淺談T細胞γ干擾素釋放實驗對診斷潛伏性結核感染的臨床應用

劉穎

四川省德陽市人民醫院心胸外科，四川綿竹 618000

【摘要】結核病是由結核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，好發于15歲到35歲的青少年。其潛伏期為4～8周，其中80%發生在肺部，其它部位（頸淋巴、腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼）也可繼發感染。人與人之間呼吸道傳播是主要傳播方式。我國是全球22個結核病流行最嚴重的國家之一。早發現、早診斷、早治療是控制結核病情的根本所在，本文就T細胞γ干擾素釋放實驗對診斷潛伏性結核感染的臨床應用進行闡述。

【關鍵詞】T細胞γ干擾素釋放實驗；診斷； 潛伏性結核感染

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）12-0083-02

1.傳統檢驗方法

1.1涂片檢測

將患者的痰液或是其它部位的體液制成涂片在鏡下檢測患者的陰、陽性。

1.2 X線檢查

可早期發現結核，而且可對病灶的部位、范圍、性質、發展情況和效果作出診斷。

1.3結核菌素試驗（PPD試驗）

（1）陽性 表示結核感染，但并不一定患病。皮試呈陽性者，常提示體內有活動性結核灶。

（2）陰性 提示沒有結核菌感染。但仍要排除下列情況。①結核菌感染后，需4～8周變態反應才能充分建立；所以在變態反應前期，結素試驗可為陰性。②應用糖皮質激素等免疫抑制劑者營養不良以及麻疹、百日咳患者，結素反應可暫時消失。③嚴重結核病和各種危重患者對結素無反應。④其它：如淋巴免疫系統缺陷（白血病、結節病）患者和老年人的結素反應也常為陰性。

由于我國幾乎所有人群均有卡介苗（ BCG ）接種史，PPD結果不準確，僅供于篩查。傳統的診斷方法檢測率相對低且肺外結核診斷困難、常有“假陰/陽性”出現，延誤了早期發現及早期治療的最佳時機，隨著對IFN-γ在調節結核感染引起的細胞介導的免疫反應中起到的關鍵性作用的不斷了解，人們逐步認識到γ-干擾素釋放試驗（interferon gamma release assays， IGRAs）可用于結核感染的診斷1。資料顯示，IGRA特異性為98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA（T-SPOT.TB和QFT-G-IT）對2年內進展為結核的陰性預測值（NPV）分別為97.8%和99.8%；當免疫診斷檢測不局限于既往其他檢測陽性受試人群時，在隨訪19～24個月IGRA陽性者中結核進展率處于8%～15%，并且高于TST相關結果2。

2.T細胞γ-干擾素釋放試驗（IGRAs）

2.1原理

γ-干擾素釋放試驗是利用結核分枝桿菌特異或非特異抗原在體外刺激受檢者全血或外周血單個核細胞（PBMC），使T淋巴細胞產生大量IFN-γ，然后用酶聯免疫吸附法（ELISA）或酶聯免疫斑點法（ELISPOT）檢測IFN-γ濃度或計數分泌IFN-γ細胞的方法。國際上廣泛使用的IGRA有兩種，即澳大利亞產的QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）和英國產的T-SPOT.TB。我國各地醫院應用最為普遍的是T-SPOT.TB。目前IGRA 已經開始在英、美、日本等國用于活動性結核病和潛伏性結核感染者的診斷， HIV 合并結核感染的檢測， 區別結核感染者與BCG 接種以及耐藥結核菌感染的快速檢測等3。

2.2臨床意義

陰性結果 提示患者體內可能不存在針對結核桿菌特異的效應T細胞，基本可以排除結核桿菌感染的可能。

陽性結果 提示患者體內存在針對結核桿菌特異的效應T細胞，患者存在結核感染。但是否是活動性結核病，需結合臨床癥狀和其它檢測指標綜合判斷。T-SPOT.TB能更加準確地診斷潛伏性結核感染，對預測結核發病風險方面有一定意。

2.3臨床應用：

⑴. 結核病診斷與鑒別診斷、抗結核治療的療效評價；⑵. 免疫力低下/受抑制患者的結核診斷/感染篩查；使用生物制劑或免疫抑制劑患者的結核感染篩查：⑶ HIV感染者/腎透析患者/器官移植患者；⑷. 兒童結核病的輔助診斷4；⑸.結核密切接觸者/高危人群的結核感染篩查；⑹. 密切接觸者追蹤等。

3.標本采集與處理、注意事項

本實驗引進英國牛津原裝進口試劑，基于牛津大學研發的特異性T細胞反應技術平臺。

3.1抽血時間：星期一至五上午，當天11：00前統一收集。

3.2采集外周全血，無需空腹，需用專用綠色帽肝素（肝素鈉或肝素鋰）抗凝采血管采集，不得使用EDTA抗凝。

3.3采血量要求：

⑴ 2歲以下兒童 3-4ml （用一支5ml綠色帽肝素管）

⑵ 其它患者 6-8ml （用兩支5ml綠色帽肝素管）

⑶ 免疫力低下/受抑制患者 8-12ml （用兩支5ml綠色帽肝素管）

（免疫力低下/受抑制患者：白細胞數WBC<5.0×10*9/L）

3.4樣本室溫（15-25℃）保存與運輸，不得冷凍/冷藏，樣本采集后4小時內送到實驗室，以便盡快完成檢測。

3.5 10天內做過PET-CT或一周內有使用升高白細胞藥物的患者，會影響血液中淋巴細胞的分離，建議一周后再行檢測。

3.6 保存及運輸過程中防止顛簸，避免樣本溶血影響結果。

3.7 48小時送出報告單（因細胞培養時間需要24小時）。

T細胞γ干擾素釋放實驗具有較高的特異性和敏感性，是當前快速檢測結核感染和健康人群篩查潛伏性結核感染較有潛力的新方法。然而也存在操作技術要求高，試劑盒價格昂貴等缺點，限制了其在經濟發展水平低的發展中國家的應用。

參考文獻：

[1]肖倩，黃旭峰. T-SPOT TB試驗快速檢測結核桿菌感染的臨床應用研究[J]實驗與檢驗醫學，2009，27（3）：272-274

[2]高曉方，γ-干擾素釋放試驗研究進展 ，中國醫學論壇報 ，2011 ，1（7 ）：33-34

[3]張晶，劉威龍，周伯平，等. 結核分枝桿菌ESAT-6 蛋白的高效表達及在結核菌特異性細胞免疫檢測中的應用[J].中華結核和呼吸雜志，2009，32（1）：55-59.

[4]張衛平 韓 文 白玉峽， 等. 結核感染T細胞斑點試驗輔助診斷小兒肺結核的臨床研究.[J]臨床兒科雜志，2009，27（7）：635-637