HER2和PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌組織中的表達及其臨床意義

管建云 李軍擴

1) 河南安陽市腫瘤醫院外三科 安陽 455004 2) 河南安陽市腫瘤醫院病理科 安陽 455004

膀胱癌的發生、發展是多基因共同參與的復雜的過程，常伴隨著癌基因激活和抑癌基因失活。癌基因HER2 和抑癌基因PTEN 可影響共同的細胞信號轉導通路，在多種腫瘤的發生發展中起協同作用［1］。近年來的研究發現兩者與膀胱癌的發生也存在密切關系。本研究采用免疫組化方法檢測HER2 和PTEN 在膀胱癌組織中的表達，分析其與膀胱癌臨床、病理之間的關系以及兩者表達的相關性，探討其在臨床應用中的價值，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組收集2010 -06—2013 -03 間本院開放手術切除并均經病理證實為膀胱尿路上皮細胞癌患者的組織標本62例，男48例，女14例;年齡34～78(57.8 ±6.1)歲。按WHO病理分級標準:III 級16例，II 級24例，I 級22例。臨床分期按UICC-TNM 標準:Ta-T1期37例，T2-T4期25例。23例對照組正常膀胱組織取自同期其它膀胱手術患者，男17例，女6例;年齡26～72(55.3 ±7.5)歲。兩組患者的年齡、性別等一般情況比較，差異無統計學意義(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 試劑及方法 鼠抗人HER2/neu 單克隆抗體、鼠抗人PTEN單克隆抗體，SP 免疫組化試劑盒及DAB 顯色試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。所有標本經常規10%福爾馬林固定，脫水，包埋，4 m 連續切片，脫蠟。分別作HE 診斷及免疫組化染色。免疫組織化學SP 二步法，操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。用PBS 代替一抗作陰性對照，用己知陽性片作為陽性對照。

1.3 結果 判定HER2 蛋白陽性表達主要表現為細胞膜棕黃色著色，PTEN 陽性細胞為胞漿或細胞核著色，呈橘黃色或棕黃色顆粒。每張切片隨機選取5個高倍視野鏡(10 ×40)，根據陽性細胞占全部同類細胞總數的百分比及細胞染色強度作結果判定［1］。著色強度計分:不著色為0 分，淺黃色為1 分。棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。再將按陽性細胞比例評定:陽性細胞數＜10%計為0 分，10%～40%之間為1 分，41%～70%之間為2分，＞70%計為3 分。將上述兩種評分結果相加:0～1 分者為(-)，2 分者為(+)，3～4 分者為(+ +)，5～6 分者為(+ + +)。將≥2 分歸為陽性作統計學處理。

1.4 統計學方法 使用SPSS 13.0 統計軟件進行統計學分析，率的比較采用x2檢驗，相關性采用Spearman 相關分析方法。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HER2 和PTEN 的表達情況 HER2 蛋白在62 份膀胱癌組織中的陽性表達率為53.2%。在23 份正常膀胱組織中未見表達，其表達率為0。膀胱癌組織中表達率明顯高于正常膀胱黏膜組織，差異有統計學意義(P ＜0.05)。PTEN 蛋白在62 份膀胱癌組織標本中陽性表達率為46.7%。在23 份正常膀胱組織中均為陽性表達，陽性表達率為100%。膀胱癌組織中表達率明顯低于正常膀胱組織，差異有統計學意義(P ＜0.05)。HER2 和PTEN 的陽性表達分別見圖1、圖2。

圖1 HER2 在膀胱癌組 織中的陽性表達

圖2 PTEN 在正常膀胱組織中的陽性表達

2.2 HER2 和PTEN 的表達與膀胱癌臨床、病理特征的關系隨著膀胱癌病理分級、臨床分期的增高，HER2 蛋白陽性表達率增高，組間比較差異有統計學意義(P ＜0.01)。而膀胱癌病理分級、臨床分期越高，PTEN 蛋白的陽性表達率越低，組間比較，差異具有統計學意義(P ＜0.05)，見表1。

表1 HER2 和PTEN 的表達與膀胱尿路上皮細胞癌臨床、病理之間的關系

2.3 HER2 和PTEN 表達的相關性分析 HER2 陽性者中有20例PTEN 陰性表達。HER2 陰性者中有9例PTEN 陰性表達。兩者在膀胱癌組織中的表達呈負相關(r= -0.481，P ＜0.05)。

3 討論

Her2/neu(又稱c -erbB -2)是原癌基因，定位于人染色體17q21，編碼一個p185 的跨膜糖蛋白，即HER2。作為受體蛋白，HER2 具有內源性酪氨酸激酶活性，其自身活化后作用于特定的信號蛋白，激活PI3K/AKT、RAS/MAPK 等多種細胞信號轉導途徑，引發級連式放大反應，促進細胞增殖、分化，加速細胞轉化、抑制凋亡，從而致癌變。HER2 在許多惡性腫瘤細胞如乳腺癌、子宮內膜癌、肺癌、膀胱癌、胃癌等中過度表達［2］，而且其表達水平與腫瘤分級、分期及預后關系密切。國內外學者的研究證實［3-4］，HER2 在部分膀胱癌中高度表達，此類腫瘤多是分期和分級較高者，容易發生浸潤、轉移且預后不佳。有報道［5］顯示，HER2 的表達與浸潤性膀胱癌相關，是膀胱腫瘤復發及病死率的獨立預后因素。本研究結果表明，HER2 在正常膀胱組織無表達，在部分膀胱癌組織中高表達，且與膀胱癌的分級、浸潤性相關，其差異有統計學意義，提示HER2 參與了膀胱癌的發生發展，并與惡性生物學行為相關。

目前，已有多種針對HER2 受體的靶向藥物應用于腫瘤臨床治療，其中最常用及引人關注的是曲妥珠單抗。它作為抗體能特異性地與HER2 的胞外段結合，從而阻斷HER2 的二聚化及活化，抑制HER2 介導的細胞信號轉導通路，誘導細胞凋亡，最終抑制腫瘤細胞的生長、增殖。目前，膀胱癌的抗HER2 治療尚在動物試驗及臨床試驗階段［6］，這與不同學者的研究結論不一致有關。也表明腫瘤的發生是一個復雜的過程，與多基因的參與有關。

PTEN 是抑癌基因，定位于人染色體10q23.3，編碼蛋白稱PTEN 蛋白，是一含403個氨基酸的多肽鏈，具有脂質磷酸酶和蛋白磷酸酶活性。與HER2 作用相反，它是細胞信號轉導通路的負性調節因子，主要是通過發揮其雙特異性磷酸酶活性，脫去PI3K/AKT，RAS/MAPK，FAK(聚集粘連激酶)等信號轉導途徑中多種關鍵激酶的磷酸根，使其活性減弱，從而阻斷細胞內的信號轉導通路。抑制細胞轉化，調控細胞周期、促進凋亡，從而對腫瘤發生、發展起負性調控作用［7］。有證據顯示，在多種惡性腫瘤組織細胞中發現有PTEN 基因的突變或表達異常［8-9］，且與腫瘤的發生、發展及預后有關。在膀胱癌中PTEN 的表達缺失或低表達也普遍存在［10］，且隨著腫瘤細胞病理分級、臨床分期的增高，PTEN 的陽性表達率呈下降趨勢，它可以作為膀胱癌預后的觀察指標［11］。本研究顯示，正常膀胱組織中PTEN 蛋白表達率為100%，而在膀胱尿路上皮細胞癌中的表達率僅為46.7%，其差異有統計學意義(P ＜0.05)，而且隨著腫瘤病理分級、臨床分期的增高，PTEN 的陽性表達率也相應降低，差異均有統計學意義(P ＜0.05)。由此表明，PTEN 低表達或表達缺失在膀胱尿路上皮細胞癌的發生、發展過程中起重要的作用。

本研究對HER2 和PTEN 在膀胱癌組織中的表達進行了相關性分析，發現兩者的表達呈負相關，提示HER2 過表達與PTEN 表達缺失可能通過共同的信號轉導通路，協同促進了腫瘤的形成及進展，并在治療中相互影響。有研究表明［12］，對曲妥珠單抗治療的敏感性差的HER2 陽性乳腺癌患者與PTEN的表達相關。目前曲妥珠單抗尚未應用于抗膀胱癌的治療，可能與兩者表達呈負相關有關。文獻報導，甘草苷［13］、吲哚美辛［14］等均可以上調人細胞PTEN 的表達，相信隨著研究的不斷深入，在膀胱癌的治療中選擇這兩種基因為靶點，有可能起到積極作用。

［1］Salvesen HB，Stefansson I，Kalvenes MB，et al. Loss of PTEN expression is associated with metastatic disease in patients with endometrial carcinoma［J］.Cancer. 2002，94(8):2 185 -2 191.

［2］Casalini P，Iorio MV，Galmozzi E，et al. Role of HER receptors family in development and differentiation［J］.J Cell Phvsiol，2004，200(3):343 -350.

［3］胡文暉，郝斌，李惠翔，等. 不同組織學類型膀胱癌組織中HER2 蛋白的表達［J］. 鄭州大學學報(醫學版)，2014，49(1):96 -98.

［4］Ross JS，Wang K，Gay LM，et al. A high frequency of activating extracellular domain ERBB2 (HER2)mutation in micropapillary urothelial carcinoma［J］.Clin Cancer Res. 2014，20(1):68 -75.

［5］Bolenz C，Shariat SF，Karakiewicz PI，et al. Human epidermal growth factor receptor 2 expression status provides independent prognostic information in patients with urothelial carcinoma of the urinary bladder［J］.BJU Int. 2010，106(8):1 216-1 222.

［6］Hussain MH，MacVicar GR，Petrylak DP，et al. Trastuzumab，paclitaxel，carboplatin，and gemcitabine in advanced human epidermal growth factor receptor-2/neu-positive urothelial carcinoma:results of a multicenter phase II National Cancer Institute trial［J］.J Clin Oncol. 2007，25(16):2 218-2 224.

［7］畢玉東，王寶森.PTEN 和Survivin 在膀胱癌中的表達及臨床意義［J］. 國際泌尿系統雜志，2011，31(4):452 -455.

［8］趙紅霞.PTEN 與腫瘤的相關性研究進展［J］. 武漢大學學報(醫學版)，2014，57(1):155 -159.

［9］欣楠，于兆進，魏敏杰，等.PTEN 與腫瘤研究進展［J］. 現代腫瘤醫學，2012，20(7):107 -110.

［10］Cordes I，Kluth M，Zygis D，et al. PTEN deletions are related to disease progression and unfavourable prognosis in early bladder cancer［J］.Histopathology.2013，63(5):670 -677.

［11］Ahmad I，Morton JP，Singh LB，et al. β-Catenin activation synergizes with PTEN loss to cause bladder cancer formation［J］. Oncogene. 2011，30(2):178 -189.

［12］Gallardo A，Lerma E，Escuin D，et al. Increased signalling of EGFR and IGF1R，and deregulation of PTEN/PI3K/Akt pathway are related with trastuzumab resistance in HER2 breast carcinomas［J］. Br J Cancer. 2012，106(8):1 367 -1 373.

［13］張嫻，黃永佳，曾星. 甘草苷對人膀胱癌T24 細胞p21、PTEN 的表達影響［J］. 江西中醫學院學報，2012，24(2):64 -66.

［14］Abdulkareem IH，Blair M.Effects of indomethacin on expression of PTEN tumour suppressor in human cancers［J］.Niger Med J. 2013，54(2):100 -106.