丹參酮ⅡA磺酸鈉對2型糖尿病大鼠心肌的保護作用*

李彩蓉，甘受益，黃紅霞

(1．湖北科技學院臨床醫學院，湖北 咸寧 437100；2．咸寧市中心醫院心內科)

糖尿病(DM)是以長期高血糖為主要特征的代謝綜合征，可導致眼、神經、腎臟、心血管等多臟器的慢性損害[1]。目前認為糖尿病心肌病變的主要發病機制與細胞內Ca2+穩態失衡、氧化應激、細胞外基質的作用、細胞因子、脂肪酸的異常代謝有密切關系[2]。丹參酮ⅡA磺酸鈉(TSN)是從傳統中藥丹參的根系中提取的生物活性成分，在臨床上應用廣泛[3]。本實驗通過建立糖尿病大鼠模型，探討丹參酮ⅡA磺酸鈉干預后對糖尿病大鼠心肌氧化應激的影響。

1 材料與方法

1.1 動物模型與分組 清潔級近交系雄性Wister大鼠(180～220g)(由湖北省醫學科學院實驗動物中心提供)，飼養于標準環境，每籠5只。將50只大鼠予以基礎飼料(脂肪10%，碳水化合物60%，蛋白質22%，其他8%)喂養適應環境1周。隨機分為正常對照組(10只)，仍以基礎飼料喂養。余40只參照文獻[2]建立2型糖尿病模型。造模成功后取血糖較高的30只隨機分為3組：DM模型組(10只)，DM+TSN小劑量(10 mg/kg)干預組(10只)，DM+TSN大劑量(20 mg/kg)干預組(10只)，繼續給予高脂飲食，所有動物繼續喂養8周。

1.2 藥物和試劑 TSN由上海第一生化藥業有限公司，鏈脲佐菌素購自美國Sigma公司。丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(TAC)、一氧化氮(NO)、巰基(SH)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 標本采集與指標檢測 所有動物給藥8周后，處死前夜大鼠禁食過夜，自由飲水。剪斷頸動脈取全血6～8ml，離心分離血清，待測各項指標。并處死動物，迅速取出心臟，部分組織進行手工勻漿，制成10%的組織勻漿。

1.4 血清及心肌組織氧化應激指標測定 采用菲羅啉比色法測定血清及心肌組織中TAC；硫代巴比妥酸(TBA)比色法測定血清及心肌組織中MDA含量；二硫硝基苯甲酸法測定SH含量；硝酸還原法檢測血清及心肌組織中NO含量。以上檢測按試劑盒說明書操作。

1.5 CK、LDH和cTnI含量測定 生化法測定CK，LDH含量。酶聯免疫法檢測cTnI含量。

2 結 果

2.1 實驗動物的基本情況 DM模型組大鼠出現多尿、多飲、多食狀態，毛色逐漸失去光澤甚至灰暗，精神萎靡，行動遲緩。TSN干預組上述情況較DM模型組明顯減輕。

2.2 TSN對糖尿病大鼠血清CK、LDH、cTnI含量的影響 DM模型組與正常對照組比較，血清中CK、LDH和cTnI含量增加(P<0.01)。小劑量TSN干預后，可降低糖尿病大鼠血清中CK、LDH和cTnI含量，但與DM模型組比較無統計學差異，和正常對照組比較，仍較高均有統計學差異，(P<0.05)。大劑量TSN干預后血清中CK、LDH和cTnI含量與DM模型組比較，有統計學差異(P<0.05)，其中血清中LDH和cTnI與正常對照組比較有統計學差異(P<0.05)。結果見表1。

表1 TSN對糖尿病大鼠血清CK、LDH和cTnI含量的影響

2.3 TSN對糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH和NO含量的影響 與正常對照組比較，DM模型組血清MDA明顯升高，血清TAC、SH、NO比正常對照組均明顯降低，兩組比較有統計學差異(P<0.01)。兩組TSN干預后血清中TAC、SH和NO明顯升高，與DM模型組比較有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。大劑量TSN干預后還能明顯降低MDA含量，與DM組比較，有統計學差異(P<0.05)。兩組TSN干預后血清中MDA、TAC、SH、NO與正常對照組比較，均有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。結果見表2。

表2 TSN對糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH、NO的影響

2.4 TSN對糖尿病大鼠心臟組織MDA、TAC、SH和NO含量的影響 與正常對照組比較，DM模型組心肌組織中MDA明顯升高， TAC、SH、NO含量明顯降低，兩組比較有統計學差異(P<0.01)。兩組TSN干預后能升高心肌組織中TAC和SH含量，與DM模型組比較有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。大劑量TSN干預后還能降低MDA含量，升高NO含量，與糖尿病模型組比較有統計學差異(P<0.05)，兩組TSN干預后心臟組織中MDA、TAC、SH、NO與正常對照組比較，均有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。結果見表3。

表3 TSN對糖尿病大鼠心臟組織MDA、TAC、SH、NO的影響

3 討 論

糖尿病心肌病變是一類不同于高血壓、冠心病等的糖尿病特有的一類心臟疾病。心臟是人體最活躍的臟器之一，為完成各種生理活動心臟內存在大量的細胞酶，乳酸脫氫酶是參與體內能量代謝過程中的一個重要的酶[4]。肌酸激酶的功能是在生理水平上維持細胞內的三磷酸腺苷濃度。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)可檢出微小心肌損害，成為心肌細胞損傷敏感性和特異性最強的標志物之一[5]。在本實驗中檢查結果提示糖尿病大鼠模型組血清中CK、LDH和cTnI(三者為肌肉組織急慢性損傷的標志)含量升高，使用TSN后，血清中CK、LDH和cTnI含量下降，說明TSN對心肌具有保護作用。

氧化應激是導致心血管疾病的重要原因之一，機體遭受各種有害刺激時，體內活性自由基產生過多，氧化程度超過氧化物的清除，氧化系統和抗氧化系統失衡[6]。MDA是脂質過氧化物，其含量的變化可直接反應氧化程度。體內存在多種抗氧化物，可清除體內產生的各種活性氧，阻止活性氧誘導的氧化應激的產生，因此測定組織和血漿中的TAC具有重要的生物學意義[7]。細胞和組織內蛋白巰基的氧化狀態可指示氧化應激。研究結果顯示糖尿病大鼠體內大量活性氧產生，血清和心肌組織MDA水平明顯升高，TAC、SH水平明顯下降，經TSN干預后，血清和心肌組織MDA水平明顯下降，TAC、SH水平明顯改善，結果顯示TSN對糖尿病大鼠體內氧化/抗氧化整體防御體系有良好的調節作用。

NO是維持冠狀動脈舒張反應的重要物質。冠狀動脈內一定量的一氧化氮的釋放，能夠維持較低的冠狀動脈阻力，保證心臟充足的供血，特別是慢性心腦血管的人，能大大減少冠狀動脈缺血的危害，防止冠心病的發作。本研究結果顯示糖尿病組心肌組織NO指標明顯低于正常對照組，而TSN能升高NO水平。

綜上所述，TSN對糖尿病大鼠心肌具有保護作用，其機制可能與抑制心肌氧化應激有關。

[1]Battiprolu PK，Gillette TG，Wang ZV，et al.Diabetic cardiomyopathy:mechanisms and therapeutic targets[J].Drug Discov Today Dis Mech，2010,7(2):e135

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[3]Gao S，Liu Z，Li H，et al.Cardiovascular actions and therapeutic potential of tanshinone ⅡA[J].Atherosclerosis，2012,220(1):3

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[5]劉忠和，余薇，劉超,等.姜黃素對糖尿病大鼠心肌的保護作用[J].中國病理生理雜志,2014,30(4)：725

[6]胡娟.大蒜素對糖尿病大鼠血清抗氧化作用的研究[J].湖北科技學院學報(醫學版)，2014,28(1):12

[7]夏文華,饒玉霞.2型糖尿病患者內皮祖細胞數量和功能研究[J].咸寧學院學報(醫學版),2012,26(1):12