江西地區漢族人群Diego和Dombrock血型基因頻率調查

肖 莉， 尤 榕

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

1955年Layrisse等[1]在委內瑞拉1例新生兒溶血病患兒的母親血清中發現了抗Dia。12年后，其對偶的抗Dib發現。Dia和Dib都能引起輸血反應和新生兒溶血病。1965年，Swangson等[2]在Dombrock(Do)女士血清中鑒定出一種抗體，對應于一種新的抗原，即Doa;1973年Molthan等[3]鑒定出了他的對偶抗體抗Dob。Dombrock血型不合的輸血也可造成溶血性輸血反應。在國際輸血協會(ISBT)的命名中，Dombrook血型系統的編號為014。至今，Dombrock血型系統包括2個常見抗原Do1(Doa)和Do2(Dob)，以及其他3個高頻率抗原 Do3(Gya)、Do4(Hy)和 Do5(Joa)。隨著Do血型遺傳多態性的分子基礎被揭示，目前已開始使用分子生物學技術直接鑒定Do血型基因。我們以江西地區漢族隨機無償獻血者的DNA為檢材直接做Diego(Di)、Do血型基因分型，以取得相應基因頻率的資料。

材料和方法

一、DNA樣本

取自江西地區200名漢族隨機無償獻血者，取300 μL ACD抗凝全血，使用TBG公司試劑盒抽提基因組DNA，DNA濃度在60 ng/μL左右，分離純化的DNA置－20℃凍存備用。

二、Di、Do 基因分型

采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物(PCRSSP)技術特異性擴增基因片段，使用深圳血液中心提供的分型試劑，分別鑒定Dia、Dib、Doa和Dob基因。所有基因特異性引物以及PCR反應內對照引物的序列見表1。

表1 分型特異性引物及內對照引物序列

三、擴增條件

1 μL DNA 標本加1 μL Taq 酶(0.33 ～0.5 單位)，再加8 μL 引物混合物，總體積為10 μL，然后放在擴增儀上擴增，條件為95℃ 5 min，95℃30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，循環 30 次，72 ℃ 5 min。擴增產物直接點樣于2%凝膠電泳，用TBE緩沖液電泳20 min，在紫外光下拍照記錄，每管都設有內對照引物。

四、統計學方法

應用直接計數法計算2個血型系統的基因頻率，并進行卡方檢驗。……