結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷結(jié)核性心包積液的意義

彭勇+陳偉寧

[關(guān)鍵詞]結(jié)核；T SPOT.TB試驗(yàn)；心包積液

中圖分類號(hào)：R542.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1009_816X（2014）03_0260_02

doi：10.3969/j.issn.1009_816x.2014.03.36結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T_SPOT.TB）通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）檢測(cè)外周血中經(jīng)結(jié)核菌特異性抗原刺激后釋放γ干擾素的T細(xì)胞，診斷結(jié)核分枝桿菌感染具有較高的敏感性和特異性，本文主要針對(duì)我院收治的高度懷疑結(jié)核性心包積液患者的外周血液行ELISPOT檢測(cè)，探討該方法對(duì)結(jié)核性心包積液的診斷價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料：選取我院2011年11月至2013年11月住院患者48例，根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為兩組：觀察組擬診結(jié)核性心包積液組21例，其中男12例，女9例，年齡16～72（38.9±13.5）歲，包括結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽性、或結(jié)核桿菌培養(yǎng)陰性，但臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查疑似結(jié)核，抗結(jié)核治療有效的患者；對(duì)照組27例，其中男15例，女12例，年齡14～75（48.3±18.7）歲； 其中7例非結(jié)核感染性滲出性心包積液、8例癌性心包積液（肺癌5例、淋巴瘤1例、乳腺癌2例） 、11例與心力衰竭有關(guān)、1例與腎上腺功能減退有關(guān)。所有病例均排除HIV感染。

1.2方法：

1.2.1T_SPOT.TB檢測(cè)：根據(jù)T_SPOT.TB試劑盒（Oxford Immunotec，Oxford UK）操作。肝素抗凝管采集6ml外周靜脈血，樣本室溫（15～25℃）保存與運(yùn)輸，樣本采集后盡早（24小時(shí)內(nèi)）送到杭州市艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心。密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。洗滌后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。PBMCs和結(jié)核特異性抗原同時(shí)加入包被抗體的反應(yīng)孔中，孵育過夜（37℃，5% CO2），效應(yīng)T淋巴細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，與預(yù)包被的抗體結(jié)合。洗板，加入二抗，孵育1小時(shí)。洗板，加入底物顯色液孵育7分鐘。蒸餾水終止反應(yīng)。一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞。

1.2.2結(jié)果判定：根據(jù)T SPOT.TB試劑盒使用說明書。結(jié)果包括陰性對(duì)照、抗原A、抗原B和陽性對(duì)照。陽性結(jié)果參照以下標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)0～5個(gè)，且（抗原A或者抗原B）-（陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6 。陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)6～10個(gè)，且（抗原A或者抗原B）≥2×（陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）。如果上述標(biāo)準(zhǔn)不符合且陽性對(duì)照孔正常示檢測(cè)結(jié)果為“陰性”。

1.3評(píng)價(jià)指標(biāo)：采用敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值（PPV）、 陰性預(yù)測(cè)值（NPV）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS 16.0版統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，對(duì)各組檢出陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

在觀察組21例可疑結(jié)核性心包積液患者中，20例T_SPOT TB試驗(yàn)陽性，陰性1例；在對(duì)照組27例中T_SPOT TB試驗(yàn)陽性4例，陰性23例。T_SPOT.TB試驗(yàn)診斷結(jié)核性心包積液的敏感性為95.2%，特異性為85.2%，陽性預(yù)測(cè)值為83.3%，陰性預(yù)測(cè)值為95.8%。

3討論

肺外結(jié)核是指發(fā)生在肺部以外的全身其他臟器的結(jié)核感染，結(jié)核性心包積液屬肺外結(jié)核感染導(dǎo)致的滲出性病變。國外資料顯示肺外結(jié)核約占結(jié)核病的20%左右，在中國約占結(jié)核病的9.7%～11.8%，病死率占總結(jié)核病病死率的14.1%～17.6%[1]。現(xiàn)在診斷肺外結(jié)核仍存在一定困難，結(jié)核菌素試驗(yàn)（TST）雖然是目前篩查結(jié)核感染的主要的輔助手段，但有很多局限性，Madariaga等[2]對(duì)47例痰菌陽性的結(jié)核患者進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明T_SPOT TB診斷活動(dòng)性結(jié)核比TST的靈敏度高。目前，大量研究證實(shí)，T_SPOT TB檢測(cè)對(duì)于潛伏性結(jié)核感染及活動(dòng)性肺結(jié)核具有較高的敏感性及特異性。Kim等[3]隨診72例疑診肺外結(jié)核患者的前瞻性研究顯示，對(duì)于活動(dòng)性肺外結(jié)核，T_SPOT.TB的敏感性為94%，TST敏感性為47%。類似TST，如果T_SPOT.TB的斑點(diǎn)數(shù)在短時(shí)間內(nèi)顯著增加，則強(qiáng)烈提示體內(nèi)活動(dòng)性結(jié)核，此時(shí)給予預(yù)防性治療十分必要[4]。

本文局限性在于例數(shù)較少，若準(zhǔn)確評(píng)價(jià)外周血T_SPOT.TB檢測(cè)在中國人群診斷心包結(jié)核應(yīng)用價(jià)值，尚需要進(jìn)行大樣本、前瞻性隊(duì)列研究。此外，T_SPOT.TB結(jié)果的可靠性、穩(wěn)定性與各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制水平有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]Mori T， Sakatani M， Yamagishi F， et al. Specific detection of tuberculosis infection： an interferon_gamma_based assay using new antigens[J]. Am J Respir Crit Care Med，2004，170（1）：59-64.

[2]Madariaga MG， Jalali Z， Swindells S. Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis[J]. Am Board Fam Med，2007，20（6）：540-547.

[3]Kim SH， Song KH， Choi SJ. Diagnostic usefulness of a T_cell_based assay for extrapulmonary tuberculosis in immunocompromised patients[J]. Am J Med，2009，122（2）：189-195.

[4]Pai M， Zwerling A， Menzies D. T_cell_based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection： an update[J]. Ann Intern Med，2008，149（3）：177-184.

（收稿日期：2013_12_26）