醫學專科開設瓊脂糖凝膠電泳實驗的教學體會

周俊萍，龔 蕾

（曲靖醫學高等專科學校 生物化學教研室，云南 曲靖 655000）

醫學專科開設瓊脂糖凝膠電泳實驗的教學體會

周俊萍，龔 蕾

（曲靖醫學高等專科學校 生物化學教研室，云南 曲靖 655000）

瓊脂糖凝膠電泳是生物化學中常用的分離技術之一，在醫學基礎研究及分析中有廣泛的應用。本文結合醫學專科院校瓊脂糖凝膠電泳實驗的開設，對從實驗前的各項準備工作到學生實驗的教學過程及實驗課后的思考等方面進行分析和總結，以期為今后的實驗教學改革提供參考。

生物化學實驗；瓊脂糖凝膠電泳；教學體會

瓊脂糖凝膠電泳是核酸分析常用的實驗技術，是核酸研究工作中不可缺少的重要手段，廣泛應用于基礎理論研究、農業科學、醫學衛生、工業生產等許多領域，在生物化學和分子生物學的教學和科研中具有重要作用。[1-2]我校自2009年為醫學專科學生增開該實驗以來，受到廣大學生的歡迎，收到良好的教學效果。本實驗在實際的操作過程中由于實驗試劑、耗材準備比較復雜，微小的疏忽都會導致實驗的失敗，在長期的實驗準備和教學過程中，我們總結了一些教學經驗和教學體會。

一、實驗前準備

實驗設備及材料的準備。待測DNA，瓊脂糖，電泳儀，電泳槽，紫外透射反射儀，酒精燈，100ml燒杯，微量移液器，三羥甲基氨基甲烷，鹽酸，醋酸鈉，EDTA，瓊脂糖，溴酚藍，溴化乙錠。

二、實驗課中

1.瓊脂糖膠的制備。本實驗配制的是質量濃度為1%的50mL凝膠。在電爐上將膠熔至清澈透明的溶液狀，冷卻到60℃左右，加染料GV（GoldView），每100ml膠加5pl，搖勻，倒入事先裝好的水平電泳槽內，梳子根據樣品量選用。凝膠厚度一般為0.3～0.5cm。待凝膠完全凝固后（于室溫放置30～45min），在梳子齒附近加入少量電泳緩沖液，然后緩慢輕輕地向上拔掉梳子，將凝膠放入電泳槽中。

2.點樣。點樣量要根據點樣孔大小和樣品濃度確定，一般上樣體積約5～10uL。點樣前，樣品需按照配比添加上樣緩沖液，吹打均勻后，移液器吸取樣品，垂直于點樣孔，用另一只手幫助固定移液器下端，移液器槍頭尖端進入點樣孔即可將樣品注入孔內，注意不可將槍頭尖端插至孔底，并選擇其他點樣孔點上適合的DNA分子量標準（DNA Marker）。所謂適合是指樣品DNA分子量大小應基本在DNA分子量標準范圍之內。

3.電泳。將電泳儀的正極與電泳槽的正極相連，負極與負極相連。核酸帶負電荷，從負極向正極移動，膠的點樣孔一端應放在電泳槽的負極接線一端。電泳槽中電泳緩沖液與制膠用電泳緩沖液應相同，電泳緩沖液（1xTBE），使其恰好沒過膠面約lmm。電泳緩沖液太多則電流加大，凝膠發熱，設置好電源，一般采用恒壓電源，電壓選擇為5V/cm左右（長度以兩個電極之間的距離計算）。電泳時間一般為30～60min，根據實驗需要也可做適當調整。電壓增高，電泳時間縮短，核酸條帶相對來說不夠整齊，不夠清晰；相反，電壓降低，電泳時間較長，核酸條帶整齊清晰。將電泳后的凝膠放在紫外透視儀中觀察結果，對照DNA marker分析條帶、得出結論并分析實驗成敗的原因。

實驗結果圖示

4.重視實驗結果分析，指導填寫實驗報告。生化實驗的目的主要是加強理解和驗證相關理論，通過實驗操作獲得和提高實驗技能，培養學生的動手能力。通過實驗結果分析提高綜合分析的能力，實驗報告在一定程度上起到檢驗學生對實驗原理、目的、實驗結果的理解和分析的能力。在過去的實驗報告中，學生由于不知道如何最終來書寫實驗報告，所以盲目抄書或者相互抄襲的現象很多，實驗結論往往簡單了事，這樣根本無法達到實驗的預先效果。有效地利用實驗課后的十分鐘時間給學生講解如何書寫實驗報告，可以在一定程度上杜絕相互抄襲的現象，既培養學生養成嚴謹求實的學風[3-5]，又真正地讓學生在實驗中得到收獲。

三、實驗課后

1.認真批改實驗報告冊，及時返還學生。在實驗教學中，教師始終要求學生在書寫實驗報告時如實反映實驗結果，不得抄襲或者編寫實驗結果，這樣教師在批改實驗報告冊時才能更好地發現實驗失敗或者出現偏差的原因，并在報告冊中一一進行修改；同時，批閱實驗報告冊還能幫助教師發現一些在以往教學中容易忽視的問題，對于完善今后的實驗教學有著深刻的意義。其次，批閱后的報告冊及時返還學生，可以幫助學生有效地回憶起實驗中操作不當的地方究竟出現在何處，避免在今后的實驗過程中再犯類似的錯誤。

2.課后思考。在參考了其他醫學院校的實驗教程，我校瓊脂糖凝膠電泳實驗課的成功開設，是我校生物化學實驗改革的一大舉措。隨著分子生物學實驗在醫學研究中的地位不斷增強，開展一定比例的生化分子實驗無疑將為學生今后開展設計性、綜合性實驗奠定下堅實的基礎[6-11]。

總之，只有不斷總結經驗，探索適合醫學專科生物化學的新實驗，增加學生學習的積極性、主動性，才能培養出面向2l世紀具有綜合能力和創新意識的高素質醫學人才。

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G642.0

A

1674-9324（2014）11-0260-02

周俊萍（1978-），女，云南昆明人，講師，研究方向：生物化學及分子生物學。