HPLC法測定板藍根中腺苷的含量

李新莉等

摘 要： 本文采用HPLC測定板藍根提取物腺苷含量，以提高板藍根的質量標準，方法為將板藍根醇提液揮去乙醇，經氯仿萃取，然后用HPLC測定，得出色譜柱：Diamonsil C18，250mm×4.6mm，5μm，流動相：甲醇-水（10∶90），流速：1.0mL/min，檢測波長：260nm，柱溫：45℃。結果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范圍內，r=0.9998，平均回收率為96.45%，RSD為3.05%（n=5），線性關系良好。可見本方法簡單靈敏，準確可靠，重現性好，可完善現行的質量標準，為提高板藍根的質量控制方法提供實驗數據，對于保證其質量和臨床療效具有重要意義。

關鍵詞： 板藍根 腺苷 高效液相色譜法 質量標準

板藍根為常用中藥，始載于《神農本草經》，在《中國藥典》中收載始于1985年版，2005年版規定板藍根為十字花科菘藍屬植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]，性寒味苦，有清熱解毒、涼血消腫的功效，用于溫毒發斑、舌絳紫暗、丹毒、癰腫等，臨床應用極其廣泛。而1985年版《中國藥典》到現行版，均無專屬性指標成分作為板藍根的質量標準。腺苷是板藍根所含的一種天然成分，具有抗凝血、擴張冠狀動脈、松弛支氣管平滑肌、鎮靜中樞神經和抗心律不齊的作用[2]。本文以腺苷作為指標成分，選取定量分析方法，對完善現行質量標準提供實驗數據，對保證板藍根中藥質量有重要意義。

1.儀器與試劑

1.1儀器。SPD-LC10A型高效液相色譜儀（日本島津）；BP210S 電子天平（德國Sartorius 公司）；SPD—10A型紫外檢測器（日本島津）；N2000（浙大智達）數據處理系統。

1.2材料及試劑。板藍根（陜西省老百姓大藥房，產自甘肅，經鑒定均為正品板藍根）；腺苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號896-200909，質量分數>98%），色譜純甲醇，水為重蒸水，其他試劑為分析純和色譜純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2.方法與結果

2.2腺苷對照品溶液的配制。精密稱取腺苷對照品3.2mg，置50 mL量瓶中，加10%甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.064mg/mL的腺苷對照品溶液。

2.3供試品溶液的配制。取板藍根藥材粉末1g（過3號篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入10%的甲醇20mL，超聲提取（功率：200～250W，頻率：60～100Hz）30min，冷卻后過濾，濾液揮干，殘渣用10%甲醇溶解并移入5mL的量瓶中用10%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[3]。

2.4線性關系考察。精密稱取腺苷對照品4.7mg，用流動相溶解并定容至50mL；精密吸取1，2，3，4，5 mL至10mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，20μm進樣測定[4]。以峰面積（X）對進樣量（Y）進行回歸，得標準曲線回歸方程：X=2531490.23Y-13966.25，相關系數：r=0.9998（n=5）。結果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范圍內，線性關系良好。

2.5精密度實驗。腺苷對照品溶液20μl，重復進樣5次，按上述實驗方法項下的色譜條件測定，測得的峰面積如下：35.5775，35.5549，35.6545，35，4060，35.7038，RSD%=0.482%。

2.6重復性實驗。同一試樣精密稱取5份，分別按供試品溶液制備方法制備，測定腺苷含量[5]。測得供試品溶液含量的平均值為0.3786mg/g，RSD為1.26%。

2.7加樣回收率實驗。分別稱取已知含量的樣品6份，各精密加入一定量的腺苷對照品，按供試品溶液制備方法制備，測定腺苷含量，計算回收率。結果見表1。

從表1可得平均回收率為96.45%，RSD為3.05%。

2.8樣品含量測定。取甘肅產板藍根3批，粉碎，按供試品溶液制備方法制備，20μl進樣，測定腺苷含量[16]，結果見表2，色譜圖見圖1和2。

3.結果

通過以上實驗方法可以看出，高效液相色譜法對腺苷含量測定0.188～0.940μg范圍內，r=0.9998，平均回收率為96.45%，RSD為3.05%（n=5），線性關系良好。該方法簡便、準確、可靠，可作為婦女痛經丸的質量控制方法。

4.討論與結論

板藍根經現代藥理研究發現具有多方面作用。板藍根及其制劑的質量控制目前多以靛藍、靛玉紅的含量測定（高效液相色譜法）為指標，但是板藍根中靛藍、靛玉紅的含量僅為百萬分之幾（μg/g），且樣品溶液的制備需用氯仿回流提取很長時間（回流提取一次8h或回流提取3次，每次2h），因而不利于板藍根成品質量控制。2010年版《中國藥典》板藍根鑒別項下以精氨酸對照品作為TLC鑒別依據[7]，無定量測定方法。精氨酸雖然可作為指標建立定性方法，但并非板藍根的特征性成分，缺乏專屬性。腺苷為板藍根的特征性成分，用高效液相色譜法便于測定其含量，操作簡便、易行。專屬性強，可與南板藍根相區別，為活性成分，具有抗凝血、擴張冠狀動脈、松弛支氣管平滑肌、鎮靜中樞神經和抗心律不齊的作用，在板藍根中含量較高（約0.2mg/g），且化學性質穩定，因此本研究選擇腺苷作為指標成分建立板藍根藥材質量標準，為板藍根新質量標準的制定提供依據。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社，2005：142-143，487-488.1985，2000，2005，2010.

[2]趙軍.板藍根的藥理作用及其臨床應用[J].時珍國醫國藥，2003，14（4）：241.743.

[3]許潤春，楊明，蘇艷桃.HPLC測定板藍根中腺苷含量[J].中成藥，2005，27（6）：742.

[4]張敏如，洪亮，郭群.高效液相色譜法測定發酵蟲草菌粉和金水寶膠囊中腺苷的含量[J].中草藥，1994，25（2）：77.

[5]姜濤，劉暢.車環宇板藍根顆粒劑中靛玉紅、腺苷含量測定方法學研究[J].黑龍江醫藥，2010，23（4）.

[6]張慧曄，羅杰，黃亦南，王德勤，鄧喬華，李蘭芳.HPLC法同時測定復方板藍根顆粒中的尿苷腺苷和表告依春的含量[J].今日藥學，2011，21（6）.

[7]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社，2005：142-143，487-488.1985，2000，2005，2010.