四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響

1.河北大學基礎醫學院，河北 保定 071000；2.河北省保定市兒童醫院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中學，河北 保定 0710000

四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響

王懷穎1范林林2胡亞南2孟德光2聶雷2沈莉3王爍3

1.河北大學基礎醫學院，河北 保定 071000；2.河北省保定市兒童醫院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中學，河北 保定 0710000

目的研究四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響。方法雄性KM小鼠分為青齡對照組、老齡對照組和四君子湯組，分光光度法檢測小鼠腦組織SOD活性、MDA水平的變化。結果與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織SOD活性降低，MDA水平升高。與老齡對照組相比，四君子湯組小鼠腦組織SOD活性升高，MDA水平下降。結論四君子湯可通過增強衰老小鼠腦組織抗氧化能力，達到延緩衰老的作用。

四君子湯；衰老；腦組織；抗氧化能力

氧化應激、氧化損傷的積累和抗氧化能力下降導致衰老發生[1，2]，而四君子湯能拮抗自由基損傷，改善內分泌功能，調節能量代謝[3]。本試驗以自然衰老小鼠為模型，觀察四君子湯對腦組織抗氧化能力的影響，為其臨床應用提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物：清潔級雄性KM小鼠，購自河北省實驗動物中心(合格證號804064)。

1.2 試劑：SOD測定試劑盒、MDA測定試劑盒，購自南京建成生物工程公司。

1.3 儀器：電子天平SL20001N，上海民橋精密科學儀器有限公司；低溫高速離心機X-22R，美國貝克曼；722 S 分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；RF-5301PC熒光分光光度計，日本島津。

2 方法

2.1 四君子湯制備 黨參、白術(炒)、茯苓、炙甘草，按2∶2∶2∶1組成，剪碎、浸泡、水煎，收集濾液，濾渣再次加水煎煮，合并兩次濾液，濃縮至2g/ml，4℃保存備用。

2.2 動物分組 KM小鼠分為青齡對照組(3月齡)、老齡對照組(12月齡)和四君子湯組(12月齡)。四君子湯組每日灌胃四君子湯12g·kg-1，其余兩組灌胃等量蒸餾水，共8周。8周后，斷頭處死動物，冰臺上剝離一側腦組織-70℃冰箱保存，用于生化指標測定。

2.3 腦組織生化指標測定 取-70℃冰箱保存腦組織加入適量裂解液進行組織勻漿。4℃，12000rpm離心20min，取上清液測定腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)濃度。具體操作按試劑盒說明書進行。蛋白定量用考馬斯亮藍法。

3 結果

3.1 四君子湯對小鼠腦組織SOD活性的影響 與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織SOD活性明顯降低(P<0.01)。四君子湯組小鼠腦組織SOD活性升高，高于老齡對照組，有顯著性差異(P<0.05)(表1)。

3.2 四君子湯對衰老小鼠腦組織MDA水平的影響 與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織MDA水平增高，有顯著性差異(P<0.01)。與老齡對照組相比，四君子湯組小鼠腦組織MDA水平下降，差異顯著(P<0.05)(表1)。

表1 不同組別小鼠腦組織SOD活性、MDA水平的變化

注：與老齡對照組比較，△P<0.05；與青齡對照組比較，*P<0.01。

4 討 論

衰老的確切機制目前還不明確，存在自由基、端粒、細胞凋亡等多種學說，其中自由基學說認為氧化損傷的積累和氧化防御機能的下降在衰老過程中起關鍵作用[4]。SOD是機體氧化防御機制的重要組成成分[5]，MDA則可客觀反映機體組織細胞脂質過氧化程度和自由基產生情況。

四君子湯出自《太平惠民和劑局方》，是中醫學健脾益氣的代表方劑，該方可明顯改善衰老模型小鼠學習記憶功能[6]，并且可增強衰老大鼠免疫功能[7]。小鼠增齡過程中氧化應激是腦老化的首要影響因素，氧化損傷的積累和抗氧化能力下降導致衰老發生[1,2]。而氧自由基損傷作用是神經細胞凋亡發生的重要機制之一[8]。老齡小鼠腦組織SOD活性下降，氧化產物MDA濃度增加，說明腦組織抗氧化能力下降。本試驗證實四君子湯可提高衰老小鼠腦組織SOD活性，降低MDA水平，說明四君子湯可增強腦組織抗氧化能力。這提示我們，四君子湯可通過清除自由基延緩衰老。

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[2]Haddadi M,Jahromi SR, Sagar BK,et al.Brain aging, memory impairment and oxidative stress: a study in Drosophia melanogaster[J].Behav Brain Res,2014,259(1):60-69.

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保定市科技攻關項目(06F04-3)，河北省中醫藥管理局科研計劃項目(2007101)。

王懷穎(1973-)，女，碩士，副教授，主要從事腦衰老機制的研究。

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1007-8517(2014)20-0017-01

2014.09.11)