冠心病患者血清內脂素水平與炎癥標志物及組織因子的關系

趙劍 夏大勝 李彬 李超 張峰

內脂素又稱為前B細胞克隆增強因子，是一種由脂肪組織分泌的細胞因子，臨床研究發現冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)患者存在高內脂素血癥[1]。磷酸化c-jun是激活蛋白-1的活性形式，可作為核轉錄因子對動脈粥樣硬化形成過程中各種炎癥因子的生成進行調控；CD40L是相對分子量為39×103的Ⅱ型跨膜蛋白，主要表達于血小板膜表面，通過與CD40結合實現炎癥信號細胞內傳導。磷酸化c-jun與CD40L是體內重要的炎癥反應標志物，研究顯示冠心病患者磷酸化c-jun及CD40L水平升高[2-3]。組織因子(TF)是凝血途徑的啟動因子，與動脈粥樣硬化整個病理過程關系密切[4]。本研究旨在探討冠心病患者內脂素與炎癥標志物磷酸化c-jun 、CD40L及組織因子的關系。

對象與方法

一、 研究對象

隨機選取2012年9月 至2014年3月首次在天津市第一中心醫院心內科住院治療的75例不穩定型心絞痛(UAP)患者、65例穩定型心絞痛(SAP)患者，均經冠狀動脈造影確診,符合中華醫學會心血管病學會制定的UAP或SAP診斷標準[5]。對照組60例，為冠狀動脈造影正常、運動平板實驗陰性的患者。所選研究對象均為排除腦血管疾病、周圍動脈疾病、感染、全身免疫性疾病、肝腎功能不全、惡性腫瘤者的患者，且均未服用過影響血液炎性因子水平的藥物，如激素類、免疫抑制劑、他汀類等藥物。

二、方 法

1.內脂素、磷酸化c-jun、TF、組織因子途徑抑制物(TFPI)指標檢測

所有受試對象隔夜禁食12 h，清晨7時采集肘靜脈血5 ml，室溫下放置2 h后，以3 000×g離心10 min分離血清，-80℃冰箱中保存待檢查。內脂素試劑盒購自美國ADL公司，磷酸化c-jun試劑盒購自美國CST公司，TF、TFPI試劑盒購自美國ADI公司，均采用雙抗體夾心ELISA，嚴格按試劑盒說明書進行操作。通過計算機軟件計算出內脂素、磷酸化c-jun、TF、TFPI血清水平。

2.血小板表面CD40L表達水平測定

受試者隔夜禁食12 h，清晨7時采取肘靜脈血2 ml,加入含1%的EDTA抗凝試管中，全血檢測血小板CD40L。流式抗體FTIC Mouse IgGκ及FTIC anti-human CD40L購自美國 BD PharMingen公司，按說明書要求進行操作。取2支FALCON管，分別標記(+)和(-)，兩管均加入標本(EDTA-K2抗凝靜脈血)5 μl。向(-)管中加入FTIC Mouse IgGκ 20 μl，向(+)管中加入FTIC anti-human CD40L 20 μl，混勻。室溫避光靜置30 min。每管加入生理鹽水2 ml，混勻，2 000 rpm離心5 min，棄上清。再向每管加入生理鹽水1 ml，混勻，通過流式細胞儀統計血小板膜CD40L平均熒光強度。

三、統計學處理

結 果

一、UAP組、SAP組、對照組患者一般臨床資料比較

UAP組、SAP組、對照組一般臨床資料比較見表1。

表1 UAP組、SAP組、對照組患者一般臨床資料比較

二、UAP組、SAP組、對照組患者血清內脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI及TF/TFPI水平的比較

UAP組患者血清內脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI水平及TF/TFPI值高于SAP組及對照組(P<0.05或P<0.01)；SAP組上述指標均高于對照組(P<0.05或P<0.01)，見表2。

三、線性相關分析

冠心病患者內脂素水平與磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI水平及TF/TFPI值呈正相關，相關系數分別為0.66、0.57、0.56、0.53、0.47(P均<0.01)。

表2 三組患者血清內脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI及TF/TFPI的比較

四、多重線性逐步回歸分析

以冠心病患者年齡、性別(女=0，男=1)、吸煙史(否=0，是=1)、糖尿病史(否=0，是=1)、高血壓病史(否=0，是=1)、BMI、WHR、TC、TG、LDL-C、HDL-C、空腹血糖、空腹胰島素及內脂素為自變量，分別以磷酸化c-jun、CD40L、組織因子為因變量，進行多重線性逐步回歸分析，結果顯示血清內脂素水平與磷酸化c-jun、CD40L、TF水平呈獨立正相關，見表3-5。

表3 冠心病患者血清磷酸化c-jun水平影響因素的多重線性回歸分析

表4 冠心病患者血清CD40L水平影響因素的多重線性回歸分析

表5 冠心病患者血清TF水平影響因素的多重線性回歸分析

討 論

近年來人們對脂肪組織內分泌特性有了新的認識，以內脂素為代表的脂肪細胞因子日益受到關注。本研究結果顯示冠心病患者表現為高內脂素血癥，且血漿內脂素水平與病情程度相關。其機制可能是高內脂素血癥通過促進內皮細胞增生、誘導血管平滑肌細胞增殖與變性、促進血小板聚集而影響冠狀動脈粥樣硬化發生和發展[5]。

內脂素與炎癥反應關系密切，是體內重要的促炎癥因子。研究顯示內脂素通過促進IL-6、IL-8、MCP-1等炎癥因子分泌和釋放、誘導轉錄因子NF-kB活化參與機體炎癥反應[6-7]。磷酸化c-jun與CD40L是體內重要的炎癥反應標志物，本文結果表明冠心病患者磷酸化c-jun與CD40L水平明顯升高；線性相關分析顯示血清內脂素水平與磷酸化c-jun及CD40L呈正相關，在校正混雜因素后，二者仍呈獨立正相關。磷酸化c-jun可以促進內皮細胞黏附分子產生、增加趨化因子表達，并通過促進巨噬細胞表面LOX-1表達增加泡沫細胞生成，進而促進動脈粥樣硬化形成與發展。研究表明高內脂素血癥通過誘導氧化應激反應提高內皮細胞活性氧化物(ROS)水平，ROS可以增加內脂素信號傳導途徑上c-jun氨基末端激酶磷酸化強度，進而促進c-jun活化[8]。另外，內脂素通過刺激血管緊張素原生成、增加血管緊張素轉換酶活性促進血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)產生，AngⅡ與受體AT1特異性結合，通過MAPK-JNK等細胞內信號傳導通路實現c-jun磷酸化[9-10]。CD40L又稱腫瘤壞死因子相關激活蛋白，存在于血小板α顆粒中，在血小板激活后迅速表達于血小板表面，與內皮細胞表達CD40相互作用實現炎癥信號細胞內傳導。內脂素通過促進內皮細胞炎癥反應，致內皮損傷，激活凝血途徑；誘導嗜酸粒細胞分泌血小板活化因子，促進血小板活化，提高 CD40L表達水平[11]。

TF即第三凝血因子，又稱組織凝血活酶，是一個分子量約47 KD的跨膜糖蛋白，在啟動凝血反應時，細胞表面TF首先與Ⅶa和(或)Ⅶ結合成TF-Ⅶa或TF-Ⅶ復合物。TF既是凝血因子Ⅶ(FⅦ)在細胞表面的受體，又是FⅦ或激活的因子Ⅶ的輔因子，它與Ⅶ或Ⅶa形成復合物，進而激活凝血因子Ⅹ與凝血因子Ⅸ，同時啟動內、外兩條凝血途徑。血液中單核/巨噬細胞、多形核白細胞等均可表達TF，TF/FⅦa促進單核細胞向巨噬細胞轉化，并誘導巨噬細胞產生炎癥反應，同時通過調控細胞信號轉導，促進成纖維細胞、單核細胞等遷移和增殖，參與動脈粥樣硬化發生發展[12]。本研究發現冠心病患者血清TF水平升高，且UAP組高于SAP組；內脂素與TF水平呈獨立正相關。高內脂素血癥通過上調炎癥相關轉錄因子NF-kB活性，引起TF mRNA轉錄增加，促進內皮細胞中組織因子合成[13]。高內脂素血癥刺激單核/巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6、IL-12，促進T淋巴細胞分泌IL-2、TNF-α、IL-18等細胞因子；影響肝臟分泌CRP；導致內皮細胞炎癥反應，加劇內皮損傷、斑塊破裂，進而促進組織因子表達。TFPI是生理條件下血液中存在的一種天然抗凝物質，可直接抑制FXa活性，也可形成TFPI-FXa-FⅦa-TF復合物抑制FⅦa-TF活性，抑制血栓形成。本文結果提示內脂素與TFPI、TF/TFPI呈正相關，表明內脂素在引起TF升高的同時，TFPI的表達也會代償性升高，但增加的TFPI不能阻斷TF所介導的凝血活性，TF-TFPI系統的失衡會隨著內脂素水平升高而加劇。

綜上所述，血清內脂素水平升高能夠促進炎癥標志物磷酸化c-jun、CD40L及組織因子表達,進而影響動脈粥樣硬化形成與發展。

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