動物源食品雌激素檢測的樣品前處理技術進展

陳荷蓮+張曉慧

摘要：檢測動物源食品中的殘留雌性激素，樣品前處理必不可少且非常重要。本文從提取、凈化濃縮、衍生化等方面綜述了近年來從動物源食品中檢測雌性激素的樣品前處理技術，旨在為從事動物源食品中性激素檢測者及相關領域的研究者提供一定的參考。

關鍵詞：雌性激素；樣品前處理；技術

中圖分類號：S-3 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2014）35-0119-02

雌性激素是一類由動物性腺分泌或人工合成的低分子量、強親脂性、具有較高穩定性的類固醇類物質，具有控制動物繁育、促生長等作用。殘留于動物源食品中的雌性激素通過食物鏈被人體攝入后，對人體固有激素系統的正常工作構成嚴重干擾，尤其對胎兒、兒童的生殖系統、神經系統、免疫系統的正常發育威脅極大。為防止性激素污染食品被人食用，危害身體健康，必須對食品中性激素殘留進行檢測和分析。要有效地分析出動物源食品中殘留的性激素，除了有比較靈敏的檢測儀器和科學的檢測技術，樣品前處理必不可少且非常重要。樣品的前處理就是通過一定的程序和方法，將雌性激素從動物源食品的基體中分離出來，將樣品轉換為儀器可檢測的形式。本文將從提取、凈化、濃縮和衍生化等方面，對近年來動物源食品中雌性激素殘留檢測樣品前處理方法、技術作一概述，旨在為從事動物源食品中性激素檢測者及相關領域的研究者提供一定的參考。

一、樣品的提取

雌性激素在結構上是甾體類固醇物質，具有親脂性，在動物機體中以結合態和游離態兩種形式存在，堿性環境或水解酶的作用下能將其從結合態中游離出來。依據雌性激素的理化性質將其從動物源食品中分離出來的提取方式主要有：

1.震蕩浸取。將一定量樣品置于容器中，加入適當的溶劑，放置在振蕩器上震蕩一定時間，過濾，用溶劑淋洗樣品，合并濾液。周德剛等用甲醇振蕩提取雞肉中的己烯雌酚，回收率在64.39%～86.07%，回收標準偏差小于2.82%。曾東平等用乙醚作溶劑，振蕩提取豬肉樣品中的8種雌性激素，并分別做了豬肌肉中性激素各組分在高（50ug/kg）、中（10ug/kg）、低（<2.5ug/kg）三個濃度水平的試驗，其激素回收率在70%～110%之間，批內變異系數在4%～10%。

2.索氏提取。將樣品放在索氏提取器的回流提取器內，蒸發瓶中盛裝適當的有機溶劑，加熱溶劑。溶劑蒸汽經冷凝滴入回流提取器，對樣品進行浸泡提取，提取液通過虹吸流入蒸發瓶，如此反復多次，直至提取結束。金芬等將魚上腹部肌肉與無水硫酸鈉一起研磨，用二氯甲烷-甲醇混合液作溶劑索氏提取24小時，性激素壬基酚的回收率在70.4%～120.0%之間。該提取方法因樣品與溶劑反復接觸，提取效果好。但不足之處在于所需抽提溶劑用量較大。

3.超聲輔助提取法（SAE）。超聲輔助提取的作用有兩方面：通過空化作用使分子運動加快；同時將超聲波的能量傳遞給樣品，使組分脫附和溶解加快。林子俺等用無水乙醇作溶劑超聲10min，提取魚肉中的己烯雌酚、己烷雌酚等，回收率大于90%；林奕芝等用甲醇和乙腈分別對加標樣品進行超聲，提取肉樣中的雌二醇、炔雌醚、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇等雌性激素，回收率在80.3%～92.3%之間。實驗室中常與其他提取方法聯合使用

4.加速溶劑萃取。該方法是在較高的溫度（50℃-200℃）和壓力（10.3-20.6MPa）下用有機溶劑萃取，其過程是將選擇的有機溶劑由泵注入已填充樣品的萃取池后，加壓、加溫數分鐘后，萃取液由載氣吹入收集瓶中。李德鵬等采用加速溶劑萃取儀萃取經冷凍干燥、研磨處理后的黃海沿岸生物樣品，萃取劑為乙酸乙酯、萃取溫度為80℃，萃取兩次，每次5min，吹掃體積為60%時，測得雌二醇、雌三醇、己烯雌酚等平均回收率在88.1%～104.1%，且RSD在1.3%～8.3%之間。它的突出優點是有機溶劑用量少，速度快和回收率高。但需要在高溫和一定壓力下進行，對設備的要求較高。

5.基質固相分散萃取（matrix solid-phase dispersion，MSPD）。基質固相分散萃取是將樣品與固相吸附劑（C18、硅膠等）一起研磨，使樣品成為微小的碎片分散在固相吸附劑表面，然后將此混合物裝入空的SPE柱，用適當的溶劑將目標化合物洗脫下來。周建科用硅酸鎂填料和火腿腸樣品混合放入研缽中輕研，混勻裝柱，用正己烷洗滌，二氯甲烷洗提；己烯雌酚和己二烯雌酚的回收率在84%～93.8%之間，RSD在1.49%～4.50%區間。尹怡等用Florisil為分散劑與豬肌肉樣品混勻，裝柱，用乙酸乙酯作溶劑洗脫提取己烯雌酚；己烯雌酚回收率達到92.7%，RSD為4.2%。該法主要優點是萃取溶劑與目標化合物的接觸面大，有利于目標化合物的萃取，不足的是對樣品裝柱有一定要求。動物源食品基質成分復雜，要高效、快速地將其中的性激素提取出來，實際中不是單獨地應用以上某一種提取技術，而是常常將兩種或以上的提取技術有機地結合在一起。多種提取方法的結合，極大地提高了提取效率。

二、樣品的凈化與濃縮

用有機溶劑將雌性激素從動物源食品中提取出來時還夾雜著大量的脂肪、蛋白質等雜質，必須將這些雜質盡可能地除去。

1.液-液萃取。利用待測物與干擾雜質在兩種互不相容的溶劑中溶解度的差異而達到分離的目的。在動物源食品中雌性激素的凈化操作中，報道應用該純化技術的文獻很少。

2.固相萃取。利用固體吸附劑將液體樣品中的雌性激素吸附，使其與樣品基質中的干擾物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集雌性激素的目的。固相萃取柱的填料有PEP、HLB、CN（氰基）、C18等鍵合的硅膠。賴世云等采用HLB小柱凈化乳制品提取樣液，依次用2%的乙酸、2%氨水和10%的甲醇淋洗小柱，最后用5%的氨化甲醇洗脫。空白試驗顯示干擾基質影響在2%～3.2%之間，實驗結果顯示方法凈化效果好，并且有很好的重現性。endprint

3.凝膠滲透色譜。該法是根據溶質（被分離物質）分子量的不同，通過具有分子篩性質的固定相（凝膠），使物質達到分離。謝維平等將鯧魚樣品提取液經凝膠滲透色譜儀凈化后，用HPLC測試。從測試的HPLC譜圖上可以看出，得到了較純的目標組分提取物。牛宇敏等將動物性食品樣品提取液經凝膠滲透色譜凈化后，脂肪的去除率大于90%，3種目標化合物壬基酚、辛基酚和雙酚A的基質抑制率大于10%。凈化技術將提取物中絕大部分蛋白質、脂肪等雜質除掉，極大地提高了雌激素檢測的靈敏度，但要定量地檢測樣品基質中所含雌激素的含量，必須對凈化后的樣品進行定容。文獻報道的定容樣品溶液的濃縮技術有氮吹、真空旋轉蒸發等。

三、樣品的衍生化

衍生化的目的是提高待測物在選定的檢測儀器上的響應值或靈敏度。待測的雌性激素是否要進行衍生化處理應根據選擇的分離技術和檢測儀器而定。如曾東平等就用HFBA做酰化試劑將己烯雌酚、雌二醇等8種雌性激素進行衍生化，衍生化后的樣品沸點降低，用氣質色譜聯用技術對其進行檢測；陳捷等用三甲基碘硅烷做衍生化試劑，對動物肌肉組織中殘留的甾類激素進行了檢測。用氣相色譜法測試雌性激素時常用的衍生化試劑有硅烷化試劑酰化試劑和酯化試劑等。

殘留于動物源食品中的雌性激素是以痕量組分存在于樣品基質中，通過樣品前處理，可以富集痕量組分、消除基體干擾、提高方法靈敏度。隨著對食品安全的重視，動物源食品中雌性激素檢測朝著快速、高效的方向發展，各種樣品前處理技術聯合應用將更加緊密。快速高效、對環境污染少的前處理技術是今后樣品前處理的發展方向。

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基金項目：湖北省教育廳科學技術研究項目（B2013146），湖北省科技廳（2011CDC130）。

作者簡介：陳荷蓮（1968-），女，碩士，研究方向：有機合成及分析。endprint