西洛他唑?qū)毙阅X梗死患者血小板活化功能的作用

林志堅(jiān)， 陳旭輝， 吳 軍， 張海鷗

西洛他唑是一種磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)抑制劑，通過抑制血小板及血管平滑肌內(nèi)PDE活性，抑制內(nèi)皮細(xì)胞血小板源性生長因子的產(chǎn)生，從而增加血小板及血管平滑肌內(nèi)環(huán)腺苷酸(cyclic Adenosine monophosphate，cAMP)濃度，發(fā)揮抗血小板聚集及血管擴(kuò)張作用。血小板活化在腦動(dòng)脈粥樣硬化、腦血栓形成及腦缺血后炎癥損傷等過程起重要的作用。本研究運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測西洛他唑?qū)毙阅X梗死患者血小板活化功能的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2012年11月～2013年11月在北京大學(xué)深圳醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的急性腦梗死患者52例，男29例，女23例;年齡52～81歲，平均63.8±9.7歲。入組標(biāo)準(zhǔn):(1)符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)顱腦計(jì)算機(jī)斷層掃描(computer tomography，CT)和(或)核磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)證實(shí);(2)發(fā)病72 h以內(nèi);(3)患者同意參加本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)近2 w有感染病史;(2)近1 y內(nèi)患心肌梗死或行重大外科手術(shù);(3)合并惡性腫瘤、血液病、自身免疫性疾病、肝腎功能衰竭;(4)入院前2 w內(nèi)應(yīng)用過抗血小板制劑或抗凝藥。

1.2 給藥方法

所有急性腦梗死患者均口服西洛他唑膠囊(浙江為康制藥公司)每次100 mg，每日2次。

1.3 CD62P和 PAC-1的檢測

受試者分別在服藥前、服藥后3 d、1 w、2 w采集肘靜脈血5 ml，棄去混有組織液的前2 ml，剩余的3 ml加入枸櫞酸鈉抗凝管(美國BD公司)，輕輕混勻，即刻送檢。在對照管中加入藻紅蛋白標(biāo)記的鼠抗人IgG(IgG-PE)，異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鼠抗人IgM(IgM-FITC)及藻紅蛋白偶聯(lián)物標(biāo)記的鼠抗人vWF(Willebrand因子)的受體(CD42b-TC)各20 μl;在試驗(yàn)管中加入 3種抗體(PAC-1-FITC、CD62P-PE、CD42b-TC)各 20 μl，在對照管和試驗(yàn)管中各加入血標(biāo)本5 μl?；靹蚍跤?0 min，各加入1 ml冷的固定液，混勻避光放置20 min。采用流式細(xì)胞儀(Beckman-Coulter公司生產(chǎn))檢測，24 h內(nèi)上機(jī)，以CD42b-TC和側(cè)散射光散點(diǎn)圖設(shè)血小板門，測定血小板膜PAC-1、CD62P表達(dá)陽性百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

急性腦梗死患者在用藥后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1與用藥前比較均有明顯的下降(P＜0.05)，用藥后 3 d CD62P、PAC-1 與用藥前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，用藥后1 w CD62P、PAC-1和用藥后2 w比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(見表1)。

表1 急性腦梗死患者服用西洛他唑前后外周血CD62P、PAC-1 的變化(，%)

表1 急性腦梗死患者服用西洛他唑前后外周血CD62P、PAC-1 的變化(，%)

與用藥前比較 ▲P＜0.05，△P＞0.05;與用藥后3 d比較▼P＜0.05;與用藥后1 w 比較▽P ＞0.05

時(shí)間 例數(shù)CD62P PAC-1用藥前用藥后3 d用藥后1 w用藥后2 w 52 52 52 52 34.83 ±7.89 31.90 ±6.33△26.24 ±9.07▲▼24.61 ±8.41▲▼▽13.57 ±4.77 11.28 ±4.26△9.45 ±6.13▲▼8.03 ±5.60▲▼▽

3 討論

急性腦梗死發(fā)生時(shí)，從血管壁受到損害到血栓形成的過程中，血小板發(fā)生一系列極其復(fù)雜的反應(yīng)。血小板活化時(shí)，P-選擇素(CD62P)和PAC-1表達(dá)于血小板膜表面，成為血小板活化的2個(gè)重要的標(biāo)志物［1］。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)急性腦梗死組外周血CD62P、PAC-1水平明顯高于對照組，而且與美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS)評分呈正相關(guān)［2］。

西洛他唑通過抑制血小板及血管平滑肌內(nèi)PDE活性，從而增加血小板及平滑肌內(nèi)cAMP濃度、發(fā)揮抗血小板作用及血管擴(kuò)張作用。西洛他唑抑制ADP、腎上腺素、膠原及花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板初期、二期聚集和釋放反應(yīng)，且呈劑量相關(guān)性［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者在口服西洛他唑后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1與用藥前比較均有明顯的下降。P-選擇素(CD62P)主要存在于血小板胞漿的顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞Weibel-Palade小體內(nèi)，在凝血酶、補(bǔ)體、氧自由基或膠原等刺激物的作用下，血小板的顆粒膜與質(zhì)膜迅速融合，P-選擇素即表達(dá)在血小板質(zhì)膜表面［4］，成為血小板活化的一個(gè)特征性指標(biāo)，主要介導(dǎo)活化的內(nèi)皮細(xì)胞或血小板與白細(xì)胞的粘附，在炎癥損傷中起重要作用。GPⅡb/Ⅲa是血小板上含量最多的膜蛋白，當(dāng)血小板活化后，隱蔽狀態(tài)的GPⅡb/Ⅲa全部表達(dá)到血小板膜表面，同時(shí)，GPⅡb/Ⅲa的結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象及周圍微環(huán)境的改變，使纖維蛋白原受體結(jié)合部位暴露，獲得受體活性，并與之結(jié)合，引起血小板聚集。GPⅡb/Ⅲa與纖維蛋白原的結(jié)合是各種血小板激動(dòng)劑所引起的血小板聚集的最后通路［5］，PAC-1是 GPⅡb/Ⅲa復(fù)合物纖維蛋白原受體，血小板表面PAC-1表達(dá)的增加是血小板活化的另一個(gè)重要的標(biāo)志。西洛他唑?qū)ρ“寤罨囊种谱饔?，可能通過抑制CD62P、PAC-1在血小板質(zhì)膜的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。

目前，阿司匹林是公認(rèn)的缺血性腦卒中二級預(yù)防的首選藥物，阿司匹林通過不可逆的乙?；h(huán)氧化酶-1(cyclooxygenase-1，COX-1)，使 AA不能合成前列腺素，TXA2合成受阻，從而抑制血小板的聚集。阿司匹林對血小板途徑較單一，對急性缺血性腦卒中血小板的活化抑制較弱。有研究發(fā)現(xiàn)［6］，單獨(dú)口服阿司匹林并不能抑制動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成中的血小板活化或聚集，這是因?yàn)檠“寤罨赡苡善渌緩皆鰪?qiáng)，如炎癥反應(yīng)、自由基形成、氧化修飾低密度脂蛋白等。西洛他唑在體內(nèi)抗栓過程中可以通過較多的途徑起作用，它不僅具有抗血小板聚集、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、促進(jìn)血管增生等藥理學(xué)作用，還可預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化形成以及血管閉塞［7］。有研究表明［8］，阿司匹林聯(lián)合西洛他唑可明顯減少阿司匹林抵抗的發(fā)生;另有研究發(fā)現(xiàn)［9］，西洛他唑可減緩顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。缺血性卒中后西洛他唑代替阿司匹林的隨機(jī)、雙盲、試驗(yàn)研究(Cilostazol versus Aspirin for Secondary Ischemic Stroke Prevention，CASISP)表明［10］，西洛他唑組缺血性和出血性卒中的發(fā)生率均較低，腦出血并發(fā)癥顯著低于阿司匹林組，提示西洛他唑安全性、有效性優(yōu)于阿司匹林，適合用于中國缺血性腦卒中患者的二級預(yù)防。

本研究還發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者在口服西洛他唑后3 d CD62P、PAC-1與用藥前比較尚無明顯下降，服藥后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1下降顯著，而用藥后2 w與用藥后1 w CD62P、PAC-1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示使用西洛他唑1 w，其對血小板活性的抑制作用可達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的水平。

綜上所述，西洛他唑?qū)ρ“寤罨哂辛己玫囊种谱饔?，用? w可達(dá)到較為穩(wěn)定的效果，可用于非心源性缺血性腦卒中的預(yù)防與治療。

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