結(jié)腸癌中Syndecan-1和HPA-1基因的表達(dá)及與其侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

閆玉虎 常 青 趙元華

結(jié)腸癌中Syndecan-1和HPA-1基因的表達(dá)及與其侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

閆玉虎 常 青 趙元華

目的 探討Syndecan-1基因和HPA-1基因檢測(cè)在結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值。方法 選擇73例結(jié)腸癌手術(shù)切除的標(biāo)本，包括結(jié)腸癌組織、癌旁組織和正常組織；采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)三組Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表達(dá)水平。結(jié)果 結(jié)腸癌組織中Syndecan-1 mRNA表達(dá)水平顯著低于癌旁組織和正常組織(P<0.05)，HPA-1 mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織和正常組織(P<0.05)；其中癌旁組織Syndecan-1 mRNA表達(dá)水平低于正常組織，HPA-1 mRNA表達(dá)水平高于正常組織，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤體積、分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、腫瘤TMN分期與Syndecan-1mRNA表達(dá)正相關(guān)，與HPA-1mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析顯示，結(jié)腸癌組織中HPA-1mRNA表達(dá)與Syndecan-1mRNA呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ=-0.724,P=0.000)。結(jié)論 Syndecan-1基因和HPA-1基因檢測(cè)對(duì)判斷結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移、評(píng)價(jià)預(yù)后有著重要的作用，值得臨床借鑒。

結(jié)腸癌；侵襲轉(zhuǎn)移；硫酸乙酰肝素蛋白多糖；預(yù)后

(ThePracticalJournalofCancer,2014,29:1535～1537)

本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HPSG)家族中主要基因Syndecan-1和HPA-1基因表達(dá)水平，探討其在結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后評(píng)價(jià)中的作用，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2009年5月至2013年5月行手術(shù)切除且術(shù)后病理檢查證實(shí)為結(jié)腸癌的73例標(biāo)本，所有患者術(shù)前均未接受化療或放療。73例標(biāo)本包括結(jié)腸癌組織、距癌病灶邊緣2 cm的癌旁組織以及邊緣的正常組織；所有標(biāo)本取出后立即置于-80 ℃冰箱中保存待檢。

1.2 儀器與試劑

RNAsimple 總RNA提取試劑盒購(gòu)至天根生化科技(北京)有限公司，RT-PCR試劑盒由東洋紡(上海)生物科技有限公司提供；定量PCR(Rotor-gene 3000 Real-Time PCR System)。

1.3 方法

1.3.1 總RNA提取 按照RNA提取試劑盒的說(shuō)明書提取RNA，進(jìn)行純度檢測(cè)，并經(jīng)瓊脂凝膠電泳確認(rèn)其完整性。

1.3.2 反轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增 將提取的總RNA按照RT-PCR試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增。相關(guān)引物由上海生物工程公司合成。Syndecan-1引物：上游5'-GCGTGAGAGCGATGTGTGTA-3'；下游5'-GACCAGTAATTGCTCGAGCA-3'；擴(kuò)增長(zhǎng)度128bp。HPA-1引物：上游5'-GCATCGGTGCTTATATCGAT-3'；下游5'-ATCGTCGATGTTAGCGATTA-3'；擴(kuò)增長(zhǎng)度105bp。內(nèi)參引物：上游5'-TGATGCGTGTGTAGCATGAGAA-3'；下游5'-GCGATCGTCACTCGTGATCAG-3'；擴(kuò)增長(zhǎng)度146 bp。

1.3.3 反應(yīng)體系 總體系30 μl，其中cDNA 5 μl，ddH2O 14 μl，buffer緩沖液3 μl，dNTP 1 μl，Taq聚合酶0.5 μl，MgCl24.5 μl，上游、下游引物各1 μl；擴(kuò)增條件：95 ℃ 1 min，90 ℃ 1 min，60 ℃退火1 min，70 ℃延伸1 min。45個(gè)循環(huán)后，再72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物采用瓊脂凝膠電泳，溴化乙錠染色后，將PCR產(chǎn)物割膠回收，并于紫外燈下觀察結(jié)果。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

以2-△△Ct表示樣本目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量，其中△Ct=樣本平均Ct值-內(nèi)參物平均Ct值，△△Ct=△Ct-(對(duì)照品平均Ct值-樣本內(nèi)參平均Ct值)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表達(dá)水平比較

結(jié)腸癌組織中Syndecan-1 mRNA表達(dá)水平顯著低于癌旁組織和正常組織(P<0.05)，HPA-1 mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織和正常組織(P<0.05)；其中癌旁組織Syndecan-1 mRNA表達(dá)水平低于正常組織，HPA-1 mRNA表達(dá)水平高于正常組織，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組Syndecan-1 mRNA和HPA-1 mRNA表達(dá)水平比較

注：a為與正常組織相比，P<0.05；b為與癌旁組織相比，P<0.05。

2.2 結(jié)腸癌組織中Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表達(dá)與其臨床參數(shù)的關(guān)系

結(jié)腸癌中Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、TMN分期有著密切關(guān)系；其中腫瘤體積、分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、腫瘤TMN分期與Syndecan-1mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，與HPA-1mRNA表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

2.3 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示，結(jié)腸癌組織中HPA-1mRNA表達(dá)與Syndecan-1mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ=-0.724,P=0.000)。

3 討論

Syndecan-1是1種表達(dá)于上皮細(xì)胞的黏附分子，主要參與調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化以及遷移等。沈慶[1]在研究中發(fā)現(xiàn)，Syndecan-1能夠促進(jìn)細(xì)胞之間的黏附阻止細(xì)胞的侵襲和脫落，進(jìn)而限制腫瘤細(xì)胞的惡性表型。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，細(xì)胞膜上的Syndecan-1表達(dá)水平會(huì)顯著降低，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞接觸性抑制功能喪失，引起腫瘤細(xì)胞大量增殖分化；同時(shí)腫瘤細(xì)胞潛在轉(zhuǎn)移性和侵襲性能力也隨之增強(qiáng)。亓玉琴[2]在研究中證實(shí)，Syndecan-1在多種腫瘤的表達(dá)中均顯著降低，其中降低最為明顯主要包括胃癌、大腸癌等消化道腫瘤。國(guó)外學(xué)者[3]在研究中提出，Syndecan-1與胃癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移、TMN分期、浸潤(rùn)深度均有著密切關(guān)系。管小猛[4]研究顯示，正常胃組織中Syndecan-1 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)99.6%，癌旁組織為31.5%，而原發(fā)性胃癌表達(dá)量?jī)H為3.6%，這提示Syndecan-1與腫瘤轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系，隨著腫瘤浸潤(rùn)深度增加，Syndecan-1表達(dá)水平顯著降低；換言之，Syndecan-1表達(dá)水平的減少預(yù)示著腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的加深。在本研究中，結(jié)腸癌組織Syndecan-1 mRNA表達(dá)水平顯著低于癌旁組織和正常組織，這說(shuō)明在結(jié)腸癌組織中，Syndecan-1表達(dá)水平也有上述的趨勢(shì)，這與王賀[5]報(bào)道結(jié)論一致。進(jìn)一步研究顯示腫瘤體積、分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、腫瘤TMN分期與Syndecan-1mRNA表達(dá)負(fù)相關(guān)，這證實(shí)了Syndecan-1可以作為結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后評(píng)價(jià)的指標(biāo)之一，對(duì)預(yù)測(cè)患者病情、評(píng)價(jià)治療效果具有指導(dǎo)作用。

表2 Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表達(dá)與結(jié)腸癌臨床參數(shù)的關(guān)系

HPA-1是1種核苷內(nèi)切酶，它能夠裂解細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸乙酰肝素側(cè)鏈，進(jìn)而將細(xì)胞外基質(zhì)分解，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。王賀[6]發(fā)現(xiàn)HPA-1在正常組織中表達(dá)較少，在胎盤、淋巴組織等穿透性強(qiáng)的組織中表達(dá)較高，而在腫瘤組織中表達(dá)水平最高。張瑋[7]對(duì)卵巢癌進(jìn)行HPA-1基因轉(zhuǎn)染，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后的HPA-1基因能夠顯著提高卵巢癌的侵襲能力。馬秀梅[8]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胃癌組織中HPA-1mRNA表達(dá)，結(jié)果顯示胃癌表達(dá)陽(yáng)性率為87.6%，癌旁胃黏膜為21.8%，正常胃黏膜為4.7%，該作者認(rèn)為HPA-1mRNA表達(dá)于胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后的病理學(xué)指標(biāo)呈正相關(guān)。本研究顯示HPA-1mRNA表達(dá)與Syndecan-1mRNA呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步分析顯示HPA-1 mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織和正常組織，腫瘤體積、分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、腫瘤TMN分期與HPA-1 mRNA表達(dá)正相關(guān)，證實(shí)HPA-1基因也可以作為結(jié)腸癌評(píng)估指標(biāo)之一。

綜上，Syndecan-1基因和HPA-1基因參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，兩者檢測(cè)可以作為結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。

[1] 沈 慶,蘭四友,蔣幼凡,等.Syndecan-1蛋白及mRNA在肺鱗癌中的表達(dá)及意義〔J〕.山東醫(yī)藥,2011,51(4):98-100.

[2] 亓玉琴,司君利,李文利,等.Syndecan-1和HPA-1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)及其與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國(guó)癌癥雜志,2010,20(2):110-115.

[3] Hassan H,Greve B,Pavao MS,et al.Syndecan-1 modulates p-integrin-dependent and interleukin-6-dependent functions in breast cancer cell adhesion,migration,and resistance to irradiation〔J〕.FEBS J,2013,280(10):2216-2227.

[4] 管小猛,洪 亮.胃癌組織中Syndecan-1的表達(dá)變化〔J〕.山東醫(yī)藥,2009,49(34):48.

[5] 王 賀,司君利,張修振,等.實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)腸癌中Syndecan-1 m RNA和HPA-1 m RNA的表達(dá)及臨床意義〔J〕.癌癥,2010,29(3):310-315.

[6] 王 賀,孫風(fēng)波,張鳳娟,等.肝癌中Tiam-1和HPA-1的表達(dá)及其與侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床,2013,40(13):770-774.

[7] 張 瑋,楊幸子,王 琪,等.血清基質(zhì)金屬蛋白酶9和乙酰肝素酶及組織蛋白酶診斷卵巢癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移程度〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,35(6):559-563.

[8] 馬秀梅,王栓柱,于 宏,等.沉默乙酰肝素酶對(duì)人胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響〔J〕.腫瘤,2009,29(10):924-928.

(編輯：吳小紅)

The Expression of Syndecan-1 Gene and HPA-1 Gene in Colon Cancer and their Correlation with Invasion and Metastasis and Prognosis

YANYuhu,CHANGQing,ZHAOYuanhua.

HubeiCancerHospital,Wuhan,430079

Objective To explore the clinical value of Syndecan-1 gene and HPA-1 gene in invasion and metastasis and prognosis of colon cancer.Methods 73 cases of colorectal cancer samples including colon cancer tissues,paracancerous tissues and normal tissues were selected.Syndecan-1mRNA and HPA-1mRNA expression of the 3 groups were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR.Results The expression level of Syndecan-1 mRNA in colon cancer tissues was significantly lower than that of the paracancerous tissues and normal tissues (P<0.05),the expression level of HPA-1 mRNA in colon cancer tissues was significantly higher than that the paracancerous tissues and normal tissues (P<0.05);the expression level of Syndecan-1 mRNA in paracancerous tissues was lower than that of normal tissues,HPA-1 mRNA expression level in paracancerous tissues was higher than that of the normal tissues,the difference was statistically significant (P<0.05).Tumor size,degree of differentiation,infiltration,lymph node metastasis,hematogenous metastasis,and TMN staging were positively correlated with Syndecan-1mRNA expression,and were negatively correlated with HPA-1mRNA expression (P<0.05).Pearson correlation analysis showed a negative correlation between the expression of HPA-1mRNA and Syndecan-1mRNA in colorectal cancer (γ=-0.724,P=0.000).Conclusion Detection of Syndecan-1 gene and HPA-1 gene has important significance in evaluating invasion and metastasis,predicting prognosis of colon cancer,and it is worthy of the clinical promotion.

Colon cancer;Invasion and metastasis;Heparan sulfate proteoglycan;Prognosis

430079 湖北省腫瘤醫(yī)院

趙元華

10.3969/j.issn.1001-5930.2014.12.008

R735.3+5

A

1001-5930(2014)12-1535-03

2014-08-20

2014-09-17)