酪氨酸蛋白激酶FphA7蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)

孟祥瑞，陸 鵬，劉桂舉，肖 鵬，白 樺，栗 敏，李瑞君，梅家轉(zhuǎn)

（鄭州人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450003）

酪氨酸蛋白激酶FphA7蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)

孟祥瑞，陸 鵬，劉桂舉，肖 鵬，白 樺，栗 敏，李瑞君，梅家轉(zhuǎn)

（鄭州人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450003）

目的探索非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中FphA7蛋白的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)66例手術(shù)切除的NSCLC組織中FphA7蛋白表達(dá)情況，并探索其與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果全組66例患者中，F(xiàn)phA7蛋白表達(dá)陽(yáng)性率56.06%。FphA7蛋白的表達(dá)與纖維化和腫瘤大小有關(guān)（P＜0.05）。FphA7的表達(dá)與腫瘤增殖能力有關(guān)（P＜0.05）。單因素生存分析及多因素生存分析結(jié)果顯示增強(qiáng)FphA7表達(dá)已確定為有利的患者生存預(yù)測(cè)因素（P＜0.05）。結(jié)論FpA7可能參與NSCLC發(fā)展過(guò)程，可作為臨床腫瘤標(biāo)志物，并可用作將來(lái)治療的靶點(diǎn)。

FphA7蛋白；非小細(xì)胞肺癌；免疫組化

Fph蛋白構(gòu)成最大受體酪氨酸激酶亞家族，并根據(jù)配體結(jié)合親和力和細(xì)胞外域結(jié)構(gòu)分成2個(gè)分組（F-phA和 FphB）。已確定有 9種 FphA（FphA1-8和Fph10）和5種FphB（FphB1-4和FphB6）受體存在于人體內(nèi)。迄今為止，一般認(rèn)為Fph蛋白廣泛參與發(fā)育過(guò)程，其能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、轉(zhuǎn)移或化療耐藥及組織或細(xì)胞邊界形成等，除了發(fā)育過(guò)程中基本作用之外，F(xiàn)ph蛋白同樣參與大量的腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)的過(guò)程，包括細(xì)胞黏附、形成、轉(zhuǎn)移和血管生成［1-5］。值得注意的是，F(xiàn)ph已被視為主要調(diào)控因子，其能夠刺激或抑制致癌信號(hào)網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)，具體取決于肝配蛋白刺激和其他環(huán)境因素［3］。多種腫瘤都有Fph過(guò)表達(dá)，并與患者預(yù)后存在關(guān)聯(lián)性［1-5］。迄今為止國(guó)內(nèi)尚未獲得非小細(xì)胞肺癌中與Fph表達(dá)的臨床意義相關(guān)的全面數(shù)據(jù)。鑒于上述考慮，本研究旨在采用免疫組化法評(píng)估66例非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）患者的FphA7表達(dá)與臨床病理參數(shù)和患者生存的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象收集接受手術(shù)治療的66例NSCLC患者，術(shù)前未接受過(guò)化療或放療。最后一次隨訪時(shí)，60例（90.91%）患者因 NSCLC死亡，而其余 6例（9.09%）患者尚生存。詳細(xì)臨床病理資料見(jiàn)表1。

1.2 檢測(cè)方法采用免疫組化法檢測(cè)NSCLC組織中FphA7蛋白表達(dá)，然后使用哈氏蘇木素染色切片，并置于無(wú)水甲醇蓋片上。通過(guò)忽略一抗和（或）使用一種不相關(guān)抗血清取代一抗，執(zhí)行合適陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)采用雙盲法觀片，每個(gè)腫瘤至少分析2個(gè)核心，以評(píng)估FphA7的免疫反應(yīng)性。根據(jù)F-phA7陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分比作為腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)評(píng)分，0分：陰性染色；陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞在0%～4%；1分：5%～24%腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性；2：25%～49%腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性；3分：陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞在50%～100%。對(duì)于染色程度，0分：陰性染色；1分：輕度染色；2分：中度染色；3分：高度染色。最后，F(xiàn)phA7表達(dá)水平歸類為陰性（如果總得分為0～2分）和陽(yáng)性（如果總得分≥3分）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行所有統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)檢驗(yàn)評(píng)估FphA7蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)性。使用Kaplan-Meier構(gòu)建生存曲線，并利用log rank檢驗(yàn)比較曲線之間差異。建立COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型評(píng)估潛在預(yù)后指標(biāo)和患者生存整體情況之間的關(guān)聯(lián)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 EphA7的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系66例 NSCLC組織中，F(xiàn)phA7蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為56.06%（37/66）。FphA7的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系見(jiàn)表1。在41例腺癌中，發(fā)現(xiàn)FphA7蛋白表達(dá)為陽(yáng)性的為24例（58.54%）。在25例鱗狀細(xì)胞肺癌中，發(fā)現(xiàn) FphA7蛋白表達(dá)為陽(yáng)性的為 13例（52.00%）。

2.2 EphA7蛋白表達(dá)水平與患者生存期的關(guān)系

2.2.1 FphA7蛋白的表達(dá)情況對(duì)生存的影響 Kaplan-Meier生存曲線表明，相比于陰性表達(dá)水平，F(xiàn)phA7陽(yáng)性表達(dá)水平的NSCLC患者具有較長(zhǎng)生存時(shí)間（P＜0.05）。見(jiàn)圖1。

2.2.2 FphA7蛋白表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的影響 單因素分析顯示，病理類型、病理分期、FCOG活動(dòng)狀態(tài)評(píng)分以及FphA7的表達(dá)都確定是患者生存的重要預(yù)后因素（P＜0.05）。多因素分析顯示，病理類型、病理分期、FCOG活動(dòng)狀態(tài)、FphA7蛋白的表達(dá)水平可視為患者生存的獨(dú)立預(yù)后因子。見(jiàn)表2、3。

表1 FphA7的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

圖1 FphA7蛋白的表達(dá)情況對(duì)生存的影響

表2 臨床病理特征與患者生存之間的關(guān)系（單因素分析）

表3 臨床病理特征與患者生存之間的關(guān)系（COX回歸模型）

3 討論

Fph基因在多種人類惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，包括食管、甲狀腺、胸腺、胃、結(jié)腸、胰腺和婦科腫瘤、黑素瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤［1-5］。然而，目前大部分全面臨床數(shù)據(jù)僅限FphA2受體，且對(duì)Fph在肺癌中的評(píng)估依然不足。

一項(xiàng)針對(duì)279例NSCLC患者的免疫化學(xué)分析表明，較高的FphA2蛋白表達(dá)水平與K-Ras突變、FGFR活性、吸煙史和不良預(yù)后相關(guān)聯(lián)［6］。另一項(xiàng)研究［7］分析了11種Fph和8種肝配蛋白，其結(jié)果表明FphA4基因表達(dá)水平與肺腺癌患者病癥改善存在關(guān)聯(lián)性，有可能是通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)。在肺腺癌中，確定了Fph家族成員（包括FphA3、A5、A7、B1和B6）的多個(gè)突變基因型，而相比于低級(jí)階段的腫瘤，高級(jí)階段的腫瘤表現(xiàn)出更多的FphA7突變累積［8］。F-phA7蛋白在肺癌的表達(dá)情況及與預(yù)后的關(guān)聯(lián)性報(bào)道較少。

在這一方面，目前的研究提供了臨床證據(jù)，表明FphA7有可能參與了NSCLC的癌演化過(guò)程的生物學(xué)機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)較高的FphA7表達(dá)水平與有利的預(yù)后存在顯著關(guān)聯(lián)性。而FphA7蛋白高表達(dá)水平與患者較高的年齡、纖維化和較小的腫瘤尺寸之間存在顯著關(guān)聯(lián)性。FphA7高表達(dá)水平還與較高的腫瘤增殖能力相關(guān)聯(lián)。此外，在FCOG活動(dòng)狀態(tài)＜2的NSCLC患者中FphA7蛋白表達(dá)水平較高，這些證據(jù)提示FphA7蛋白可作為NSCLC獨(dú)立的預(yù)后因子，并可能在早期的肺癌中發(fā)揮更重要作用。

很多研究［3］顯示Fph家族成員及其配體可促進(jìn)腫瘤增長(zhǎng)、浸潤(rùn)和遷移以及新血管形成。也有報(bào)道［9］揭示了Fph受體的腫瘤抑制作用，而配體依賴型與配體獨(dú)立型信號(hào)之間的比較也被認(rèn)為是起到腫瘤抑制功能的一個(gè)關(guān)鍵機(jī)制。因此，借助雙向信號(hào)通路，F(xiàn)ph受體及其配體可在截然相反的活動(dòng)以及其他信號(hào)形態(tài)之間切換，以影響腫瘤細(xì)胞行為。我們的研究結(jié)果證實(shí)FphA7受體可能作為潛在調(diào)控因子，抑制NSCLC發(fā)展過(guò)程中的致瘤信號(hào)活動(dòng)，具體取決于Fph刺激和（或）環(huán)境因素。

了解FphA7蛋白參與NSCLC的過(guò)程有助于進(jìn)一步揭示肺癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機(jī)制，進(jìn)而為針對(duì)此類人體惡性腫瘤中Fph蛋白信號(hào)系統(tǒng)的創(chuàng)新抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)提供支持。

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Expression of Tyrosine Kinase EphA7 in the Non-small Cell Lung Carcinoma

Meng Xiangrui，Lu Peng，Liu Guiju，Xiao Peng，Bai Hua，Li Min，Li Ruijun，Mei Jiazhuan
（Department of Oncology，the People’s Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450003，China）

ObjectiveTo evaluate the clinical significance of FphA7 protein expression in non-small cell lung carcinoma（NSCLC）.MethodsFphA7 protein expression was assessed by using immunohistochemically in the 66 surgically resected NSCLC and was analyzed in the relation with clinicopathological characteristics.ResultsThe positive rate FphA7 protein was 56.06%in the NSCLC.FphA7 protein expression was significantly associated with，fibrosis and tumor size（P＜0.05）.FphA7 expression was positively associated with tumor proliferative capacity（P＜0.05）.FphA7 expression were identified as predictors of favourable patients’survival at both univariate and multivariate levels（P＜0.05）.ConclusionFphA7 may be involved in progression of NSCLC，reinforcing their utility as clinical biomarkers for patient’s management and prognosis，as also as potential targets for future therapeutic interventions.

FphA7；non-small cell lung carcinoma；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.003

R734.2；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0193-04

2013-10-14）

孟祥瑞（1977-），女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事食管癌及肺癌的診治與研究。F-mail：mengxiangruibb2008@163.com

梅家轉(zhuǎn)（1967-），男，博士，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤生物治療的研究。F-mail：mjzhuan@163.com