紫外分光光度法測定保健食品中總黃酮的含量

董麗榮 楊曉梅 李宗順 白文莉

1.昆明市食品藥品檢驗所，云南 昆明 650032;2．云南省玉溪市食品藥品檢驗所，云南 玉溪 653100

近年來，隨著自由基生命科學的進展，黃酮類化合物不僅是一種活性物質，還是重要的營養物質，其藥理和營養性都得到了國內外的廣泛深入研究和臨床試驗［1］。作為一種新運用的營養素，黃酮類化合物對人體具有重要的生理保健功效，并體現出了如下功能:消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環、活化大腦及其它臟器細胞、抗脂肪氧化、抗衰老等［2、3］。目前市場上有較多以黃酮類為功效成分的保健食品，總黃酮也多作為主要的質量控制指標。

1 儀器與試劑

UV－260型紫外可見分光光度計 (日本島津);AEL－200型電子天平 (日本島津);BP211D－OCE型電子天平(德國賽多利斯)。

蘆丁對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號:10080－200707;含量以92．5%計);無水乙醇 (分析純，利安隆博華醫藥化學有限公司)。

2 方法與結果

2.1 檢測波長的選擇［4］取蘆丁對照品溶液 (15 μg/ml)在200～600 nm波長內掃描，結果表明:在360nm處，對照品溶液有最大吸收峰，故測定波長選擇360 nm。取“2.2項”下樣品溶液在200～600 nm波長內掃描，結果表明:在360 nm處有最大吸收峰。

2.2 樣品溶液的制備 取樣品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100ml，密塞，稱定重量，搖勻，超聲處理 (功率250 W，頻率40 KHZ)30分鐘，放冷，用30%乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得。試驗表明微孔濾膜過濾能除去樣品雜質，而對指標性成分沒有影響 (對照品溶液0.45μm微孔濾膜過濾后在360nm吸光度無明顯變化)。結果見表1。

表1 對照品溶液過濾前后吸光度變化情況

2.3 線性關系的考察

2.3.1 儲備液的制備 精密稱定蘆丁對照品為10.8mg，置于200ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 標準曲線的建立 分別精密吸取“2.3.1項”儲備液0.4、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 10 ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。取30%乙醇為空白對照，在360 nm波長處測定吸光度，以吸光度A值與濃度C值線性回歸，得曲線方程為:C=32.078A+0.003，r=1。結果表明，蘆丁在2～30μg/ml濃度范圍內，呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 取同一濃度蘆丁對照品溶液，連續測定6次，測定吸光度，RSD%為0.1%。

2.3.4 穩定性考察 取紐斯葆牌葛維片 (批號為BE263－A)14片，去包衣，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，密塞，稱定重量，超聲處理 (功率250 W，頻率40 KHZ)30分鐘，放冷，用30%乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得。分別于0、2、4、8、12、24h用紫外 －可見分光光度計測定其吸收度 (360nm)，測定結果RSD為0.7%，結果表明樣品溶液在24h內穩定。

2.3.5 重復性考察 取紐斯葆牌葛維片 (批號為BE263－A)20片，去包衣，研細，精密稱取6份，每份約0.5 g，樣品處理方法同“2.3.4項”，分別測定其吸收度，測定結果RSD為1.2%，結果表明，樣品重復性良好。

2.3.6 回收率試驗 精密稱取紐斯葆牌葛維片 (批號為BE263－A)粉末9份，每份約0.25 g，分別精密加入適量的蘆丁對照品溶液，按照“2.2.4項”操作，分別測定吸光度，計算回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率測定結果

表3 樣品測定結果

2.4 樣品含量測定結果 取17批市售含黃酮的樣品，按上述方法測定，結果見表3。

3 討論

保健食品中總黃酮的含量測定檢驗方法多采用聚酰胺小柱脫色除雜質，試驗操作表明精密度難以控制，且試驗中用到強致癌物苯作洗脫極［5］，不利于環境保護和操作者身體健康。本實驗樣品提取采用30%乙醇為溶劑［6］，回收率試驗表明樣品提取完全，且不使用苯、甲醇等具有毒性的有機溶劑，更環保和健康。

樣品超聲提取，經0.45μm微孔濾膜過濾，直接測定，快速、簡便、精密度良好，對照品溶液經微孔濾膜過濾前后，吸收度不變，表明過濾前后指標成分沒有損失。樣品溶液過濾前后吸收度有明顯變化，表明經微孔濾膜過濾，使樣品更純凈，假陽性干擾減小，與上聚酰胺小柱除雜質效果相同，而精密度明顯優于上柱。

［1］龔盛昭．黃酮類化合物保健食品大有開發價值［J］．廣州食品工業科技，18(1):63－64．

［2］譚秦麗，劉冬，李玉寶，等．總黃酮化合物藥理研究進展［J］．安徽中醫學院學報，2009，28(3):62－64．

［3］田永利，劉志宗，葛林，等．總黃酮類化合物含量測定方法和藥理作用研究進展［J］．河北醫藥，2010，32(8):2095－2096．

［4］肖香蘭，羅仁才，張楠．保健食品中總黃酮的測定方法［J］．中國衛生檢驗雜志，2007，17(6):1037－1038．

［5］中華人民共和國衛生部，保健食品檢驗與評價技術規范［M］．中華人民共和國衛生部，2003．

［6］董宇．黃酮類化合物的提取方法研究及展望［J］．人參研究，2009，22(4):33－35．