原料乳中三聚氰胺檢測方法的改進

李雪，隋建中，李梅，楊文娟

1.新疆維吾爾自治區農產品質量安全監督檢驗中心，烏魯木齊 830049 2.華潤賽科藥業有限責任公司，北京 100124

原料乳中三聚氰胺檢測方法的改進

李雪1，隋建中1，李梅2，楊文娟1

1.新疆維吾爾自治區農產品質量安全監督檢驗中心，烏魯木齊 830049 2.華潤賽科藥業有限責任公司，北京 100124

對國家標準GB/T22388-2008中高效液相色譜法檢測原料乳中三聚氰胺的方法進行改進。改進后的方法，平均回收率為88.19%～91.31%，縮短了樣品前處理時間，提高了樣品添加回收率。

原料乳；三聚氰胺；高效液相色譜法；定量分析

三聚氰胺簡稱三胺，又稱蜜胺、三聚氰酰胺，低毒，是一種重要的氮雜環有機化工原料。主要用于生產三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛應用于塑料、涂料、造紙、木材加工、醫藥和電器等工業。動物試驗結果表明：動物長期攝入三聚氰胺會造成生殖、泌尿系統的損害，產生膀胱、腎部結石，并可進一步誘發膀胱癌。2008年10月7日，國家質檢總局、國家標準委員會發布了GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》。該標準中的高效液相色譜法是目前最常用的三聚氰胺檢測方法，但是在采用該標準進行試驗的過程中，發現添加回收率不理想。本研究針對前處理方法進行了改進，提高了方法的添加回收率，并總結出一些實踐心得。

1 材料與儀器設備

1.1 試劑與溶液

1.1.1 試劑

乙腈、甲醇、辛烷磺酸鈉均為色譜純，氨水、三氯乙酸、檸檬酸均為分析純，三聚氰胺標準物質（純度大于或等于99.0%）。

1.1.2 溶液

甲醇水溶液：準確量取50mL甲醇和50mL水，混勻后備用。

氨化甲醇溶液（5%）：準確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。

乙酸鉛溶液（22g/L）：取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。

三氯乙酸溶液（1%）：準確稱取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。

離子對試劑緩沖液：準確稱取2.10g檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入約980mL水溶解，調節pH至3.0后，定容至1L備用。

三聚氰胺標準貯備溶液：準確稱取100mg三聚氰胺標準物質（準確至0.1mg）于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液，4℃條件下避光保存。

三聚氰胺標準工作液：根據檢測需要，用流動相將三聚氰胺標準儲備液逐級稀釋得到相應濃度標準工作液。

1.2 儀器設備

高效液相色譜儀（安捷倫1260，配紫外檢測器），分析天平（感量0.0001g和0.01g）,pH計(± 0.02),離心機（轉速不低于4000r/min），超聲波水浴，氮吹儀，旋渦混合器，混合型陽離子交換固相萃取柱，離心管（50mL）。

2 試驗方法

2.1 提取

稱取2g（準確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min，再震蕩提取10min后，以4000 r/min離心10min。取上清液5mL待凈化。

2.2 凈化

依次用3mL甲醇、5mL水活化固相萃取小柱。將待凈化液轉移至固相萃取柱中。依次用3mL水、3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液分兩次洗脫。洗脫液于50℃下用氮氣吹至近干，殘留物用2mL流動相定容，旋渦混合1min，過微孔濾膜后，待測定。

2.3 高效液相色譜分離條件

色譜柱：C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：離子對緩沖溶液-乙腈（90︰10）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：240nm；進樣量：10μL。

3 試驗結果

3.1 方法的線性范圍和相關性

對濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/ L、80mg/L的三聚氰胺標準溶液分別進樣，以標準溶液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線（見圖1）。結果表明，三聚氰胺在0.8～80 mg/L范圍內呈線性相關。線性方程為y＝36.35x＋5.3094,相關系數為R2＝0.9998。

圖1 三聚氰胺標準溶液標準曲線

3.2 回收率、精密度和最低檢出限

依據噪聲值，按3倍信噪比，計算其理論檢出限，為0.212mg/kg。回收率測定結果見表1，精密度測定結果見表2。標準、空白及添加樣品色譜圖見圖2至圖4。

表1 加標回收率試驗結果（n=5）

表2 精密度試驗結果（n=5）

圖2 三聚氰胺標樣色譜圖

圖3 空白樣品色譜圖

圖4 添加樣品色譜圖

4 討論

國家標準在樣品進行離心后，對上清液用潤濕的濾紙過濾。試驗表明在過濾時會造成三聚氰胺的損失，降低回收率。本研究顯示：樣品經過離心后直接取上清液進行凈化，可以大大提高添加回收率，且對后續試驗不會造成影響。另外，如上清液不經固相萃取柱凈化，雖然回收率可以達到標準要求，但是長時間、大批量的檢測任務會對儀器尤其是色譜柱造成不良影響。

用混合型陽離子交換固相萃取柱進行樣品凈化，由于洗脫樣品過程中存在離子交換過程，所以洗脫速度不宜過快，要使洗脫液與萃取柱填充物充分接觸，將三聚氰胺充分洗脫，從而得到理想的回收率。試驗表明洗脫流速≤2.0mL/min時，可以保證理想的回收率。

通過反復試驗，發現氮吹時如果將提取液完全吹干，樣品的回收率十分不理想，所以在進行氮吹時不宜將樣品提取液完全吹干。

本試驗方法的平均回收率為88.19%～91.31%，精密度RSD＜2.96%(n=5),符合國家標準要求，準確度好，精密度高。與國家標準的高效液相色譜法比較，改進的方法提高了樣品添加回收率，節約了處理時間。改進后的方法縮短了樣品前處理時間，提高了樣品添加回收率。

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李雪（1981年12月—），新疆維吾爾自治區農產品質量安全監督檢驗中心，農藝師，主要從事農產品質量安全工作。

2014－02－18