微柱凝膠檢測技術檢測茵梔黃口服液中血型物質的含量

馬印圖，李莉華，李玉秋，張 靜 ，宋俊貞

茵梔黃口服液為中成藥，治療黃疸和新生兒高膽紅素血癥效果明顯［1-2］，用于治療母嬰血型不合引起的新生兒溶血病(hemolytic disease of the new born，HDN)、減低夫婦血型抗體效價也取得了很好的效果，主要成分為茵陳、梔子、黃芩苷、金銀花等，具有清熱、解毒、利濕退黃的功效。文獻報道，茵陳、黃芩含有A(B)血型物質，可在胎兒體內與紅細胞競爭抗體，對免疫性IgG抗體及免疫性抗體生成細胞均有抑制作用，以達到降低血型抗體效價、減少溶血對胎兒的影響來維持正常妊娠的目的［3-4］，但對血型物質含量的檢測方法卻未見報道。微柱凝膠檢測技術(microcolumn gel technology assay，MGTA)是一種新的改良抗球蛋白試驗技術，在國內已逐步作為常規技術應用于輸血領域，并取得了很好的效果［5］。筆者所在科室應用MGTA檢測茵梔黃口服液中血型物質的含量，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與試藥 37℃孵育器(ID-Incubator 37SⅠ)、恒速專用離心機(ID-Centifuge 12SⅡ)、微柱凝膠抗人球蛋白卡均為達亞美公司生產，微量加樣器(芬蘭雷勃公司生產)，人抗-A、抗-B血清、1%ABO試劑紅細胞均為解放軍白求恩國際和平醫院輸血科自制，茵梔黃口服液為北京雙鶴高科天然藥物有限責任公司生產(批號:272503)。

1.2 檢測方法 嚴格按照有關血型抗體效價測定操作規程進行操作［6］:取微柱凝膠抗人球蛋白卡2張，分別標記“中和前抗體效價”和“中和后抗體效價”，分別取倍比稀釋好的“1．1”項下抗血清25μl滴加到相應的標記孔內，將相應的試劑紅細胞用0.9%氯化鈉注射液洗滌后用低離子強度溶液(Liss液)配成1%的細胞懸液，取50μl懸液加入標記孔中，離心(1000 r/min)15 min，判讀結果，記為中和前抗體效價;再取抗血清與茵梔黃口服液等量混合，37℃反應1 h，判讀結果，記為中和后抗體效價。比較中和反應前后抗-A、抗-B抗體效價的變化情況，抗體效價降低則間接表示茵梔黃口服液中含有血型物質，效價無變化則表示其中不含血型物質。

2 結果

茵梔黃口服液與抗-A、抗-B血清中和反應前后抗-A抗體效價無變化，均為128，而抗-B抗體效價由中和反應前的256降為128，證實茵梔黃口服液中含有B血型物質，不含A血型物質。

3 討論

血型物質是人類紅細胞特異性物質，由多糖體和多肽類組成，具有免疫反應性而不具有免疫原性。采用中和抑制方法，在適當溫度下血型物質能與抗-A(B)抗體發生中和反應而抑制抗體凝集。ABO血型物質不僅存在于紅細胞內，而且在組織細胞、體液、植物、蔬菜、細菌中也廣泛分布，某些中藥中也含有水溶性的血型物質。細胞內的血型物質為脂溶性，可以通過相關試驗測得。根據血型物質能特異性地同相應抗體結合的特點，通過檢測有無抗體結合及其效價的變化，可以間接判斷其中血型物質的含量。傳統檢測血型物質的方法是采用抗球蛋白試管法，即血型物質首先與抗血清結合，阻止抗血清與相應紅細胞的結合和凝集，根據抑制凝集的程度來判定血型物質的含量。該操作步驟相對繁瑣、耗時，需要對紅細胞進行反復洗滌后加入抗球蛋白試劑觀察凝集現象，結果判斷受人為因素影響較多，重復性較差;同時受洗滌過程的影響，抗體易被洗脫而出現假陰性。MGTA是利用抗原與相應抗體的免疫特異反應和微柱凝膠的分子篩作用，通過離心將發生凝集反應的紅細胞阻滯于凝膠之上，未凝集的紅細胞通過凝膠間隙到達凝膠底部，從而區分有無凝集。此法實驗結果清晰，無需用顯微鏡觀察，操作簡單，省去了多次洗滌的繁瑣步驟，并且具有血清用量少、反應靈敏度高、結果可反復觀察的優點，尤其是抗體效價檢測結果中各梯度的凝集強度清晰，與傳統的抗球蛋白試管法比較更能準確檢測孕婦血液中的免疫性IgG 抗體和效價［7］。

母嬰血型不合引起的HDN由于缺乏有效的預防和治療藥物，導致死胎、新生兒膽紅素腦病發生率較高［8-9］。HDN基本病因是免疫性溶血反應，通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)，K細胞Fc受體與致敏紅細胞IgG抗體結合導致紅細胞破裂而溶血［10］。HDN的發生與患兒血型抗原的強弱、母體內IgG抗-A(B)效價的高低、胎盤的屏障作用以及胎兒體液內血型物質的含量等因素有關，因可溶性血型物質能中和抗-A(B)抗體，從而保護胎兒紅細胞不產生溶血反應，起到阻止或緩解ABOHDN發生的作用。本研究采用MGTA檢測茵梔黃口服液中血型物質的含量，該法敏感性高，特異性強，結果準確，影響因素少，具有明顯的優越性;檢測到茵梔黃口服液中含有B血型物質，為早期干預治療母嬰血型不合引起的HDN提供了理論依據。

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