不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量比較*

周瀅，楊軍宣

(重慶醫科大學中醫藥學院，重慶 400016)

川芎為傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiongHort.)的干燥根莖，始載于《神農本草經》，具有活血行氣、祛風止痛的功效，主要用于胸痹心痛、胸脅刺痛、跌撲腫痛、月經不調、經閉痛經、癥瘕腹痛、頭痛、風濕痹痛等［1-2］。目前，國內已有6家企業生產川芎配方顆粒，但筆者未見對不同廠家生產的川芎配方顆粒進行質量評價的研究，為評價不同廠家川芎配方顆粒的質量，筆者在本實驗中以阿魏酸的含量為指標，參考文獻［3-4］，采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)對6個廠家川芎配方顆粒進行了比較研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫 1200B型高效液相色譜儀(G1312B型二元泵，G1315C型 DAD檢測器，ChemStation化學工作站);電子天平:BP211D(Sautoris，德國)d=0.1/0.01 mg，max=210/80 g;超聲波清洗器:KQ5200DB型，昆山市儀器有限公司。

1.2 試藥 阿魏酸對照品(購自中國食品藥品檢定研究院，含量:99.8%，批號:110773-200611)，6 批川芎配方顆粒分別為:A，批號:A091181-01;B，批號:0906160;C，批號:0912002;D，批號:0902021;E，批號:0908008;F，批號:090401。甲醇(迪馬公司，色譜純)，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 稱取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每毫升含0.035 mg溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30min，靜置，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 取本品缺川芎藥材的配方顆粒1.0 g，照供試品的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.1.4 色譜條件 色譜柱:C18柱(250mm×4.6mm，5 μm，Phenomenex公司);流動相:甲醇-1%醋酸溶液(30∶70);檢測波長:321 nm;流速:1.0mL·min－1，理論板數按阿魏酸峰計算應不低于4 000［5］。在此條件下，川芎配方顆粒中阿魏酸的分離度好，理論板數較高，峰形對稱性好。結果見圖1。

2.1.5 方法學考察

圖1 川芎配方顆粒HPLC圖

2.1.5.1 標準曲線的繪制 分別精密吸取阿魏酸對照品溶液(0.035 mg·mL－1)1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以阿魏酸的峰面積值(Y)為縱坐標，以阿魏酸的進樣量(X)為橫坐標，計算得回歸方程為Y=2 744.5X－0.652 7，R2=0.999 9，結果表明，阿魏酸進樣量在0.035～0.70 μg范圍內，進樣量與峰面積值呈良好的線性關系。

2.1.5.2 精密度實驗 精密吸取對照品溶液(0.035 mg·mL－1)10 μL，連續進樣 6 次，測定峰面積。計算得RSD為0.85%(n=6)，結果表明儀器精密度良好。

2.1.5.3 重復性實驗 稱取同一批樣品(批號:0912002)，精密稱定，按上述測定方法制備樣品供試品溶液，共6份，測定峰面積，RSD 為0.89%(n=6)，表明該方法重復性良好。

2.1.5.4 穩定性實驗 精密吸取對照品溶液(0.035 mg·mL－1)和供試品溶液各 10 μL，室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10 h 進樣，按上述色譜條件測定阿魏酸的峰面積，計算得對照品RSD為1.17%(n=6)，供試品RSD為1.08%(n=6)，表明對照品溶液和供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.1.5.5 加樣回收率實驗 取已知含量的樣品(批號:0912002，含量為 1.36 mg·g－1)0.25 g，精密稱定，共 6份，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對照品溶液(0.035 mg·mL－1)10mL，按供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，計算回收率，平均加樣回收率為99.47%，RSD為1.23%(n=6)，樣品回收率良好。結果見表1。

2.2 樣品含量測定結果 分別取不同批號的川芎配方顆粒約0.5 g，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，按上述色譜條件測定阿魏酸峰面積，計算阿魏酸含量，所測結果見表2。

3 討論

3.1 超聲提取時間的確定 在供試品溶液的制備中，本研究對樣品的提取方法進行了考察，發現超聲提取與加熱回流的阿魏酸提取率相等，因超聲提取方法相對簡便且易于操作，為此采用60℃時超聲處理作為提取方法。同時考察了超聲時間對提取率的影響，發現隨著超聲時間由10，20min至30min時，阿魏酸的提取率不斷增加，而超聲提取40，60min，阿魏酸的含量不再增加，因此確定超聲提取時間為30min。

表1 阿魏酸加樣回收實驗結果 mg

表2 不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量測定結果

3.2 川芎配方顆粒的質量標準需要盡早制定 由于不同廠家的每克配方顆粒劑相當于原藥材飲片的當量并不相同，因此在對不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量進行比較時，按每克原藥材飲片所提取的阿魏酸含量進行換算，結果表明，6個廠家樣品的阿魏酸含量差異顯著，含量最低與最高廠家的差異可達8倍多(見表2)。這可能與兩個主要因素有關，一是與不同廠家投料的川芎飲片質量差異有關，因為阿魏酸含量也可能受川芎產地、采收季節、儲存時間等因素影響;二是與廠家采用的生產工藝不同有關，這也可能是造成阿魏酸含量差異顯著的重要原因。因此，生產廠家還應采用合理的生產工藝，相關管理部門也應制定統一的質量標準對其質量進行控制，以減少廠家之間川芎質量的差異，提高臨床用藥的均一性。

3.3 阿魏酸轉移率低，有待考察醇提工藝 2010年版《中華人民共和國藥典》規定川芎飲片含阿魏酸不得低于 0.10% ，相當于不得少于 1 mg·g-1［5］，若按 1 g川芎飲片含1 mg阿魏酸計算，6個廠家中含量最高的廠家D，其配方顆粒中阿魏酸的轉移率也僅有57.7%，傳統中藥多為煎劑，因此目前廠家多采用水提取、濃縮的工藝制備配方顆粒。但在傳統中醫實踐中，也有相當一部分中藥在臨床中采用酒浸或黃酒煎煮使用。因此，若阿魏酸采用醇提方法制備配方顆粒或者川芎飲片在較低溫下煎煮提取，可能會大大提高有效成分的溶出和減少阿魏酸的損失，可能對減少原料藥的投入、節省中藥資源和降低成本有積極的意義。下一步可考慮在藥效、毒理、臨床療效研究的支持下，對川芎醇提工藝的可行性進行探討。

［1］張紅梅，宋景政，譚紅勝，等.從湯劑到顆粒劑:中藥配方顆粒20年回顧與展望［J］.世界科學技術——中醫藥現代化，2012，14(4):1741－1743.

［2］高學敏.中藥學［M］.北京:中國中醫藥出版社，2007:312.

［3］張昕瑩，郭淑云，張文娟，等.不同提取方法對川芎和香附有效成分溶出度的比較［J］.醫藥導報，2013，32(3):350－353.

［4］宋金春，楊鶴，胡傳芹，等.反相高效液相色譜法同時測定血清中阿魏酸和川芎嗪濃度［J］.醫藥導報，2004，23(1):45－46.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:38.