血必凈注射液對自發性細菌性腹膜炎患者Th1/Th2亞群的影響

毛燕群，陳凱紅，孫 彤，裴 豪

0 引言

自發性細菌性腹膜炎(Spontaneous bacterial peritonitis，SBP)又稱原發性腹膜炎，是指腹腔內無臟器穿孔而發生的急性細菌感染，多因致病菌經血液或淋巴傳播而致，SBP的發生主要與肝硬化患者機體免疫力下降、門脈高壓、腸壁淤血水腫、腸壁屏障破壞、腸道菌群易位等原因有關。SBP的發生與肝功能的損傷程度密切相關[1]，其反過來又可進一步加重原有病情，并誘發肝性腦病、上消化道出血及肝腎綜合征，甚至多臟器功能衰竭等嚴重并發癥而危及生命。因此，SBP的治療在晚期肝病的治療中至關重要。本研究探討了SBP的治療中應用血必凈注射液聯合抗菌藥物治療，相對于單獨應用抗菌藥物治療，對自發性細菌性腹膜炎患者治療前、后血清Th1/Th2平衡的變化，以觀察血必凈注射液對Th1/Th2平衡的影響。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2010年3月至2012年9月在我院傳染科住院的乙型肝炎后肝硬化合并自發性細菌性腹膜炎患者60例，隨機分為2組。血必凈組35例，男25例，女10例，年齡27～66歲，平均(47.11±11.35)歲。對照組25例，男18例，女7例，年齡29～65歲，平均(46.92±10.16)歲。SBP的診斷符合2004年美國肝病研究學會肝硬化腹水指南對SBP的診斷標準[2]。血必凈組腹水培養陽性5例，其中，大腸埃希氏菌4例，肺炎克雷伯菌1例。對照組腹水培養陽性4例，均為大腸埃希氏菌。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對照組應用頭孢吡肟(深圳立健藥業有限公司)靜脈注射，2 g/次，2次/d，輔以其他保肝、降酶、退黃、利尿等治療。血必凈組在對照組治療的基礎上加用血必凈注射液(天津紅日藥業股份有限)靜脈滴注，50 mL/次，2次/d。排除入組前已經具有重型肝炎的患者，兩組均未應用其他免疫增強劑。

1.2.2 試劑和儀器 CY5(吲哚-5-菁)標記的抗CD4單抗、異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)標記的抗CD3單抗、巰基化藻紅蛋白(Phycoerthrin PE)標記的抗CD30單抗、鼠抗人IgG1-PE、鼠抗人IgG1-FITC和鼠抗人lgG1-Cy5均為美國EB公司提供，淋巴細胞分離液(美國Sigma公司)，RPMI-1640培養液、胎牛血清(美國Gibco公司)，T細胞分離富聚柱(美國BD公司)，流式細胞儀為美國BECKMAN COULTER公司的EPICS XL型。

1.2.3 外周血單個核細胞(Peripheral blood monoeuclear cell，PBMC)的分離 所有受試者均于治療前、治療第4天及治療第8天時采取患者外周靜脈血4 mL，肝素抗凝，用淋巴細胞分離液分離得單個核細胞，無菌玻璃培養皿37 ℃培養30 min，去除黏附于玻璃培養皿的PBMC，以獲取懸浮的淋巴細胞。用溶血劑(0.85%氯化銨)溶解細胞，經T細胞分離富聚柱得純化的T細胞，用20%的小牛血清RPMI-1640培養液調整細胞濃度約2×106/mL。流式細胞術法檢測其純度>98%，臺盼藍拒染法檢測其活性>97%。

1.2.4 Thl、Th2亞群的測定 取2支試管，各加入100 μL PBMC懸液。2管分別加入抗CD3-FITC、抗CD4-Cy5、抗CD30-PE(CD4+管)；鼠抗人lgG1-Cy5、鼠抗人IgG1-PE、鼠抗人IgG1-FITC(陰性對照管)。各種標記抗體均為15 μL，混勻，4 ℃避光30 min，磷酸鹽緩沖液洗滌2次，各管加入0.5 mL緩沖液，上流式細胞儀檢測。以CD3+、CD4+、CD3O-T細胞代表Thl細胞，以CD3+、CD4+、 CD3O+T細胞代表Th2細胞。

1.2.5 血清HBV標志物檢測 采用時間分辨熒光定量分析法，試劑盒購自上?？迫A公司。

2 結果

兩組治療前后血清Th1、Th2的變化見表1。

表1 治療前后兩組血清Th1/Th2的變化

注：與上一個治療時間段比較，#P<0.05，##P<0.01；與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

由表1可見，治療前兩組患者Th1、Th2及Th1/Th2比較差異均無統計學意義(P>0.05)。兩組患者Th1、Th2細胞均于治療4 d后升至峰值，之后下降。治療后4、8 d，兩組患者Th1細胞水平均有所提高(P<0.05)；兩組Th1細胞水平比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后4 d，兩組患者Th2細胞水平均有所提高(P<0.05)；治療后8 d均降低，與治療前比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后4 d、8 d，兩組患者Th2細胞水平比較差異均無統計學意義(P>0.05)。治療后，兩組患者Th1/Th2比值均持續升高(P<0.01)；治療后4 d、8 d，兩組比較差異均有統計學意義(P<0.01)。

3 討論

根據分泌細胞因子和介導免疫功能的不同，輔助性T細胞主要分為Thl和Th2兩大類。Th1細胞又稱為促炎性T細胞，可特異分泌干擾素γ(IFN-γ)、白細胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子β(TNF-β)等細胞因子；能激活巨噬細胞，引起細胞毒作用，介導細胞免疫應答；可促進遲發性超敏反應，在器官移植排斥反應和自身免疫病的誘導過程中起重要作用；但反應過度也會引起組織損傷。Th2細胞又稱為抗炎性T細胞，可特異性分泌IL-4、IL-6、IL-10等Th2類細胞因子，主要輔助B細胞分化成為抗體產生細胞，與體液免疫相關，在過敏反應中起主導作用，介導體液免疫。Th1細胞產生的細胞因子可抑制Th2細胞的增殖分化，并促進Th1細胞的自身分化成熟。反之，Th2細胞產生的細胞因子抑制Th1細胞的增殖分化，促進Th2細胞的自身分化成熟。在正常情況下，二者處于平衡狀態，維持機體正常免疫功能。研究表明，Th1/Th2之間的平衡與多數真菌、細菌、病毒等所致的感染性疾病病情變化關系密切。在動物試驗中，患腹膜炎的試驗大鼠隨著腹膜炎的嚴重程度，其產生IFN-γ和IL-12的能力減弱，Th1/Th2的細胞因子的平衡狀態被打破，Th2表型占主導地位[3]。

血必凈注射液由紅花、赤芍、川芎、丹參、當歸5味中藥組成，具有活血化瘀、扶正祛邪、清熱解毒、菌毒并治等功效。其主要有效成分包括赤芍、丹參素、紅花黃色素A、酚酸、黃酮苷和苯乙基苷類、阿魏酸、芍藥苷、原二茶醛等[4-5]。有報道，血必凈注射液具有拮抗內毒素、抑制多種炎癥介質、改善微循環及凝血功能障礙等作用，可以明顯改善外周血中性粒細胞的趨化、吞噬、氧化呼吸爆發功能；同時，強效拮抗內毒素誘導單核/巨噬細胞產生的內源性炎性介質失控性釋放，加強單核細胞人類白細胞Ⅱ類抗原(HLA、DR)表達，調節機體的免疫功能，促進免疫功能恢復[6-7]。本研究結果顯示，兩組患者于腹膜炎癥開始時，其Th1、Th2 及Th1/Th2均處于一個較低的水平。其后，由于炎癥因子、細菌毒素及免疫系統之間的復雜影響，兩組患者Th1、Th2 及Th1/Th2均有明顯上升，Th1應答和Th2應答均開始活躍。血必凈組Th1細胞在治療第4天的峰值和治療第8天的水平均明顯高于對照組(P<0.05)，表明血必凈組Th1應答明顯強于對照組。同時兩組患者Th2細胞水平在治療第4天和治療第8天時比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，提示兩組患者Th2應答處于一個相似的水平。在Th1/Th2比值上，兩組雖均有明顯的持續性上升(P<0.01)，但在治療第4天和治療第8天，血必凈組均明顯高于對照組(P<0.01)。兩組患者經治療后，其Th1/Th2平衡明顯向Th1優勢漂移，而血必凈組的Th1漂移更加明顯。以上研究結果提示，血必凈注射液可以明顯促進乙型肝炎后肝硬化合并原發性腹膜炎患者的Th1應答，結果即為腹腔炎癥可以被更加迅速、有效地控制。這些免疫反應與血必凈注射液的抑制炎性介質、改善感染時的特異性免疫功能狀態有關，而其改善微循環、拮抗內毒素以及抗細胞凋亡、改善組織器官血液循環、增加組織氧代謝的作用[8-9]亦可以保護腹膜炎患者脆弱的肝、腎功能，避免感染導致的肝功能損傷迅速加重，減少重型肝炎的產生及肝腎綜合征的發生，從而進一步減少病死率。

綜上所述，血必凈注射液可以改善促炎/抗炎反應平衡，促進炎癥吸收，同時更好地保護患者肝、腎功能，降低患者的病死率。因此，在自發性細菌性腹膜炎患者的治療中，配合應用血必凈注射液具有一定的臨床意義。

參考文獻：

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