黑木耳不同培養溫度出耳期耐高溫比較*

高 娃，韓增華**，戴肖東，馬銀鵬，王玉文

(1.黑龍江省科學院微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010；2.黑龍江省科學院高技術研究院，黑龍江 哈爾濱 150090)

黑木耳不同培養溫度出耳期耐高溫比較*

高 娃1,2，韓增華1,2**，戴肖東1,2，馬銀鵬1，王玉文1

(1.黑龍江省科學院微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010；2.黑龍江省科學院高技術研究院，黑龍江 哈爾濱 150090)

為研究菌絲培養溫度對菌絲生長生理的影響及出耳期耳片的高溫抗性，提高黑木耳出耳抗性和產品品質，實驗設計5組不同發菌溫度，對黑木耳菌絲培養溫度、菌絲生理與出耳期耳片耐高溫性展開研究，結果表明，15℃、20℃發菌菌絲生長速度較對照組(25℃)慢，但菌絲粗壯，培養期感染雜菌少，酶活性高。低溫培養的菌絲出耳期抗雜菌污染能力強，耳片不易流耳。低溫發菌有利于提高黑木耳出耳耐高溫性。

黑木耳；培養溫度；出耳；耐高溫性

黑木耳是中溫型菌，菌絲體在5℃～35℃都可生長，一般以22℃～28℃為適宜[1]。黑木耳發菌溫度愈低，發育速度愈慢，菌絲體營養吸收越充分，菌絲體健壯，生活力旺盛，子實體結實色深肉厚，抗逆境性能強。相反，溫度愈高，發育速度愈快，但菌絲體徒長脆弱，常易衰老，生活力不強，子實體色淡、質薄，商品價值低，抗性減弱[2]，因此控制好發菌溫度至關重要。研究不同溫度對菌絲體生長和不同溫度對子實體結實的報道較多[3，4]，而研究發菌溫度對出耳影響及出耳期耳片生長耐高溫性的研究報道極少[5]，本實驗設計5組不同發菌溫度，對不同培養溫度菌絲生理進行分析，并對出耳期耳片抗高溫性進行比較，試驗在室內智能出菇箱中進行，具體實施如下。

1 材料和方法

1.1 供試菌種

黑耳2號(國認品種)，黑龍江省科學院微生物研究所菌種保藏中心提供。

1.2 培養基

母種培養基：土豆 200 g(煮汁 1 000 mL)、瓊脂粉 14.0 g、葡萄糖 20.0 g、磷酸二氫鉀 3.0 g、硫酸鎂 1.5 g、蛋白胨 0.5 g、維生素B110.0 mg，pH自然。原種培養基及栽培種培養基：硬雜木屑78%、麥麩20%、石膏1%、石灰1%。

1.3 實驗方法

1.3.1 菌種制作

原種和栽培種培養料分別裝 500 mL 葡萄糖玻璃瓶和 16.5 cm×35 cm 聚乙烯折角袋，原種每瓶裝入培養料合干料約 175 g(濕料 500 g)，栽培種每袋裝入培養料合干料 420 g(濕料 1 200 g)，121℃下滅菌 120 min，取 3 cm2的在母種培養基上活化菌種2塊接種于原種培養料，25℃培養至菌絲發滿。以120的原種接種量接入栽培種培養料中，不同溫度下培養。

1.3.2 不同溫度發菌及菌絲長勢

于2012年3月5日同時生產接種栽培種菌袋100袋，每組20袋，分別于15℃、20℃、25℃(對照)、30℃、35℃的恒溫培養箱中進行不同溫度下菌絲培養，記錄菌絲生長勢，至滿袋后于10℃保存至開口。

1.3.3 不同發菌溫度酶活性比較

粗酶液制備和酶活性測定，按韓增華2008方法進行[6]。

1.3.4 實驗室出菇箱出耳管理

于2012年5月10日開口，室內(20℃)放置 3 d 后，于2012年5月14日擺放于實驗室的HM-216出菇箱(山東莘縣格潤菌業公司)中，每個培養溫度選取15袋，菌袋間隔5 cm，出菇箱溫度調控在(20±5)℃，通風間隔 30 min 通風 5 min，光照自然光，濕度90%～95%，待耳芽分化后，每天噴壺澆水2次，每次 10 min，耳片展片5分熟(約 3 cm～5 cm)時，觀察各組耳片生長情況。

1.3.5 抗高溫實驗

不同培養溫度耳片生長5分熟時，出菇箱其他條件不變，出耳溫度增加至35℃，繼續進行出耳管理，觀察黑木耳出耳期高溫對耳片生長的影響。

2 實驗結果

2.1 菌絲生長情況

菌絲生長速度見表1、圖1。

表1 菌絲生長勢

處理4菌絲生長速度最快，菌絲細弱，顏色黃白，長滿菌絲的培養料松軟，彈性差。處理5菌絲生長速度前期快，后期緩慢，菌絲纖細，產色素，培養料松軟無彈性。處理2、處理3菌絲生長速度較快，菌絲潔白、濃密、成束，培養料堅實有彈性。處理1菌絲生長緩慢、菌絲灰白，各處理菌絲生長速度差異極顯著(p<0.01)。

2.2 菌絲營養生長階段胞外酶活

菌絲營養生長階段胞外酶活變化情況見圖2。

如圖2，處理1、處理2、處理3胞外漆酶、多酚氧化酶活性較處理4、處理5酶活性高；處理1、處理2濾紙纖維素酶活性較高，處理1羧甲基纖維素酶活性也較高，僅次于處理5；半纖維素酶各處理組差異不大，處理5略高于其他處理。處理4、處理5淀粉酶活性較高，處理2蛋白酶最高，處理3次之。

2.3 催耳芽及前期耳片生長

不同發菌溫度出耳芽及耳片生長結果見表2、圖3。

從表2、圖3可見，處理1和處理2出耳芽快、大小均一，出芽率達100%，耳片生長速度快、整齊，顏色黑，耳型好，處理2表現更佳，處理3耳片生長速度較快但長勢不齊。處理4和處理5耳芽形成慢，出芽率低，耳片生長緩慢，顏色淺，耳片薄，處理5表現最差，出耳芽率較其他組差異極顯著(p<0.01)。

2.4 耳片生長高溫抗性

不同發菌溫度高溫抗性情況見表3、圖4。

由表3、圖4可見，不同發菌溫度耳片耐高溫表現不同，處理1、處理2在35℃放置 10 d 耳片完整，20 d 后，耳片開始長白毛，流耳，已經感染斑點性雜菌，但大部分耳片完整，有彈性。處理3、處理4大部分流耳，部分已近脫落。處理5在35℃放置 7 d 耳片開始長白毛，10 d 產生褐斑，20 d 后，流耳嚴重，耳片全部脫落。雜菌污染率處理1、處理2相對較低，較處理3差異顯著(p<0.05)，較處理4、處理5差異極顯著(p<0.01)。

3 討論

食用菌營養生長所需溫度基本相近(20℃～30℃)，而生殖生長所需溫度差別較大，不同種類的食用菌、同一種類不同品種的食用菌生長發育所需的溫度也不同。滑菇、猴頭、杏鮑菇一般認為是低溫菇種，而草菇、香菇、姬松茸等則需較高溫度才能結實，溫度的高低可直接影響食用菌菌絲的生長速度和子實體的產量和質量。菌絲在不同溫度下的生長差異反映了構成菌絲的細胞在不同溫度下的生長分裂速度，也間接反應了菌絲生長代謝酶活性，研究不同溫度下菌絲長勢和酶活性變化，可為研究溫度對食用菌子實體生長發育和高溫抗性的影響奠定基礎。

表2 不同發菌溫度出耳芽及耳片生長

表3 不同發菌溫度高溫抗性

處理白毛出現時間∕d流耳耳片韌性雜菌耳片完整程度污染率∕%120Aa少較硬，有彈性褐斑少大部分完整60cC218Aab較多軟，有彈性斑點多大部分完整65cBC314ABbc多軟，無彈性斑點流耳少部分完整80bAB410BCcd很多軟腐斑點嚴重流耳大部分殘耳90abA57Cd全部軟腐全部流耳根部留有殘耳98aA

在適當范圍內增加溫度可促進菌絲快速生長，通常以菌絲在PDA培養基上生長速度最快的溫度為生產中的發菌溫度。溫度對食用菌子實體生長的影響報道較多[7-9]，但高溫導致的菌絲徒長對子實體生長發育的影響研究報道很少，而子實體生長階段高溫雖然有利于生長周期的縮短，但是卻會導致產量降低、品質下降以及污染率升高，因而應采取比最快生長溫度稍低的溫度進行生產較為適宜。

本研究通過比較不同培養溫度處理對黑木耳菌絲長勢、酶活變化、現耳芽、出耳性狀及出耳期高溫抗性的影響，篩選出了合適的黑木耳培養溫度為20℃，此溫度下培養的菌絲，對后期出耳及抗高溫均有顯著的效果，該研究為黑木耳菌絲培養，黑木耳出耳品質的改良提供實驗數據。

[1]曾績.黑木耳高產栽培技術[J].農村科技，2012(11):56-57.

[2]陳影，姚方杰，劉桂娟，等.黑木耳代用料栽培的注意事項和建議[J].中國食用菌，2010，29(2)：55-58.

[3]李文武，薛菲菲，周建方.香菇生長對溫度要求及調控措施[J].食用菌，2013，35(2)：51-52.

[4]唐利華，郭倩，于海龍，等.培養時間和溫度對工廠化瓶栽杏鮑菇出菇的影響[J].食用菌學報，2010(增刊)：66-69.

[5]韓增華，張丕奇，張介馳，等.黑木耳菌絲生理后熟與栽培特性的關系[J].食用菌學報，2012，19(2)：45-49.

[6]韓增華，張丕奇，孔祥輝，等.黑木耳胞外酶活變化與栽培性狀比較的研究[J].食用菌學報，2007，14(4)：41-46.

[7]杜雙田，周鋒利，陳德育.溫度對蛹蟲草生長的影響[J].西北農林科技大學學報：自然科學版，2007，35(5)：159-162.

[8]陳興.溫度對楊樹菇栽培性狀影響的統計學分析[J].中國食用菌，2004，23(4)：16-19.

[9]馮志勇，潘迎捷，程繼紅，等.低溫脅迫對香菇轉色和原基形成的影響[J].中國食用菌，2004，22(4)：20-22.

2014上半年全國香菇出口數量同比增長9.5%

從商務部對外公布數據中了解到，2014年1月～6月，全國出口香菇數量為47 453.9 t，同比增長9.5%，金額為6.7億美元，同比增長20.8%，平均單價為14033.5美元·t-1，同比增長10.3%。2014年6月，我國出口香菇數量為9 108.4 t，環比下降0.4%，金額為1.4億美元，環比增長3.6%，平均單價為15 238.7美元·t-1，環比增長4%，同比出口數量增長2.8%，金額增長9.8%，平均單價增長6.8%。

易菇網

2014.10.10

Comparison of Different Culture Temperature on the High-temperature Resistance in Ear Formation ofAuriculariaauricula-judae

GAO Wa1,2, HAN Zeng-hua1,2, DAI Xiao-dong1,2, MA Yin-peng1, WANG Yu-wen1

(1.Institute of Microbiolog, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150010; 2.Institute of Advanced Technology, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150090)

To improve the resistance of the ear formation and the product quality ofA.auricula-judae, the effect of mycelial culture temperature on mycelial growth and the high-temperature resistance in the period of ear formation was carried out in our study. Five treatments(15℃, 20℃, 25℃, 30℃, 35℃)were designed to compare the differences of mycelia culture temperature, mycelia physiology and the resistance to high temperature. The results showed that the mycelial growth rate of both 15℃ and 20℃ treatments was lower than that of the control group (25℃), however, the hyphae were thicker and stronger, the infectious microbes infect less, and the enzyme activity was higher. Furthermore, the hyphae owned a higher ability to resist other microorganism, and the rotting ears possessed a very low rate when it cultured in a lower temperature. So we deduced that a lower culture temperature was beneficial to increase the high-temperature resistance in the period of ear formation ofA.auricula-judae.

A.auricula-judae; Culture temperature; Ear formation; High-temperature resistance

*項目來源：黑龍江省科學院科技成果中試與熟化項目“黑木耳優質高產栽培管理技術推廣”(YZS13GWV14)；現代農業產業技術體系建設專項資金“黑木耳栽培技術”(CARS-24)。

高娃(1970-)，女，高級工程師，主要從事食用菌菌種保藏、分類、鑒定研究。

**通信作者： 韓增華，研究員級高級工程師。E-mail：hanzenghua77@126.com

2014-09-24

S646.6

A

1003-8310(2014)06-0026-03