喉鱗癌組織中Oc t-4mRNA的表達(dá)及意義

金紅軍，婁衛(wèi)華

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科，河南鄭州450052）

喉鱗癌組織中Oc t-4mRNA的表達(dá)及意義

金紅軍，婁衛(wèi)華

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科，河南鄭州450052）

目的探討Oct-4 mRNA在喉鱗癌組織中的表達(dá)及意義。方法采用RT-PCR和熒光定量PCR檢測(cè)48例喉鱗癌及其癌旁正常喉黏膜組織中Oct-4 mRNA的表達(dá)。結(jié)果RT-PCR顯示Oct-4 mRNA在喉鱗癌組織中的陽(yáng)性率為64.6%，熒光定量PCR顯示喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.533± 0.142，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測(cè)出Oct-4基因的表達(dá)（P＜0.01）。Oct-4 mRNA在喉鱗癌高分化組陽(yáng)性率為33.3%，顯著低于中、低分化組的69.0%（P＜0.05）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率為47.8%，顯著低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的80.0%（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ期組陽(yáng)性率為47.4%，低于Ⅲ、Ⅳ期組的75.9%（P＜0.05）。熒光定量PCR結(jié)果顯示Oct-4基因的相對(duì)表達(dá)量隨著喉鱗癌組織分化減低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高的臨床分期而顯著增加（P＜0.05）。結(jié)論Oct-4基因的高表達(dá)可能參與了喉鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，并對(duì)判斷喉鱗癌患者的生物學(xué)行為有一定意義。

喉鱗癌；Oct-4 mRNA；RT-PCR；熒光定量PCR

腫瘤的發(fā)病率近年來(lái)逐漸上升，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康和生命，已成為繼心血管病之后人類(lèi)第2大致死原因［1］。喉癌約占耳鼻喉科腫瘤的1/3，是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，尤其是近年來(lái)隨著環(huán)境污染的加劇，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)［2-3］。喉癌的發(fā)病部位較為隱蔽，同時(shí)腫瘤的異質(zhì)性也會(huì)導(dǎo)致臨床病理分期在預(yù)后評(píng)估方面有一定局限性，因此，明確喉癌相關(guān)基因，以利于喉癌的早期診斷和預(yù)后判斷是一個(gè)需要解決的問(wèn)題。研究［4］顯示，腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在有一小群具有高增生潛能和自我更新潛能的起始細(xì)胞被稱(chēng)為腫瘤干細(xì)胞，是腫瘤發(fā)生的根源，其相關(guān)的基因在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中也起到關(guān)鍵的作用。研究［5-6］發(fā)現(xiàn)，Oct-4在腫瘤干細(xì)胞特性的維持中發(fā)揮一定的作用。本研究檢測(cè)了喉鱗癌組織中Oct-4基因的表達(dá)情況，以探討Oct-4檢測(cè)的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集我院2007年1月至2010年12月耳鼻咽喉科手術(shù)切除標(biāo)本48例，所有病例經(jīng)病理證實(shí)為喉鱗癌，其中男41例，女7例，年齡39～71（58.3 ±13.4）歲，每例另取癌旁正常喉黏膜組織作為對(duì)照。根據(jù)1997年UICC TNM分期標(biāo)準(zhǔn)所有病例分為：Ⅰ期7例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期15例；高分化6例，中、低分化42例；有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。

1.2 主要試劑Trizol為北京天根生物科技公司產(chǎn)品，RT-PCR和熒光定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)ABI公司，PCR引物由深圳華大基因公司合成。

1.3 組織總RNA提取及cDNA第一鏈的合成取50 mg手術(shù)切除標(biāo)本，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)使用Trizol提取細(xì)胞總RNA。按照RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA第一鏈。樣品-70℃凍存。

1.4 RT-PCR按照RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)擴(kuò)增Oct-4片段。Oct-4（194 bp）：Sence：AGCAACTCCGATGGGGCCTCC，Antisence：GCCCCACATCGGCCTGTG；GAPDH（205bp）：Sence：5′-GGTTCCGGATCGATTTTGGG-3′，Antisence：5′-GCCTTGGATAGTTAATCGT-3′。94℃預(yù)變性3 min；94℃40 s，60℃40 s，72℃1 min，30個(gè)循環(huán)；72℃10 min。

1.5 熒光定量PCR按照熒光定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)Oct-4 mRNA的表達(dá)量，引物序列同RTPCR，反應(yīng)條件為：95℃ 15 s，60℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)。Ct值說(shuō)明基因擴(kuò)增達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù)，△Ct值=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值，目的基因的表達(dá)量采用2 -△Ct評(píng)估。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 16.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以s表示，2組樣本均數(shù)間的比較使用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間的比較使用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α= 0.05。

2 結(jié)果

2.1 喉鱗癌組織及癌旁組織中Oct-4 mRNA表達(dá)的差異RT-PCR結(jié)果顯示48例喉鱗癌組織中有31例檢出Oct-4 mRNA的陽(yáng)性表達(dá)，占64.6%，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測(cè)出Oct-4 mRNA的表達(dá)（P＜0.05）（圖1）。熒光定量PCR結(jié)果也顯示喉鱗癌組織中Oct-4基因的相對(duì)表達(dá)量為0.533±0.142，而癌旁正常喉黏膜組織的熒光值都在基線水平（P＜0.05）。

圖1 鱗癌及癌旁組織中Oct-4基因RT-PCR結(jié)果

2.2 喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1 喉鱗癌組織中臨床指標(biāo)與Oct-4 mRNA表達(dá)的關(guān)系

3 討論

Oct-4是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，屬于POU家族成員，其表達(dá)的蛋白可以結(jié)合到相應(yīng)目的基因啟動(dòng)子的PORF或MORF序列而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用，調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)，健康個(gè)體中Oct-4呈低表達(dá)狀態(tài)，主要參與個(gè)體的胚胎發(fā)育過(guò)程以及干細(xì)胞的自我更新和多能性的維持［7］。近期的研究［8］顯示Oct-4在乳癌、肺癌、前列腺癌等多種實(shí)體腫瘤組織中高表達(dá)，參與了上述腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，并且可以作為腫瘤干細(xì)胞的一個(gè)標(biāo)志蛋白。腫瘤干細(xì)胞是目前腫瘤學(xué)的一個(gè)新概念，認(rèn)為是腫瘤的起源細(xì)胞，同時(shí)也是腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的根源［9］。

Oct-4基因表達(dá)水平與一些惡性腫瘤發(fā)生和生物學(xué)行為的密切關(guān)系已被多數(shù)研究者所證實(shí)［10］。本研究結(jié)果也顯示，喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA陽(yáng)性率為64.6%，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測(cè)出該基因的表達(dá)，提示Oct-4基因的表達(dá)可能參與了喉鱗癌的發(fā)生，這一發(fā)現(xiàn)與前人在其他腫瘤中的研究結(jié)果相一致，同時(shí)也暗示了Oct-4基因在惡性腫瘤中的檢測(cè)意義重大，有可能成為腫瘤早期篩查、診斷及預(yù)后評(píng)估的有效標(biāo)志。本研究結(jié)果還顯示，喉鱗癌組織中Oct-4基因的表達(dá)與腫瘤的分化程度、有無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期關(guān)系密切；熒光定量PCR結(jié)果顯示Oct-4的相對(duì)表達(dá)量隨著喉鱗癌組織分化程度減低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高的臨床分期而顯著增加，提示Oct-4基因在喉鱗癌的惡性程度判定上是一個(gè)敏感指標(biāo)，可能預(yù)示患者的預(yù)后。

綜上所述，Oct-4基因在喉鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用，在腫瘤的分級(jí)以及預(yù)后判斷等方面具有一定的意義。

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Expression and Significance of Oct-4 Gene in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma

Jin Hongjun，Lou Weihua
（Department of Otorhinolaryngology，the First Affiliated Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of Oct-4 mRNAi n laryngeal squamous cell carcinoma.MethodsRT-PCR and fluorescence quantitative PCR were used to detect Oct-4 mRNA expressions in the 48 cases of laryngeal squamous cell carcinoma tissues and paraneoplastic nomal mucosa tissues.ResultsThe result of RT-PCR showed that the positive rate of Oct-4 mRNAw as 64.6%in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues，the result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was 0.533±0.142，while no Oct-4 mRNAw as found in the paraneoplastic normal mucosa tissues（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the well differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（33.3%）was lower than that in the medium and poor differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（69.0%）（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the no lymph node metastasis group（47.8%）was lower than that in the lymph node metastasis group（80.0%）（P＜0.05）.The positive expression rate of Oct-4 mRNA inⅠ-Ⅱphase（47.4%）was lower than that in theⅢ-Ⅳ phase（75.9%）（P＜0.05）.The result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4 mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was obviously increased with the lower differentiation，the lymph node metastasis and higher clinical stages.ConclusionThe overexpression of Oct-4 mRNA may be associated with the carcinogenesis and development of laryngeal squamous cell carcinoma，and can be used for judging its biological behavior.

laryngeal squamous cell carcinoma；Oct-4 mRNA；RT-PCR；fluorescence quantitative PCR

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.002

R739.65；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0190-03

2013-07-12）

金紅軍（1965-），男，博士，主任醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉科臨床工作。F-mail：jinhongjun1@126.com