鹽酸氨溴索注射液安全性評價研究

李逢春

·實(shí)驗(yàn)研究·

鹽酸氨溴索注射液安全性評價研究

李逢春

目的 評價鹽酸氨溴索注射液注射給藥的安全性。方法 按照《化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求開展豚鼠全身主動過敏試驗(yàn)、大鼠被動皮膚過敏試驗(yàn)、體外溶血試驗(yàn)和家兔血管刺激試驗(yàn)。結(jié)果 豚鼠全身主動過敏性試驗(yàn)和大鼠被動皮膚過敏性試驗(yàn)反應(yīng)為陰性；對家兔給藥部位血管無明顯刺激作用；對家兔紅細(xì)胞無溶血和凝集作用。結(jié)論 鹽酸氨溴索注射液安全性良好, 但要合理用藥。

鹽酸氨溴索注射液；安全性試驗(yàn)；過敏反應(yīng)；溶血試驗(yàn)；血管刺激

鹽酸氨溴索注射液為呼吸科常用藥物, 適用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急、慢性呼吸道疾病, 早產(chǎn)兒及新生兒呼吸道窘迫綜合征(IRDS)的治療。2012年國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布第49期藥品不良反應(yīng)信息通報中提醒公眾警惕“鹽酸氨溴索注射液”存在嚴(yán)重過敏反應(yīng)。2011年,國家藥品不良反應(yīng)中心共收到2973例鹽酸氨溴索注射液不良反應(yīng)事件報告, 嚴(yán)重病例有169例, 79例為兒童病例［1］。我國現(xiàn)有11個藥品生產(chǎn)企業(yè)擁有21個鹽酸氨溴索批準(zhǔn)文號,但在已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn)資料中未見有關(guān)安全性評價方面的研究報告。為了提高臨床合理用藥, 按照藥物制劑準(zhǔn)則和注射劑安全性評價的相關(guān)要求, 對鹽酸氨溴索注射液展開了安全性評價試驗(yàn), 具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 動物：豚鼠, 普通級, 體重300～400 g, 雌雄不拘,河南省康達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供；SD大鼠, 清潔級, 體重180～220 g, 雌雄各半, 河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供；日本大耳白家兔, 普通級, 體重2.0～3.0 kg, 雌雄不拘, 河南省康達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供。

1.2 儀器與試劑 PB4002-S型電子天平, 瑞士METTLER TOLEDO儀器有限公司。SF2000型三按鍵電子數(shù)顯卡尺,桂林廣陸數(shù)字測控股份有限公司。CH30型顯微鏡, 日本Olympus公司。DR-HW-1型電熱恒溫水溫箱, 北京西城區(qū)醫(yī)療器械廠。試劑：鹽酸氨溴索注射液, 批號12040822, 規(guī)格：2 ml:15 mg, 國內(nèi)A公司；氯化鈉注射液, 批號A110105C, 河南科倫藥業(yè)有限公司；牛血清白蛋白, 批號32093239, 北京索萊寶科技有限公司；依文思蘭, 批號87-04-01, 上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝廠進(jìn)口分裝。

1.3 方法

1.3.1 全身主動過敏性試驗(yàn) 取豚鼠24只, 均分為4組：①陰性對照組, 給予0.9%氯化鈉注射液；②陽性對照組,給予0.5%牛血清白蛋白；③高劑量組, 經(jīng)過劑量預(yù)試, 選用3.8 mg/ml濃度為高劑量濃度, 致敏時腹腔注射0.5 ml, 激發(fā)時靜脈注射1.0 ml；④ 低劑量組, 給藥濃度為1.9 mg/ml, 致敏時腹腔注射0.5 ml, 激發(fā)時靜脈注射1.0 ml。隔日腹腔注射供試品共3次進(jìn)行致敏, 然后各組再均分為兩組, 分別在首次注射后第14天和第21天, 進(jìn)行激發(fā)。觀察每只動物的癥狀反應(yīng)［2-5］。

1.3.2 被動皮膚過敏性試驗(yàn)

1.3.2.1 抗體的制備 取大鼠8只, 均分為4組：①陰性對照組, 給予0.9%氯化鈉注射液；②陽性對照組, 給予0.5%牛血清白蛋白；③高劑量組, 給藥濃度為3.8 mg/ml, 容積0.5 ml；④低劑量組, 給藥濃度為1.9 mg/ml, 容積0.5 ml。隔日腹腔注射供試品, 共3次, 進(jìn)行致敏。首次致敏后第14天采血, 2000 r/min離心10 min, 分離血清。放置-20℃保存, 2周以內(nèi)備用。

1.3.2.2 試驗(yàn)方法 取大鼠24只, 均分為4組：①陰性對照組；②陽性對照組；③高劑量組, ④低劑量組。試驗(yàn)前動物背部脫毛(3×4)cm2, 然后皮內(nèi)注射各對應(yīng)組的抗血清0.1 ml (抗血清的稀釋度為1∶4), 進(jìn)行被動致敏。48 h后各組分別靜脈注射含1%依文思蘭的對應(yīng)供試品溶液1.0 ml, 進(jìn)行激發(fā)。30 min后脫臼處死各組動物, 剪取背部皮膚, 測量皮膚內(nèi)層藍(lán)色反應(yīng)斑的直徑, 進(jìn)行比較［2-4］。

1.3.3 體外溶血試驗(yàn)

1.3.3.1 2%紅細(xì)胞懸液的配制 取家兔1只, 心臟取血10 ml,脫纖處理, 然后倒入吸管內(nèi), 加氯化鈉注射液, 1500 r/min離心15 min, 倒去上清液, 沉淀的紅細(xì)胞再用氯化鈉注射液洗滌3次［1,5］。將紅細(xì)胞按照用氯化鈉注射液配成2%的混懸液,供試驗(yàn)用。

1.3.3.2 試驗(yàn)方法 取潔凈的試管7支, 進(jìn)行編號, 1～5號管編為受試藥物管, 6號管編為陰性對照管, 7號管編為陽性對照管。按表1所示加入對應(yīng)試液, 混勻后, 置(37±0.5)℃的水浴鍋, 每隔15分鐘觀察1次, 1 h后, 每隔1小時觀察1次, 最長觀察3 h。

表1 體外溶血試驗(yàn)(ml)

1.3.4 血管刺激性試驗(yàn) 經(jīng)過劑量預(yù)試, 試驗(yàn)選用2 ml/kg劑量作為試驗(yàn)劑量。取家兔4只, 采用同體自身對比法, 左耳緣靜脈注射給予0.9%氯化鈉注射液, 右耳緣靜脈給予鹽酸氨溴索注射液原液2 ml/kg, 1次/d, 連續(xù)7 d。給藥結(jié)束后,剪取動物耳緣靜脈2～3 cm供病理組織學(xué)檢查, 以了解刺激反應(yīng)的可逆程度［6,7］。

2 結(jié)果

2.1 全身主動過敏性試驗(yàn) 陽性對照組6只豚鼠激發(fā)后30 h死亡, 出現(xiàn)極強(qiáng)陽性反應(yīng), 陰性對照組和鹽酸氨溴索高劑量組、低劑量組激發(fā)后均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)。

2.2 被動皮膚過敏性試驗(yàn) 陽性對照組藍(lán)斑直徑(7.25±1.54)mm,大于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的5 mm, 呈陽性；陰性對照組和鹽酸氨溴索高、低劑量組均為0 mm, ＜5 mm, 呈陰性。

2.3 體外溶血試驗(yàn) 陽性對照管有溶血發(fā)生, 溶液呈澄明紅色, 管底幾乎無細(xì)胞殘留；陰性對照管和鹽酸氨溴索注射液對照管均未發(fā)生溶血或凝聚, 顯微鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)正常。

2.4 血管刺激性試驗(yàn) 在規(guī)定的時間內(nèi)進(jìn)行觀察, 家兔雙側(cè)耳部均未見充血水腫, 血管形態(tài)正常。病理組織檢查顯示,靜脈內(nèi)膜光滑、完整, 管腔無血栓, 鱗狀上皮無增生, 鱗狀下皮無充血、炎癥。

3 小結(jié)

近年來鹽酸氨溴索注射液臨床不良反應(yīng)出現(xiàn)增多的現(xiàn)象, 改變了人們通常認(rèn)為鹽酸氨溴索注射液耐受性好, 不良反應(yīng)輕的認(rèn)識。依據(jù)鹽酸氨溴索注射液說明書, 按照動物的等效劑量公式計算, 豚鼠的臨床等效劑量為150 mg/kg, 家兔的臨床等效劑量為73.2 mg/kg, 試驗(yàn)中豚鼠過敏試驗(yàn)的安全劑量為10.7 mg/kg, 家兔血管刺激性試驗(yàn)的安全劑量為15 mg/ kg, 均小于動物的臨床等效劑量, 提示了臨床用藥要合理用藥, 不要超劑量用藥, 尤其兒童用藥更要嚴(yán)格用藥劑量。

［1］ 牛思遠(yuǎn), 陳思勤.國家藥監(jiān)局提醒警惕鹽酸氨溴索注射劑過敏.南方日報, 2012:12.

［2］ 衛(wèi)生部, 國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則.2005.

［3］ 徐叔云, 卞如廉, 陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2002: 237.

［4］ 袁伯俊, 王治喬.新藥臨床前安全性評價與實(shí)踐.第1版.北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社, 1997:46.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:附錄Ⅺ K.

［6］ 張廣偉, 徐曉月.注射用氨磷汀安全性研究.中國藥業(yè), 2011, 20(12):19-20.

［7］ 楊鵲.對豚鼠過敏實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一些問題的思考.中國藥理通訊, 2014, 21(4):19.

2014-04-04］

450003 鄭州, 河南省食品藥品檢驗(yàn)所