葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶抗原、抗CCP抗體、類風(fēng)濕因子檢測診斷早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床研究

陳 琳,姜國平,王曉紅,呂英春,李慧穎,付 堃,陳 晶,韓 梅*

(吉林省人民醫(yī)院 1.血液風(fēng)濕科；2.檢驗科；吉林 長春130021)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的風(fēng)濕病,對健康的主要危害是致畸致殘,累及主要臟器或并發(fā)感染時可危及生命。在RA患者的身體中存在各種自身抗體,除了類風(fēng)濕因子外,近些年葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)抗原受到較多關(guān)注。國內(nèi)的一些研究表明GPI抗原在部分RA患者尤其是活動的RA患者血清中異常升高,具有診斷和評估疾病的意義[1]。因此,我們在臨床中對擬診早期RA患者進(jìn)行了GPI、抗CCP抗體、RF等檢測,進(jìn)行分析和總結(jié)。

1 材料與方法

1.1研究對象

1.1.1 RA患者組選擇自2008年1月至2011年6月在我院門診和住院的患者50例,其中男性19例,女性31例,年齡19-58歲,平均年齡36歲,病程均小于1年,以上患者均符合2009年ACR與EULAR制定的RA分類(診斷)標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.1.2 其他風(fēng)濕性疾病組(非RA組)選擇同期門診及住院的其他風(fēng)濕性疾病47例,男15例,女32例,年齡20-72歲,平均年齡47歲,包括SLE10例、PM/DM4例、pSS10例、UCTD2例、MCTD4例、BD3例、AS5例、OA7例、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎2例,以上疾病均符合國內(nèi)或國際相應(yīng)診斷(分類)標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.1.3 檢測內(nèi)容 97例患者均進(jìn)行以下項目檢測：GPI、抗CCP抗體、RF、血常規(guī)、血沉、C-反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、C4，RA組中28例患者完成了手MRI,其他患者完成雙手正斜位片。

1.2實(shí)驗方法

1.2.1 GPI抗原測定 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的GPI。實(shí)驗步驟：病人血清加入樣品液中,檢測時加陽性對照、陰性對照和GPI標(biāo)準(zhǔn)品(0、0.16、0.33、1.0、2.0、20.0 μg/ml)各100 μl,37℃1 h,棄樣本后PBS洗板3次,再加入酶標(biāo)記抗GPI抗體,37℃1 h,再次PBS洗板3次,加入OPD顯色液100 μl顯色10 mit后,2 mol/L硫酸50 μl終止顯色,酶標(biāo)儀490 nm讀板,參比波長630 nm。GPI的濃度臨界值為0.25 μg/ml

1.2.2 抗CCP抗體的測定 應(yīng)用ELISA法,抗CCP抗體>25U/ml被認(rèn)為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1RA組和非RA組GPI和抗CCP抗體、RF、ESR、CRP等指標(biāo)結(jié)果見表1,其中抗CCP、RF在兩組間存在顯著性差異。

表1 RA組和非RA組各實(shí)驗室觀察指標(biāo)

2.2 GPI抗原在RA組有34例陽性,陽性率68%；

在非RA組有32例陽性,陽性率為68%,兩組間比較無顯著差異(見表2)。

表2 GPI抗原在RA組和非RA組分布陽性比較

2.3 抗CCP抗體在RA組有46例陽性,陽性率92%；在非RA組有18例陽性,陽性率為38%,兩組間統(tǒng)計存在顯著差異(見表3)。

表3 抗CCP抗體在RA組和非RA組陽性分布表

2.4 RF在RA組有41例陽性,陽性率82 %；在非RA組有32例陽性,陽性率為68%,兩組間比較存在顯著差異(見表4)。

表4 RF在RA組和非RA組陽性分布表

2.5 GPI抗原、抗CCP抗體、RF對早期RA診斷的敏感性和特異性(見表5)。

表5 GPI抗原、抗CCP抗體、RF對早期RA診斷的敏感性和特異性

GPI抗原與抗CCP抗體比較，GPI抗原敏感性、特異性均顯著低于抗CCP抗體(P<0.01)； RF與抗CCP抗體比較，敏感性無統(tǒng)計學(xué)差異，特異性明顯低于抗CCP抗體(P<0.05)；GPI抗原與RF比較，敏感性明顯低于RF(P<0.05)，特異性相同均為32%。

3 討論

GPI抗原是一種多免疫活性的酶,廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)以及細(xì)胞外液中,尤其在關(guān)節(jié)腔內(nèi)具有較高的濃度。研究發(fā)現(xiàn),通過注射GPI抗原可誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎的產(chǎn)生[3],其發(fā)病機(jī)制可能為：①抗原、抗體結(jié)合后形成免疫復(fù)合物,積極或補(bǔ)體系統(tǒng),形成關(guān)節(jié)炎；②抗原、抗體免疫復(fù)合物黏附于內(nèi)皮細(xì)胞表面,介導(dǎo)炎癥介質(zhì)向關(guān)節(jié)區(qū)域遷移。近些年,有許多研究報道：GPI是RA一種自身抗原[4],關(guān)節(jié)炎患者血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)發(fā)現(xiàn)了極高的GPI酶活性和濃度[5,6]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中,關(guān)節(jié)的破壞與瓜氨酸的一系列反應(yīng)相關(guān)[7]。因而檢測瓜氨酸相關(guān)抗體對RA診斷有高度特異性,并且可在早期、早早期RA血清中發(fā)現(xiàn)該抗體。有許多文獻(xiàn)表明抗CCP抗體檢測對RA診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷有重要意義[8-10]。

在本組實(shí)驗中，對各例患者均做了GPI抗原、抗CCP抗體、類風(fēng)濕因子等檢測，結(jié)果顯示在早期診斷的RA組和非RA組之間GPI抗原濃度無明顯差異，而RA組抗CCP抗體、RF濃度明顯高于非RA組，兩組間存在統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.01)。對早期RA診斷，抗CCP抗體敏感性(92%)和特異性(62%)最高，特異性與RF和GPI抗原相比統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.01)，類風(fēng)濕因子雖然特異性(32%)相對抗CCP抗體較低(P<0.05)，但敏感性(82%)和抗CCP抗體相似；目前抗CCP抗體和類風(fēng)濕因子在臨床上廣泛使用。雖然GPI抗原特異性(32%)和RF相同，但敏感性明顯低于RF (P<0.05)，GPI抗原無論是特異性還是敏感性都顯著低于抗CCP抗體(P<0.01)。從本實(shí)驗結(jié)果顯示：GPI與抗CCP抗體、類風(fēng)濕因子相比在早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中不具有特殊相關(guān)性，這與國外個別報道相近[11]，與國內(nèi)的某些報道不同[12]，不排除本研究樣本量較小的原因，還須擴(kuò)大樣本量觀察，我們將進(jìn)一步研究GPI與疾病活動、病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性及判斷治療效果方面的作用。

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