.42±0.02)肝系數較AS組明顯減少(P<0.01)，但各給藥組間比較無統計學意義。

2.3Urantide對AS大鼠肝臟形態學改變的影響 NC組大鼠肝臟形態規則，邊緣銳利，色紅有光澤；HE染色切片觀察，肝細胞排列正常，細胞核大而圓、居中，胞質中無泡沫細胞，無炎癥細胞浸潤，為Ⅰ級。AS組和各給藥組大鼠肝臟體積較正常組不同程度增大，包膜緊張，邊緣較鈍，質地略軟，切面均呈淡黃色而稍隆起，包膜外翻，觸之油膩感；鏡下AS組肝細胞內泡沫細胞大而多，散布在整個胞質中，肝細胞出現重度的脂肪變性和大量的炎癥細胞浸潤，脂肪變性細胞數≥50%，為Ⅳ級(重度)脂肪變性；而Flu組肝細胞內泡沫細胞較AS組數量減少，且大小不等，多分布在核的周圍，變形細胞數≥25%(<50%)，為Ⅲ級(中度)脂肪變性；urantide組給藥3 d時與AS組相比，脂肪變性減輕，但與Flu組相比脂肪變性減輕不明顯，變性細胞數≥25%(<50%)，為Ⅲ級脂肪變性；urantide組給藥7 d和14 d時與AS組相比，脂肪變性進一步減輕，接近于Flu組，變形細胞數≥25%(<50%)，為Ⅲ級脂肪變性。見圖2。

圖1 NC組與模型組實驗6 w后胸主動脈病改變(HE，×200)

圖2 各組肝臟形態學改變(HE，×200)

3 討 論

大量實驗與臨床資料證明，脂肪肝是促進AS形成的危險因素〔5〕。脂肪肝是脂肪沉積過多引起肝內脂肪變形細胞和泡沫細胞增多的一類臨床代謝性綜合征。它可以是一個獨立的原發性疾病，也可是AS等其他全身性疾病累及肝臟的病理表現，協同其他AS的致病因素一起促進AS的發生發展〔6〕。據此，本實驗在建立AS動物模型時，通過給大鼠喂養含有大量膽固醇、豬油和膽酸鈉等使血脂升高的飼料，增加大鼠出現脂肪肝的概率。結果顯示，模型組肝細胞內有重度的脂肪變性和泡沫細胞、炎癥細胞浸潤。肝內的泡沫細胞和炎癥細胞釋放大量AS的致病因子，增加血管內膜損傷和炎癥反應，加重AS病變，從而為成功復制AS模型發揮了重要的作用。

AS的發生是多因素、多層次及多位點相互作用的過程。尾加壓素Ⅱ(UⅡ)最早是從魚的脊髓尾部下垂體中分離出的生長抑素樣環肽，是促進AS發生、發展的主要發病機制之一〔7,8〕。urantide是迄今已知作用最強UⅡ受體拮抗劑，拮抗效應較其他化合物高50～100倍〔9,10〕。長期跟蹤國內外文獻，有關UⅡ受體拮抗劑urantide與AS的報道極少。迄今僅有的少量信息，基本上都來自本實驗室所做的一些工作，研究發現 UⅡ促進AS的發生、發展，而urantide可阻斷UⅡ這種促進作用，對AS有一定的保護作用〔2～4〕，但其在AS中具體作用機制還尚未闡明。本文結果顯示urantide可降低肝系數，減輕大鼠肝細胞脂肪變性。由此證實了我們的假設，urantide通過對肝臟脂肪變性的抑制作用，減輕了肝損傷后AS致病因子的釋放，緩解大鼠的AS病變。

4 參考文獻

1Schwimmer JB, Deutsch R, Behling C,etal. Fatty liver as a determinant of atherosclerosis〔J〕.Hepatology,2005;42: 610.

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