HPLC法測定跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的含量

中國人民解放軍第三0三醫院藥劑科,廣西 南寧 530021

HPLC法測定跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的含量

莫宣忠唐蓮芳質吳龍云

中國人民解放軍第三0三醫院藥劑科,廣西 南寧 530021

目的建立用HPLC法測定跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的含量及含量均勻度的方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6×250mm，5μm)，以甲醇-水(80∶20)為流動相；柱溫為室溫，流速為1ml/min，檢測波長為270nm，進樣量為20μl。結果以丹參酮ⅡA對照品的進樣量為橫坐標，丹參酮ⅡA對照品峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=2.78×106C-1.43×104r=1.0000，結果表明丹參酮ⅡA在進樣量3.011～66.27μg/ml范圍內線性關系良好。結論該方法簡便、準確，可用于跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的質量控制。

丹參酮ⅡA；跌打生骨膠囊；HPLC；含量測定

跌打生骨膠囊由衛生部藥品標準中藥成方制劑跌打生骨片改劑而成的膠囊，是由戰骨、腫節風、自然銅、丹參、延胡索、牛膝、杜仲等七味藥組成的復方制劑，具有活血祛瘀、消腫止痛、強筋健骨的功效，用于骨折等癥。為控制跌打生骨膠囊質量，保證藥品的安全、有效，本文采用HPLC法測定了丹參中主要成份丹參酮ⅡA的含量及含量均勻度。

1 儀器與試藥

LC-10AP型高效液相色譜儀(日本島津公司)；SPD-10Avp紫外-可見檢測器；LC-10ATVP7725(i)型手動進樣器；威瑪龍色譜數據工作站；Aglient 8456紫外可見分光光度計；kh-250db型超聲處理器(昆山禾創超聲儀器有限公司)。

丹參酮ⅡA(批號：100047-201001，中國藥品生物制品檢定所)；跌打生骨膠囊(購自A廠，共10批)；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；流動相：甲醇-水(80∶20)；流速：1ml/min；檢測波長：270nm；柱溫：室溫；進樣量：20μl，理論塔板數按丹參酮Ⅱ峰計算不低于5000。在上述色譜條件下，供試品中丹參酮Ⅱ能完全分離,對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮ⅡA16μg)。精密稱取綠原酸對照品10.48mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備溶液。精密量取該液5ml加甲醇稀釋至25ml，制成每1ml約含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 避光操作。取本品裝量差異項下的內容物，研細，取約0.75g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，通過已處理好的中性氧化鋁柱(100～200目，3g，內徑8～10mm)，再用甲醇20ml洗脫，合并洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并移至10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

取本品10包，研細，精密稱定，稱取適量(約相當0.28g)，置50ml的容量瓶中，加入甲醇約35ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，根據丹參酮ⅡA面積，以外標法計算供試品中丹參酮ⅡA含量。

2.5 線性關系考察 精密稱密量取丹參酮ⅡA對照品11.82mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精取1、2、5、2、3、4ml，分別加甲醇稀釋至50、50、50、10、10、10ml，分別精密吸取上述對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，按擬定的條件測定。以丹參酮ⅡA對照品的進樣量為橫坐標，丹參酮ⅡA對照品峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=2.69×106C-1.43×104，r=1.0000，結果表明丹參酮ⅡA在進樣量3.011～66.27μg/ml范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗 取供試品溶液(批號20100601)，連續進樣6次，測定丹參酮ⅡA的峰面積。6次測定結果RSD為0.38%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號：20100602)10μl，分別于0、4、8、12、24小時進行測定，其峰面積RSD為0.45%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8 陰性對照試驗 按處方比例制成缺丹參的陰性樣品，按上述供試品制備方法制成缺丹參陰性溶液。按上述色譜條件進行測定，結果在丹參酮ⅡA出峰位置無其它干擾峰，表明處方中其它成分對測定無干擾。

2.9 重復性試驗 取樣品(批號：20100602)按樣品溶液制備項下的方法制備供試品溶液6份，進樣20μl，按上述色譜條件測定，計算含量，求得丹參酮ⅡA平均含量為16.77 mg/g，RSD為1.35%(n=6)，表明重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗 采用加樣回收試驗的方法。取20100601批供試品，研細，備用。精密稱取上述細粉約0.375g共9份，置具塞錐形瓶中，依次精密加入丹參酮ⅡA對照品溶液(24.03μg/ml)3、3、3、5、5、5、7、7、7ml，再依次精密加入甲醇的溶液27、27、27、25、25、25、23、23、23ml，密塞，稱定重量，照上述測定法測定丹參酮ⅡA的含量，計算回收率。由表1可得，本方法測定丹參酮ⅡA的含量準確度高。

2.11 樣品中丹參酮ⅡA的含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標法計算，結果見表2。

表2 樣品含量及含量均勻度測定結果

2.12 樣品中丹參酮ⅡA的含量均勻度測定 取樣品3批，按供試品溶液制備方法提取，以上述色譜條件依法測定丹參酮ⅡA含量均勻度，結果見表2。

3 討論

3.1 波長的選擇 依據《中國藥典》2010年版一部，丹參酮ⅡA在本品中270nm[1]有最大吸收波長；故選擇270nm作為本品的檢驗波長。

3.2 流動相的選擇 本品為復方制劑，含有多種成分，雜質組分較多，曾采用甲醇-水(85∶15)[2]作為流動相，但分離效果不理想，后采用甲醇-水(80∶20)作為流動相，結果表明丹參酮ⅡA的峰型和分離度較好。

[1]國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]譚生建，陳培讓，王建社，等.RP-HPLC法測定抗栓保心片中丹參酮ⅡA的含量[J].中國中藥雜志，1999，24(3)：154.

DetermthecontentanduniformityoftanshinoneuⅡAinDiedashengguCapsulesbyHPLC

MO Xuan-zhong, TANG Lian-fangzhi, WU Long-yun

ObjectiveTo establish method for determining the content and uniformity of tanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules by HPLC.MethodsThe Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm, 5μm) was used and mobile phase was methanol: water (80∶20), and its temperature was used at room temperature, with the flow rate of 1.0ml/min and the wavelength of detection of 270 nm, and the injection amount of 20μl.ResultsTanshinonellⅡA maleat showed a good linear relationship in the range of 3.011-66.27μg/ml, Y=2.78×106C-1.43×104r=1.0000.ConclusionsThe method is simple, accurate, and can be used to determine the content assaying of TanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules.

莫宣忠，主管藥師，主要從事醫院藥學研究。E-mail：13471002169@163.com

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1007-8517(2014)12-0012-02

2014.03.25)