咽一方對小鼠耳腫脹及腹腔毛細血管通透性的影響

歐陽芳 薛敏菲 吳聲振

咽一方對小鼠耳腫脹及腹腔毛細血管通透性的影響

歐陽芳 薛敏菲 吳聲振

目的 研究咽一方對二甲苯所致小鼠耳腫脹及醋酸所致腹腔毛細血管通透性的影響。方法 采用二甲苯致小鼠耳腫脹法觀察咽一方對耳廓腫脹的抑制率, 小鼠尾靜脈注射伊文斯藍, 腹腔注射醋酸造模, 測定吸光度。結(jié)果 咽一方具有能顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的作用。結(jié)論 咽一方具有較強的抗炎作用。

咽一方；二甲苯；耳腫脹；醋酸；通透性；吸光度；小鼠

本院咽一方是由魚腥草、廣土牛膝、桔梗等藥組成的復方, 具有清熱化痰、止咳平喘、清利咽喉、養(yǎng)陰清火之功效,臨床證實對慢性咽炎患者的治療具有較為獨特的療效。本文擬咽一方對二甲苯所致小鼠耳腫脹及醋酸所致腹腔毛細血管通透性的影響研究, 探討其抗炎活性。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑與儀器 清潔級昆明種小鼠145只, 體質(zhì)量18～22 g, 均購自廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心。咽一方處方由魚腥草、廣土牛膝、桔梗等藥材組成, 均購自廣州致信中藥飲片有限公司, 經(jīng)本院藥檢室劉東文主任藥師鑒定為正品。咽一方湯劑(本院煎藥室制備)；吲哚美辛腸溶片(25 mg/片, 廣東華南藥業(yè)集團有限公司)；二甲苯(分析純, 國藥集團化學試劑公司)。紫外可見分光光度計(上海分析儀器廠), 電子天平(METTLER AE-200), 打孔器(廣州市新風工業(yè)公司)。

1.2 方法

1.2.1 咽一方對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響實驗［1,2］取雄性小鼠75只, 體質(zhì)量18～22 g, 編號、稱體質(zhì)量, 按體質(zhì)量排序, 首先按隨機數(shù)字表法隨機分為五組, 即生理鹽水組、吲哚美辛陽性對照組、咽一方低、中、高劑量組。咽一方低、中、高劑量組分別以相當于臨床等效劑量1、3、9倍濃度給藥；吲哚美辛陽性對照組以相當于臨床等效劑量3倍濃度給藥(58.5 mg/kg)；藥物劑量按照70 kg成人體表面積換算。小鼠均灌胃給藥, 給藥容積為20 ml/kg, 1次/d, 連續(xù)給藥7 d, 末次給藥后1 h, 于小鼠右耳兩面涂二甲苯50 μl, 左耳不涂為正常耳, 致炎30 min后, 脫頸椎處死, 用直徑9 mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片, 用電子天平準確稱取質(zhì)量, 計算腫脹度及抑制率。左右耳質(zhì)量之差為腫脹度, 抑制率(%)=［(生理鹽水組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/生理鹽水組平均腫脹度］×100%［3］。

1.2.2 咽一方對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響實驗［4］取小鼠70只, 雌雄各半, 體質(zhì)量18～22 g, 編號、稱體質(zhì)量,按體質(zhì)量排序, 性別、體質(zhì)量分層后按隨機數(shù)字表法隨機分為五組, 即生理鹽水組、吲哚美辛陽性對照組、咽一方低、中、高劑量組。各組分別灌胃給藥, 給藥方法同1.2.1, 1次/d, 連續(xù)給藥7 d。末次給藥后1 h, 于各小鼠尾靜脈注射1%伊文斯藍生理鹽水溶液0.02 ml/g, 隨即腹腔注射0.6%醋酸0.2 ml/只, 30 min后脫頸椎處死小鼠, 剖開腹腔, 用5 ml生理鹽水沖洗腹腔數(shù)次, 收集洗液定容為10 ml, 離心1000 r/min×5 min, 取上清液在紫外可見分光光度計590 nm處測定吸光度［5］, 比較各組間差異。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 所有資料均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗, 計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 咽一方對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響實驗 致炎后各組小鼠右耳立刻出現(xiàn)高度紅腫現(xiàn)象。實驗結(jié)果顯示, 吲哚美辛陽性對照組和咽一方組對二甲苯致的小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用, 咽一方組對腫脹的抑制率呈明顯的劑量依賴關(guān)系,抑制作用隨劑量的增加而增加(P＜0.05), 詳見表1。癥早期組織液等的滲出；咽一方各劑量組均能拮抗醋酸引起的炎癥, 降低炎癥導致的腹腔毛細血管通透性的異常增高。

表1 各組耳廓腫脹度及抑制率比較

咽一方是本院一名老中醫(yī)應用多年的經(jīng)驗方, 該方在多年臨床實踐基礎(chǔ)上總結(jié)并經(jīng)臨床證實療效確切而毒副作用少的一種中藥方劑。它充分體現(xiàn)了毒副作用少、愈后良好、不易復發(fā)、標本同治的中醫(yī)藥辨證論治的治療原則。實驗結(jié)果提示咽一方具有顯著的抗炎作用, 為臨床應用提供了可靠的科學理論及實驗依據(jù)。

2.2 咽一方對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響實驗 生理鹽水組、吲哚美辛陽性對照組、咽一方低、中、高劑量組的腹腔洗滌液吸光度值分別為(1.022±0.212)、(0.765±0.118)、(0.874±0.021)、(0.782±0.088)、(0.745±0.102)。吲哚美辛陽性對照組及咽一方低、中、高劑量組吸光度均低于生理鹽水組, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討論

慢性咽炎(pharyngo-laryngitis chronica)是咽部黏膜、黏膜下及淋巴組織的彌漫性炎癥, 常為上呼吸道慢性炎癥的一部分, 是臨床常見病、多發(fā)病。該病病程長, 纏綿難愈, 一直是耳鼻喉科的難題, 同時也給患者帶來很大的痛苦［6］。

慢性咽炎中醫(yī)治療中, 多以清熱解毒, 滋陰生津, 利咽消腫為主［7］。本院咽一方以魚腥草、桔梗為君藥, 共奏清熱化痰、宣肺利咽之功。魚腥草清熱解毒、消腫排膿功效與其抗菌、抗病毒、抗內(nèi)毒素及抗炎等藥理作用相關(guān)；桔梗利咽、祛痰、排膿功效與其鎮(zhèn)咳、祛痰及抗炎等藥理作用相關(guān)［8］。

炎癥是具有血管系統(tǒng)的機體對組織損傷或致病因子浸入所發(fā)生的以防御為主的反應, 包括以毛細血管擴張、通透性增加而引起炎性滲出和炎性腫脹為特征的早期炎癥, 以白細胞趨化游走為特征的中期炎癥和以結(jié)締組織增生、肉芽腫形成為特征的晚期炎癥［9］, 其局部反應主要包括紅、腫、熱、痛及功能障礙。二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細血管通透性增加是用于研究炎癥的常見動物模型［10］。

在二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹實驗中, 生理鹽水組小鼠造模后30 min耳廓腫脹明顯, 與生理鹽水組比較, 吲哚美辛陽性對照組及咽一方低、中、高劑量組小鼠耳廓腫脹度均顯著降低, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗結(jié)果表明咽一方能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹炎癥反應, 對腫脹的抑制率呈明顯的劑量依賴關(guān)系, 抑制作用隨劑量的增加而增加。

在醋酸所致的小鼠腹腔毛細血管通透性實驗中, 與生理鹽水組比較, 各給藥組的伊文斯藍滲出量均明顯降低, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗結(jié)果表明各給藥組均能減輕炎

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Effect of Yanyifang on ear swelling and permeability of abdomen capillary in mice model

OU Yang-fang, XUE Min-fei, WU Sheng-zhen. Department of Pharmaceutics, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan 528000, China

Objective To investigate the effect of Yanyifang on ear swelling induced by Xylene and permeability of abdomen capillary in mice model.Methods Xylene was used to induce ear swelling, and inhibition ratio of ear swelling was observed;Yiwensilan was injected into the vessel of mice tail, then acetic acid was injected into mice abdomen to cause inflammation and determine absorbency.Results Yanyifang could significantly inhibit Xylene induced ear swelling and acetic acid in duced permeability of abdomen capillary in mice model.Conclusion Yanyifang has significantly action on anti-inflammatory.

Yanyifang; Xylene; Ear swelling; Acetic acid; Permeability; Absorbance; Mice

2014-04-08］

佛山市醫(yī)學科學研究基金立項課題(項目編號：2013153)

528000 廣東省佛山市中醫(yī)院藥劑科