一株轉基因兔源大腸桿菌的分離鑒定與防治

董真　金鐸　林家琪　展天松　顧敏　焦庫華　王彥紅　劉文博

摘要：從揚州大學轉基因實驗兔中分離到一株革蘭氏陰性桿菌，經鑒別培養和生化特性鑒定，確定為大腸桿菌，并進行了藥敏試驗。藥敏試驗結果表明，該菌株對氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，對復方新諾明和諾氟沙星等抗生素不敏感。

關鍵詞：大腸桿菌；分離；鑒定；防治

中圖分類號：S858.291文獻標識碼：B文章編號：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大腸桿菌是大腸桿菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的總稱。近年來，隨著養兔業的發展，兔大腸桿菌病已成為危害養兔業的主要傳染病之一。該病是由致病性大腸桿菌及其毒素引起的一種暴發性、死亡率很高的仔兔腸道性傳染病[1]。該病一年四季均可發生，陰雨潮濕和秋末春初等氣候多變季節多發，多侵害斷奶前后幼兔，發病率和死亡率較高，成年兔也有發生[2]。而轉基因動物由于飼養條件好，該類疾病未見報道，本文報道揚州大學動物醫院就診的一例轉基因兔的大腸桿菌感染，并進行了大腸桿菌分離和鑒定。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1病料來源2014年3月，揚州大學某實驗室出現了一只轉基因兔異常死亡，死亡前2～3 d表現為腹部臌脹，精神沉郁，食欲減退，糞便細小且兩頭較尖或成串狀，外包透明膠凍狀黏液。隨后表現為劇烈腹瀉，糞便呈稀水樣。剖檢后發現其喉部和氣管有出血點，肺水腫，脾腫大，腸系膜淋巴結水腫，腎臟有點狀出血，腸道充氣，內有出血點，并伴有水樣、膠凍樣液體。臨床診斷疑為大腸桿菌感染，需進一步進行實驗室檢測。

1.1.2培養基普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板。

1.1.3生化發酵管葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氫、尿素。

1.1.4藥敏紙片藥敏紙片有強力霉素（300 μg/片），慶大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），鏈霉素（10 μg/片），痢特靈（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），諾氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），復方新諾明（23.75 μg/片）。藥敏紙片均購于杭州微生物試劑有限公司，操作方法和判定標準參照公司操作方法與標準。

1.2試驗方法

1.2.1分離培養取死亡病兔的心、肝、脾、肺及腎臟內容物，分別劃線接種于普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板，37 ℃恒溫培養24 h觀察并記錄結果。將純化后的細菌涂片，革蘭氏染色后鏡檢。

1.2.2生化鑒定試驗將純化后的菌落接種于各生化發酵管中，37 ℃培養 5～7 d，觀察并記錄結果。同時按常規實驗方法進行IMVIC試驗。

1.2.3藥敏試驗采用紙片瓊脂擴散法，將純化后的細菌以劃線方式均勻致密涂布于普通平皿培養基上，取藥敏片貼到平皿培養基表面（為了使能準確的觀察結果，要將藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上），將平皿培養基置于37 ℃溫箱中培養24 h后，觀察并記錄結果。

2結果與分析

2.1細菌分離及培養特性

該菌呈短桿狀，兩端鈍圓，革蘭氏染色呈陰性。兼性厭氧，在普通營養瓊脂平板上表現為乳白色且表面光滑的圓形菌落，菌落邊緣整齊，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麥康凱平板中呈粉紅色。

摘要：從揚州大學轉基因實驗兔中分離到一株革蘭氏陰性桿菌，經鑒別培養和生化特性鑒定，確定為大腸桿菌，并進行了藥敏試驗。藥敏試驗結果表明，該菌株對氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，對復方新諾明和諾氟沙星等抗生素不敏感。

關鍵詞：大腸桿菌；分離；鑒定；防治

中圖分類號：S858.291文獻標識碼：B文章編號：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大腸桿菌是大腸桿菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的總稱。近年來，隨著養兔業的發展，兔大腸桿菌病已成為危害養兔業的主要傳染病之一。該病是由致病性大腸桿菌及其毒素引起的一種暴發性、死亡率很高的仔兔腸道性傳染病[1]。該病一年四季均可發生，陰雨潮濕和秋末春初等氣候多變季節多發，多侵害斷奶前后幼兔，發病率和死亡率較高，成年兔也有發生[2]。而轉基因動物由于飼養條件好，該類疾病未見報道，本文報道揚州大學動物醫院就診的一例轉基因兔的大腸桿菌感染，并進行了大腸桿菌分離和鑒定。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1病料來源2014年3月，揚州大學某實驗室出現了一只轉基因兔異常死亡，死亡前2～3 d表現為腹部臌脹，精神沉郁，食欲減退，糞便細小且兩頭較尖或成串狀，外包透明膠凍狀黏液。隨后表現為劇烈腹瀉，糞便呈稀水樣。剖檢后發現其喉部和氣管有出血點，肺水腫，脾腫大，腸系膜淋巴結水腫，腎臟有點狀出血，腸道充氣，內有出血點，并伴有水樣、膠凍樣液體。臨床診斷疑為大腸桿菌感染，需進一步進行實驗室檢測。

1.1.2培養基普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板。

1.1.3生化發酵管葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氫、尿素。

1.1.4藥敏紙片藥敏紙片有強力霉素（300 μg/片），慶大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），鏈霉素（10 μg/片），痢特靈（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），諾氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），復方新諾明（23.75 μg/片）。藥敏紙片均購于杭州微生物試劑有限公司，操作方法和判定標準參照公司操作方法與標準。

1.2試驗方法

1.2.1分離培養取死亡病兔的心、肝、脾、肺及腎臟內容物，分別劃線接種于普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板，37 ℃恒溫培養24 h觀察并記錄結果。將純化后的細菌涂片，革蘭氏染色后鏡檢。

1.2.2生化鑒定試驗將純化后的菌落接種于各生化發酵管中，37 ℃培養 5～7 d，觀察并記錄結果。同時按常規實驗方法進行IMVIC試驗。

1.2.3藥敏試驗采用紙片瓊脂擴散法，將純化后的細菌以劃線方式均勻致密涂布于普通平皿培養基上，取藥敏片貼到平皿培養基表面（為了使能準確的觀察結果，要將藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上），將平皿培養基置于37 ℃溫箱中培養24 h后，觀察并記錄結果。

2結果與分析

2.1細菌分離及培養特性

該菌呈短桿狀，兩端鈍圓，革蘭氏染色呈陰性。兼性厭氧，在普通營養瓊脂平板上表現為乳白色且表面光滑的圓形菌落，菌落邊緣整齊，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麥康凱平板中呈粉紅色。

摘要：從揚州大學轉基因實驗兔中分離到一株革蘭氏陰性桿菌，經鑒別培養和生化特性鑒定，確定為大腸桿菌，并進行了藥敏試驗。藥敏試驗結果表明，該菌株對氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，對復方新諾明和諾氟沙星等抗生素不敏感。

關鍵詞：大腸桿菌；分離；鑒定；防治

中圖分類號：S858.291文獻標識碼：B文章編號：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大腸桿菌是大腸桿菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的總稱。近年來，隨著養兔業的發展，兔大腸桿菌病已成為危害養兔業的主要傳染病之一。該病是由致病性大腸桿菌及其毒素引起的一種暴發性、死亡率很高的仔兔腸道性傳染病[1]。該病一年四季均可發生，陰雨潮濕和秋末春初等氣候多變季節多發，多侵害斷奶前后幼兔，發病率和死亡率較高，成年兔也有發生[2]。而轉基因動物由于飼養條件好，該類疾病未見報道，本文報道揚州大學動物醫院就診的一例轉基因兔的大腸桿菌感染，并進行了大腸桿菌分離和鑒定。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1病料來源2014年3月，揚州大學某實驗室出現了一只轉基因兔異常死亡，死亡前2～3 d表現為腹部臌脹，精神沉郁，食欲減退，糞便細小且兩頭較尖或成串狀，外包透明膠凍狀黏液。隨后表現為劇烈腹瀉，糞便呈稀水樣。剖檢后發現其喉部和氣管有出血點，肺水腫，脾腫大，腸系膜淋巴結水腫，腎臟有點狀出血，腸道充氣，內有出血點，并伴有水樣、膠凍樣液體。臨床診斷疑為大腸桿菌感染，需進一步進行實驗室檢測。

1.1.2培養基普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板。

1.1.3生化發酵管葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氫、尿素。

1.1.4藥敏紙片藥敏紙片有強力霉素（300 μg/片），慶大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），鏈霉素（10 μg/片），痢特靈（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），諾氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），復方新諾明（23.75 μg/片）。藥敏紙片均購于杭州微生物試劑有限公司，操作方法和判定標準參照公司操作方法與標準。

1.2試驗方法

1.2.1分離培養取死亡病兔的心、肝、脾、肺及腎臟內容物，分別劃線接種于普通營養瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱平板，37 ℃恒溫培養24 h觀察并記錄結果。將純化后的細菌涂片，革蘭氏染色后鏡檢。

1.2.2生化鑒定試驗將純化后的菌落接種于各生化發酵管中，37 ℃培養 5～7 d，觀察并記錄結果。同時按常規實驗方法進行IMVIC試驗。

1.2.3藥敏試驗采用紙片瓊脂擴散法，將純化后的細菌以劃線方式均勻致密涂布于普通平皿培養基上，取藥敏片貼到平皿培養基表面（為了使能準確的觀察結果，要將藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上），將平皿培養基置于37 ℃溫箱中培養24 h后，觀察并記錄結果。

2結果與分析

2.1細菌分離及培養特性

該菌呈短桿狀，兩端鈍圓，革蘭氏染色呈陰性。兼性厭氧，在普通營養瓊脂平板上表現為乳白色且表面光滑的圓形菌落，菌落邊緣整齊，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麥康凱平板中呈粉紅色。