血液病患者外周血未染色大細胞與血涂片鏡檢間關系的探討

王柏山，孫 寧

(1.遼寧中醫藥大學附屬醫院 臨床檢驗中心,遼寧 沈陽110032；2.鐵嶺縣第一醫院 檢驗科,遼寧 鐵嶺112000)

血細胞分析儀已經廣泛應用給檢驗工作帶來了極大的方便。但是，外周血異常血細胞形態對于血液系統疾病診斷的作用仍舊依賴于傳統的血涂片鏡檢[1]。對于已經明確診斷的血液系統疾病，監測療效和病情判斷如果還采用血涂片鏡檢就會出現檢驗結果不穩定，檢驗速度慢等缺陷。所以許多全自動血細胞分析儀均增加相關檢測參數用以反映外周血異常細胞情況，未染色大細胞(large unstained cell，LUC)即是Bayer ADVIA2120血細胞分析儀用以提示外周血異常細胞情況的一項參數。然而，LUC檢測在臨床應用過程中，就單個病例而言常常出現與血涂片鏡檢陽性細胞的性質或者數量不符的現象，給臨床工作帶來一定困擾。那么，LUC檢測與血涂片鏡檢的關系就成了臨床醫生和檢驗人員共同關心的話題。現對212例各類血液病患者的外周血LUC進行分析，用于評價LUC檢測與血涂片鏡檢的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源

1.1.1 病例組 隨機收集2012年1月至2012年10月間的血液科住院患者做血細胞分析的標本，共212例，其中男86例，女126例，年齡最小8歲，最大92歲，平均60歲。均經血常規、外周血涂片、骨髓細胞學等檢查符合相對應的血液系統疾病診斷標準，確診為血液系統疾病，具體疾病分布見表1。患者住院初診和治療期間采集骨髓涂片當天，采集患者外周血進行血細胞分析和外周血涂片鏡檢。

1.1.2 對照組 隨機收集2012年1月至2012年10月間的其他科室住院患者做血細胞分析的標本，共190例，其中男71例，女119例，年齡最小5歲，最大89歲，平均58歲。均經臨床醫師確診為非血液系統疾病。

表1 血液系統疾病患者病種分布

注：其他疾病包括多發性骨髓瘤、脾功能亢進、巨球蛋白血癥、骨髓轉移癌。

1.2 儀器與試劑

Bayer AVDIA2120全自動五分類血細胞分析儀(美國)及其配套的試劑、全血質控物以及校準品。瑞氏-姬姆薩染色液(珠海BASO)。OLYMPUS CX40光學顯微鏡。德國Greiner Bio-One公司生產的含EDTA-K2抗凝劑的一次性真空血管。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 晨起空腹采集患者靜脈血2 ml，采用EDTA-K2抗凝，顛倒混勻8次使混合均勻。

1.3.2 未染色大細胞測定 每半年按照標準操作規程使用配套校準品對ADVIA2120血細胞分析儀進行校準并評價儀器的準確度、精密度、線性范圍等指標，滿足ISO15189對儀器管理的要求后應用其檢測臨床標本。測定標本前先進行高、中、低值質控物的檢測，主要結果均在允許范圍后方可測定患者標本。實驗過程中，嚴格按照操作規程。所有標本測試均在采血后1h內完成。未染色大細胞百分比(LUC)的正常參考范圍為0%-4.0%，LUC大于4.0%者為陽性，小于4.0%者為陰性。

1.3.3 外周血涂片白細胞分類計數 血常規標本在完成檢測后，取抗凝血標本1滴制成血涂片，用瑞氏-姬姆薩染色液按照標準操作規程染色。由兩名在形態學檢查方面有經驗的工作人員(中級或中級以上職稱者)進行鏡檢(雙盲法)，各分類計數白細胞100個，記錄平均值。將異形淋巴細胞比例大于2%作為其陽性標準[2]，血涂片中出現其他異常細胞(如原始細胞、幼稚細胞、漿細胞等)均直接歸為陽性。

1.3.4 骨髓原始細胞計數 患者住院初診和治療期間采集骨髓涂片，用瑞氏-姬姆薩染色液按照標準操作規程染色。由兩名在形態學檢查方面有經驗的工作人員(中級或中級以上職稱者)進行鏡檢(雙盲法)，分類計數白細胞200個，記錄平均值。檢驗結果超出正常骨髓細胞計數標準[3]為增高，未超出為正常。

1.4 統計學分析

應用SPSS17.0進行u檢驗、計算Kappa系數及受試者工作特征(ROC)曲線。P<0.05具有統計學意義。用Kappa系數評價LUC與外周血涂片兩種檢測方法所得結果的一致性程度，Kappa系數≤0.4表示相關性弱；0．41-0.60表示中度相關；0.61-0.80表示高度相關，≥0.81表示相關度極強。

2 結果

2.1 病例組與對照組患者的LUC結果比較

病例組與對照組患者的LUC結果見表2。病例組LUC均值高于對照組患者的LUC結果，經統計學分析差異具有顯著性，u=8.06，P<0.05。

表2 病例組與對照組患者的LUC結果比較(%)

注：#與對照組LUC相比較，P<0.05

2.2 不同血液系統疾病患者的LUC結果比較

212例血液系統疾病患者的LUC結果及疾病分布見表3。血液系統疾病患者中LUC陽性率為41.04%。其中髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征(MDS)患者的LUC陽性率較高，分別為60.87%和69.64%。相比之下，淋巴細胞白血病、貧血等疾病陽性率較低。

表3 不同血液系統疾病患者的LUC結果比較

2.3 髓細胞白血病和MDS患者與骨髓涂片原始細胞檢查結果比較

46例髓細胞白血病和56例MDS患者外周血LUC與骨髓涂片檢查原始細胞結果見表4，以骨髓涂片檢查原始細胞正常與否為金標準，評價LUC對于兩類血液系統疾病的病情進展和療效的監測價值，其敏感性為78.9%，特異性為84.4%，受試者工作特征(ROC)曲線計算曲線下面積為0.833。

表4 46例髓細胞白血病和56例MDS患者外周血LUC與骨髓涂片檢查原始細胞結果比較

2.4 血液病患者的LUC與外周血涂片檢查結果的比較

212例血液系統疾病患者的LUC與外周血涂片檢查結果見表5。以外周血涂片檢查為標準，評價LUC對外周血幼稚細胞的診斷價值，其敏感度為76.54%，特異度為80.92%。統計顯示，LUC與外周血涂片檢查在對外周血異常細胞的診斷上一致性結果為Kappa=0.567，u=8.28，P<0.05,即可認為兩種方法具有一致性，且其一致性強度為中等。

表5 LUC檢測與血涂片鏡檢檢查結果的比較

3 討論

目前，多數醫院應用的全自動血細胞分析儀有著較好的篩選能力，能滿足臨床對血細胞分析需求[4]。但是全自動血細胞分析儀對血細胞的識別能力有限，尤其是血液病患者的外周血中，常常出現原始幼稚細胞、異型淋巴細胞、中毒顆粒等血細胞形態異常。所以，對于儀器有報警提示或計數異常超出一定范圍時需要血液涂片復檢[5，6]。Bayer ADVIA2120血細胞分析儀的過氧化物酶通道是根據不同細胞的過氧化物酶活性不同的原理，將血細胞進行過氧化物酶染色，使各細胞胞漿內呈現出不同的酶化學反應。在過氧化物酶通道中并未被染色的細胞稱為未染色大細胞，其體積大于正常淋巴細胞+2SD，包括各種原始和幼稚細胞、異形淋巴細胞、漿細胞等。具有重復性好，操作簡便快速等優勢。

通過對病例組和對照組LUC值的比較，我們發現血液病患者的LUC值明顯高于后者，LUC檢測提示血液系統疾病的診斷。在LUC陽性的非血液病患者中，僅有1例患者的外周血涂片查到幼稚細胞，其他患者外周血涂片查到的是異常淋巴細胞。在對212例血液系統疾病患者外周血的LUC研究中，我們發現LUC陽性率在髓細胞白血病和MDS患者中較高，分別為60.87%和69.64%。提示LUC對髓細胞白血病和MDS的診斷有著較高的提示意義，可作為這兩種疾病診斷的篩選指標，與張璞等[7]報道一致。血液病病情的監測主要依靠骨髓涂片檢測原始細胞，通過對上述兩種血液病共102例患者的LUC和骨髓涂片比較分析，LUC的其敏感性為78.9%，特異性為84.4%，受試者工作特征(ROC)曲線計算曲線下面積為0.833，說明LUC可以用來反映患者骨髓原始細胞的變化，可以用來監測病情的變化。外周血涂片檢查是以往我們實際檢驗過程中常用來反映患者骨髓原始細胞變化的手段，通過計算Kappa系數，我們也發現LUC與外周血涂片檢查在對外周血異常細胞的診斷上具有中等一致性(Kappa=0.567，P<0.05)。而212例患者中有81例患者的外周血涂片所查到的異常細胞，且均為幼稚細胞。提示LUC可在一定程度上反映外周血中的幼稚細胞的情況。可認為LUC對血液科患者病情進展及治療效果具有積極的提示意義。通過統計我們還發現，在部分LUC升高患者的外周血涂片中并未查到異常細胞，這可能與部分單核細胞過氧化物酶呈陽性有關，還可能與血涂片檢查的細胞數量有限相關。

盡管LUC對外周血異常細胞檢測與骨髓涂片檢測原始細胞有著較好的一致性，并具有操作簡單，人為因素影響小等優勢，但其不能做到“眼見為實”。因此，LUC檢測不能完全替代外周血涂片，實際工作中我們應該結合LUC與外周血涂片檢查。對于已經明確診斷的血液系統疾病，特別是髓細胞白血病和MDS，可應用LUC檢測監測病情發展，如果懷疑病情變化再涂片鏡檢確認，這樣既能提高檢測速度又能保證檢測質量。

作者簡介：王柏山，男，39歲，碩士研究生，檢驗中心副主任，副主任技師，主要從事臨床檢驗診斷學(血液、腫瘤細胞)。

參考文獻：

[1]李 霞，曾文潔，郭建華.血液分析儀聯合血細胞形態觀察在臨床診斷中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2012，7(33):876.

[2]趙 冬，都麗麗.ADVIA2120血細胞分析儀中大體積未染色細胞(LUC)與血涂片之間的關系[J].延安大學學報，2011，3(9)：30.

[3]許文榮，王建中.臨床血液學檢驗[M].5版.北京：人民衛生出版社，2013:55-59.

[4]吳新忠，龐 鑫，羅東福,等.Bayer ADVIA2120全自動血細胞分析儀的性能評價[J].現代醫學儀器與應用，2007，19(6):62.

[5]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al.The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J].Lab Hematol,2005,11:83.

[6]中華檢驗醫學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數復檢標準釋義[J].中華檢驗醫學雜志，2007，30：380.

[7]張 璞，孫海英，鹿群先,等.外周血為染色大細胞在骨髓增生異常綜合征早期診斷中的價值[J].中國實用醫藥，2011，11(6)：3.