貫葉連翹提取物中金絲桃素的含量測定

王建舫　崔德鳳　穆祥

摘要：本試驗旨在建立一種高效液相色譜-紫外檢測法（HPLC-UV）測定貫葉連翹提取物中金絲桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氫鈉（85∶15）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長588 nm，柱溫25 ℃。結果表明，金絲桃素在6～36 μg/mL范圍內線性關系良好（r=0.999 6），平均加樣回收率為98.86%（n=6），峰面積的相對標準偏差（RSD）為3.15%。此方法專屬性強、重復性好，可用于貫葉連翹提取物中金絲桃素的含量測定。

關鍵詞：貫葉連翹；金絲桃素；高效液相色譜；含量測定

中圖分類號：S853.7文獻標志碼：A文章編號：1007-273X（2014）05-0013-02

貫葉連翹（Hypericum performatum L.）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、調經活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金絲桃素具有光敏活性和光動力作用，有較好的抗病毒、抗腫瘤功效，同時也是貫葉連翹抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本試驗采用高效液相色譜法對貫葉連翹提取物中金絲桃素進行了含量測定，建立了一種專一性強、重復性好的測定方法，為貫葉連翹提取物的質量控制提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters Alliance e2695高效液相色譜儀；美國Millipore水純化系統；針筒式微孔濾膜過濾器（上海興亞凈化材料廠產品，孔徑0.22 μm）。

1.2藥品與試劑

金絲桃素（批號MUST-13121505，購自成都曼思特生物科技有限公司）；貫葉連翹提取物，購自北京經日今典科技有限公司；乙腈（色譜純，天津市光復精細化工研究所）。

2方法與結果

2.1色譜條件

YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉（85∶15）；流速1.0 mL/min；檢測波長588 nm；柱溫25 ℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取金絲桃素對照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成濃度為0.12 mg/mL的對照品貯存液。精密吸取金絲桃素標準品貯備液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分別放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取貫葉連翹提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm濾膜過濾，取續濾液，即得提取物供試品溶液。

2.3專屬性試驗

精密吸取濃度為24 μg/mL的金絲桃素對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，由色譜圖知，在金絲桃素對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰（圖1）。

2.4線性關系考察

分別精密吸取濃度為6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液20 μL，自動進樣注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以金絲桃素含量（μg/mL）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，計算回歸方程為y=74 196x-11 176，r=0.999 6，結果表明，在6～36 μg/mL范圍內，峰面積與金絲桃素濃度呈良好的線性關系（圖2）。

2.5精密度試驗

取濃度為24 μg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣20 μL，測定峰面積，結果峰面積的相對標

摘要：本試驗旨在建立一種高效液相色譜-紫外檢測法（HPLC-UV）測定貫葉連翹提取物中金絲桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氫鈉（85∶15）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長588 nm，柱溫25 ℃。結果表明，金絲桃素在6～36 μg/mL范圍內線性關系良好（r=0.999 6），平均加樣回收率為98.86%（n=6），峰面積的相對標準偏差（RSD）為3.15%。此方法專屬性強、重復性好，可用于貫葉連翹提取物中金絲桃素的含量測定。

關鍵詞：貫葉連翹；金絲桃素；高效液相色譜；含量測定

中圖分類號：S853.7文獻標志碼：A文章編號：1007-273X（2014）05-0013-02

貫葉連翹（Hypericum performatum L.）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、調經活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金絲桃素具有光敏活性和光動力作用，有較好的抗病毒、抗腫瘤功效，同時也是貫葉連翹抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本試驗采用高效液相色譜法對貫葉連翹提取物中金絲桃素進行了含量測定，建立了一種專一性強、重復性好的測定方法，為貫葉連翹提取物的質量控制提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters Alliance e2695高效液相色譜儀；美國Millipore水純化系統；針筒式微孔濾膜過濾器（上海興亞凈化材料廠產品，孔徑0.22 μm）。

1.2藥品與試劑

金絲桃素（批號MUST-13121505，購自成都曼思特生物科技有限公司）；貫葉連翹提取物，購自北京經日今典科技有限公司；乙腈（色譜純，天津市光復精細化工研究所）。

2方法與結果

2.1色譜條件

YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉（85∶15）；流速1.0 mL/min；檢測波長588 nm；柱溫25 ℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取金絲桃素對照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成濃度為0.12 mg/mL的對照品貯存液。精密吸取金絲桃素標準品貯備液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分別放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取貫葉連翹提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm濾膜過濾，取續濾液，即得提取物供試品溶液。

2.3專屬性試驗

精密吸取濃度為24 μg/mL的金絲桃素對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，由色譜圖知，在金絲桃素對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰（圖1）。

2.4線性關系考察

分別精密吸取濃度為6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液20 μL，自動進樣注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以金絲桃素含量（μg/mL）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，計算回歸方程為y=74 196x-11 176，r=0.999 6，結果表明，在6～36 μg/mL范圍內，峰面積與金絲桃素濃度呈良好的線性關系（圖2）。

2.5精密度試驗

取濃度為24 μg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣20 μL，測定峰面積，結果峰面積的相對標

摘要：本試驗旨在建立一種高效液相色譜-紫外檢測法（HPLC-UV）測定貫葉連翹提取物中金絲桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氫鈉（85∶15）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長588 nm，柱溫25 ℃。結果表明，金絲桃素在6～36 μg/mL范圍內線性關系良好（r=0.999 6），平均加樣回收率為98.86%（n=6），峰面積的相對標準偏差（RSD）為3.15%。此方法專屬性強、重復性好，可用于貫葉連翹提取物中金絲桃素的含量測定。

關鍵詞：貫葉連翹；金絲桃素；高效液相色譜；含量測定

中圖分類號：S853.7文獻標志碼：A文章編號：1007-273X（2014）05-0013-02

貫葉連翹（Hypericum performatum L.）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、調經活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金絲桃素具有光敏活性和光動力作用，有較好的抗病毒、抗腫瘤功效，同時也是貫葉連翹抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本試驗采用高效液相色譜法對貫葉連翹提取物中金絲桃素進行了含量測定，建立了一種專一性強、重復性好的測定方法，為貫葉連翹提取物的質量控制提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters Alliance e2695高效液相色譜儀；美國Millipore水純化系統；針筒式微孔濾膜過濾器（上海興亞凈化材料廠產品，孔徑0.22 μm）。

1.2藥品與試劑

金絲桃素（批號MUST-13121505，購自成都曼思特生物科技有限公司）；貫葉連翹提取物，購自北京經日今典科技有限公司；乙腈（色譜純，天津市光復精細化工研究所）。

2方法與結果

2.1色譜條件

YMC-Pack ODS-A色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉（85∶15）；流速1.0 mL/min；檢測波長588 nm；柱溫25 ℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取金絲桃素對照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成濃度為0.12 mg/mL的對照品貯存液。精密吸取金絲桃素標準品貯備液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分別放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取貫葉連翹提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm濾膜過濾，取續濾液，即得提取物供試品溶液。

2.3專屬性試驗

精密吸取濃度為24 μg/mL的金絲桃素對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，由色譜圖知，在金絲桃素對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰（圖1）。

2.4線性關系考察

分別精密吸取濃度為6、12、18、24、30、36 μg/mL的對照品溶液20 μL，自動進樣注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以金絲桃素含量（μg/mL）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，計算回歸方程為y=74 196x-11 176，r=0.999 6，結果表明，在6～36 μg/mL范圍內，峰面積與金絲桃素濃度呈良好的線性關系（圖2）。

2.5精密度試驗

取濃度為24 μg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣20 μL，測定峰面積，結果峰面積的相對標