1HPLC法測定白子菜中黃酮類物質的含量

1.廣西中醫藥大學制藥廠，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001；3.廣西壯族自治區婦幼保健院 廣西 南寧 530001

1HPLC法測定白子菜中黃酮類物質的含量

彭勇1徐業燕3杜成智2*

1.廣西中醫藥大學制藥廠，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001；3.廣西壯族自治區婦幼保健院 廣西 南寧 530001

目的建立白子菜中黃酮類物質(蘆丁)的含量測定方法。方法采用Waters Symmetry C18色譜柱，流動相為甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，檢測波長為358nm，柱溫25℃。結果蘆丁在0.0232～0.116μg (r=0.9998)范圍內線性關系良好，平均加樣回收率為99.4%，RSD為0.9%。結論該法簡便可行，結果準確，重復性好，可用于該藥材的含量測定。

白子菜；HPLC；蘆丁

白子菜是菊科植物白子菜Gynuradivaricata(L.)DC.的全草，別名白背三七、大肥牛、槍刀藥、清心菜、土生地、白仔菜藥等[1]，多年生草本植物，主產于廣西，在南方各省均有分布。全草消熱解毒，活血化淤，去風消腫，根入藥，有瀉火、涼血、生津之功效，是民間治療乳腺炎、關節炎、氣管炎等各種炎癥常見中草藥[2]。現代藥理學研究表明[3-4]，以上功效與黃酮化合物有關。為有效控制藥材質量，本研究參考相關文獻[5-6]建立了白子菜中蘆丁的含量測定方法。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1260 Series高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機，自動進樣器 (G1329B)，柱溫箱；KQ3200B型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)；LG16-WA臺式高速離心機(北京京立離心機有限公司)；超純水系統(MILLIPORE)；電子分析天平(CP224S，Sartorius 德國)。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100080-200707)。白子菜(采自南寧市郊區)由廣西中醫藥大學藥用植物教研室鑒定為菊科植物Gynura divaricata(L.)DC.的全草。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Waters Symmetry C18色譜柱(250mm ×4.6mm,5μm)，柱溫25℃；流動相: 甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，流速1.0ml/min；檢測波長358nm，進樣量10μl。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml含蘆丁0.58mg的溶液，即得蘆丁儲備液。

2.3 供試品的制備 取60℃烘干的白子菜地上部分粉碎后，過篩備用。精密稱取經過前處理的白子菜粗粉1g，精密加入甲醇25ml，精密稱定后超聲處理30min，放冷，補足減失重量。濾過后取續濾液離心10min，靜置，用0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.4 系統適應性試驗 吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀，按“2.1 項”下色譜條件記錄色譜圖，色譜圖見圖1-2，蘆丁峰與鄰近峰達到基線分離，分離度良好(R>1. 5)。

2.5 線性試驗 精密吸取對照品儲備液適量，加甲醇定容，配制系列對照品溶液，分別吸取10μl注入高效液相色譜儀，按“2.1項”下色譜條件測定峰面積。以對照品的進樣量(μg)對峰面積進行線性回歸，求得回歸方程，為Y=16987X-28.1，r=0.9998，線性范圍為0.0232～0.116μg。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μl，重復進樣6次，依次測定。測得RSD為0.09%(n= 6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗 取供試品溶液按“2.1項”下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12h進樣測定，測得結果RSD為0.79% (n = 6)。結果表明樣品溶液在12h內穩定。

2.8 重復性試驗 取白子菜藥材，按“2.3項”下供試品溶液的制備方法平行制備供試品溶液6份并依法測定，計算得大蘆丁平均含量為0.543mg/g，RSD為1.6% ( n = 6)，說明該法重復性較好。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量并經前處理的藥材6份，取約1g，精密稱定，分別精密加入一定量的蘆丁對照品溶液，其余操作按2.3項下供試品溶液的制備方法，測定，計算，結果蘆丁平均加樣回收率為99.4%，RSD=1.6% (n=6 )，說明本方法準確度較好。結果見表1。

表1加樣回收率試驗結果(n=6)

原有量/mg加入量/mg測定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0 53740 58001 112399 1299 40 90 54280 58001 121499 760 54470 58001 122199 550 53810 58001 109798 550 53960 58001 1253101 00 54160 58001 112598 43

2.10 樣品含量測定 取6批樣品，按“2.3項”制備供試品溶液，在“2.1項”色譜條件測定，結果見表2。

表2 含量測定結果(n=3)

3 討論

3.1 在實驗過程中，曾分別采用不同比例的乙醇、甲醇超聲提取和回流考察提取率，結果顯示100%甲醇超聲提取即可較好去除干擾雜質又可提取完全效果最佳。

3.2 在流動相的選擇中，分別考察了多種流動相的分離效果，經過實驗分析，綜合考慮了分離效果、基線平穩、操作方便性等情況，最終確定甲醇-1%冰醋酸(35∶65)為最佳流動相，該條件下測定物質出峰快，與雜質峰的分離度均達到1.5以上。

3.3 白子菜的化學成分研究發現其含有黃酮類物質。近現代藥理學研究表明，白子菜的藥用效果與黃酮化合物有關。國內生物醫藥企業通過技術開發、粗加工、精細提取人體生理活性有效成分，加工提取白子菜濃縮汁、固體飲料、凍干產品、萃取物(黃酮、多糖提取)等系列產品。本方法對白子菜藥材中蘆丁的含量測定方法進行初步探索。該法簡便可行，結果準確，重復性好，可用于白子菜藥材及含白子菜制劑中蘆丁的含量測定。

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草[M ]. 上海: 上?？茖W技術出版社, 1999: 7841

[2] 廣東植物研究所. 海南植物志[M]. 北京:北京科技出版社, 1974: 416

[3] 姜曼花，胡劍卓，邱文高，等. 白背三七多糖和黃酮降血糖及耐缺氧作用[J]. 中國醫院藥學雜志, 2009，29(13)：1074-1076.

[4] 俞浩，毛斌斌，周國梁，等.白背三七總黃酮對糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 食品科學, 2013, 34(15): 295-298.

[5] 黃騏，林榮華，鄭釗，等. 白子菜總黃酮含量的測定[J]. 福建師范大學學報(自然科學版), 2006，22(2)：118-120.

[6] 林榮華，代容春，陳由強. 白子菜總黃酮提取工藝研究[J]. 福建輕紡, 2009, (6): 28-30.

DeterminationofRutininGynuradivaricata(L.)DC.byHPLC

PENG Yong1, XU Ye-yan3, DU Cheng-zhi2*

1. Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；2.Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；3. Guangxi Maternal and Child Health Hospital, Nanning, Guangxi,530001

Objective: To establish a HPLC method for the determination of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..MethodWaters Symmetry C18 analytical column was used, mobile phase: methanol-1% glacial acetic acid (35∶65), UV detection wavelength was at 358nm; Column temperature was at 25℃.ResultUnder the chromatographic conditions used, the calibration curve of Rutin was linear in the range of 0.0232～0.116μg (r=0.9998). The average recoveries was 99.4%, RSD: 0.9%.ConclusionThe method is accurate, effective and feasible. It can be used for the determination of the contents of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..

Gynuradivaricata(L.)DC.; HPLC; Rutin

廣西壯族自治區教育廳科研項目(201106LX263)；廣西中醫學院校級課題(P2010012)。

彭勇，男，廣西南寧人，初級藥師，從事藥物分析研究。E-mail：837631027@qq.com

杜成智，男，講師，E-mail：276561774@qq.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)07-0020-02

2014.02.17)