江西地區漢族人群Diego和Dombrock血型基因頻率調查

肖 莉， 尤 榕

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

1955年Layrisse等[1]在委內瑞拉1例新生兒溶血病患兒的母親血清中發現了抗Dia。12年后，其對偶的抗Dib發現。Dia和Dib都能引起輸血反應和新生兒溶血病。1965年，Swangson等[2]在Dombrock(Do)女士血清中鑒定出一種抗體，對應于一種新的抗原，即Doa;1973年Molthan等[3]鑒定出了他的對偶抗體抗Dob。Dombrock血型不合的輸血也可造成溶血性輸血反應。在國際輸血協會(ISBT)的命名中，Dombrook血型系統的編號為014。至今，Dombrock血型系統包括2個常見抗原Do1(Doa)和Do2(Dob)，以及其他3個高頻率抗原 Do3(Gya)、Do4(Hy)和 Do5(Joa)。隨著Do血型遺傳多態性的分子基礎被揭示，目前已開始使用分子生物學技術直接鑒定Do血型基因。我們以江西地區漢族隨機無償獻血者的DNA為檢材直接做Diego(Di)、Do血型基因分型，以取得相應基因頻率的資料。

材料和方法

一、DNA樣本

取自江西地區200名漢族隨機無償獻血者，取300 μL ACD抗凝全血，使用TBG公司試劑盒抽提基因組DNA，DNA濃度在60 ng/μL左右，分離純化的DNA置－20℃凍存備用。

二、Di、Do 基因分型

采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物(PCRSSP)技術特異性擴增基因片段，使用深圳血液中心提供的分型試劑，分別鑒定Dia、Dib、Doa和Dob基因。所有基因特異性引物以及PCR反應內對照引物的序列見表1。

表1 分型特異性引物及內對照引物序列

三、擴增條件

1 μL DNA 標本加1 μL Taq 酶(0.33 ～0.5 單位)，再加8 μL 引物混合物，總體積為10 μL，然后放在擴增儀上擴增，條件為95℃ 5 min，95℃30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，循環 30 次，72 ℃ 5 min。擴增產物直接點樣于2%凝膠電泳，用TBE緩沖液電泳20 min，在紫外光下拍照記錄，每管都設有內對照引物。

四、統計學方法

應用直接計數法計算2個血型系統的基因頻率，并進行卡方檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

在200名無償獻血者中，Di血型查出2種基因表現型，分別為 Dia－b+196 例、Dia+b+4 例，Dia+b－及Dia－b－未檢出;Dia基因頻率為 0.01，Dib基因頻率為0.99。Dombrock血型查出3種基因表現型，分別為Doa+b－2例、Doa+b+16 例、Doa－b+182 例。Doa基因頻率為0.05，Dob基因頻率為0.95。χ2檢驗顯示觀察值與期望值差異無統計學意義(P＞0.05)，符合Hardy-Weinberg分布。見表2。

表2 江西地區漢族Di、Do血型分型結果

討 論

從80年代開始，血型的研究從使用血清學方法檢測血型抗原進入以分子生物學基礎的新時代，逐步形成了檢測血型抗原基因頻率的新方法。國內外早期對于紅細胞血型基因頻率的研究都是使用血清學方法，但是有些血型系統抗原的抗血清為稀有抗血清，難以獲得，價格不菲，從而使血清學方法存在局限性。而分子生物學方法檢測基因型準確，成本低，而且不易受標本保存期限的影響 ，因此幾乎可以完全替代血清學方法。

Di血型系統的Dia和Dib抗原均能引起輸血反應和新生兒溶血病[1]。2種抗原相比較，Dia抗原有很強的表達，可以引起新生兒溶血病，而Dib抗原比較少見。因此在輸血反應原因分析時應考慮到Di血型系統的不配合性。本研究結果顯示江西地區Di血型表現型多數為Dia－b+(196例)、少數為 Dia+b+(4 例)，Dia+b－及 Dia－b－未檢出;Dia基因頻率為0.01，Dib基因頻率為 0.99，與文獻[4]報道相符。Dia+b－及Dia－b－未檢測出可能與本研究檢測標本量較少有關，亦可能是本地區不存在這2種表現型，還有待于今后做進一步驗證。

Do血型不合的輸血也可造成溶血性輸血反應，尚未見有自然發生的Do血型抗體。抗Doa、抗Dob、抗Gya和抗Hy一般都為IgG，均不結合補體。但抗Doa可以縮短Do血型不相容的輸入體內紅細胞的生存期，并能引起速發型溶血性輸血反應。抗Dob可以引起速發型和遲發型溶血性輸血反應。本研究 Do血型表現型多數為 Doa－b+(186例)、少數為 Doa+b+(16例)和 Doa+b－(2例)。至今未見Do血型抗體不合引起的新生兒溶血病的報道。隨著方法學的建立和便于使用，也許會有更多的關于Do血型的臨床應用研究。

[1]劉達莊.免疫血液學[M].上海:上海科技出版社，2002:81-82.

[2]Swanson J，Polesky HF.A'new'blood group antigen，Doa[J].Nature，1965，206:313.

[3]Molthan L，Crawford MN，Tippett P.Enlargement ofthe Dombrock blood group system:the finding of anti-Do b[J].Vox Sang，1973，24(4):382-384.

[4]劉孟黎，蔣冬玲，劉 晟.Diego血型基因在西安地區漢族人群中的頻率分布[J].西安交通大學學報(醫學版)，2003，24(4):348-349.