藥品檢驗常用菌種的保存注意要點

劉金鳳

藥品檢驗常用菌種的保存注意要點

劉金鳳

實驗菌種；定期檢查；保存管理；復(fù)蘇

在生產(chǎn)、科研、醫(yī)療等領(lǐng)域的實踐活動中, 人們獲取了各種各樣的實驗菌種, 其中不乏寶貴和實用者。微生物容易變異, 世代時間相應(yīng)較短, 在傳代過程中有很大幾率死亡或者變異［1］。所以實驗菌種保存和管理工作極為重要, 是微生物育種以及微生物學(xué)研究的重要構(gòu)成部分。

1 實驗菌種保存的目的與意義

1.1 目的 對各類利用價值不等的微生物菌種進行廣泛收集, 并通過合理保存方式確保其在傳代過程中或保存期間不至微弱、衰退、變異或者死亡, 從而良好保持自身初始生物學(xué)特性, 最終可良好應(yīng)用于交換、檢驗、研究和使用, 即為保存實驗菌種的目的。

1.2 意義 在藥品檢驗工作中, 實驗菌種的有效保存是其中較為關(guān)鍵的一項技術(shù)。藥品檢驗中有關(guān)控制菌檢查所選取的陽性對照菌應(yīng)給予妥善保管, 避免因多次傳代而導(dǎo)致菌株死亡, 或其生物學(xué)典型特征由此發(fā)生改變。此外, 在檢驗藥品微生物時對于可疑致病菌應(yīng)利用合理方法加以保存, 以利于進一步鑒定, 最大化保證用藥安全。

2 實驗菌種保存處理與要點

在保存實驗菌種時, 應(yīng)確保微生物自身代謝保持在相對靜止或最不活躍狀態(tài), 由此可實現(xiàn)在一定時間段內(nèi)使菌株在保持生活能力的同時又不出現(xiàn)變異。在影響微生物自身代謝能力的諸多因素中, 隔絕空氣、保持干燥和低溫是其重要因素。因而保存實驗菌株的諸多方法均遵循上述三種因素而設(shè)計［2］。

2.1 斜面低溫保存：在固體斜面培養(yǎng)基中接種實驗菌種,經(jīng)充分生長后, 取油紙包扎好棉塞部分, 并于2~8℃環(huán)境中保存。根據(jù)微生物不同種類, 其保藏時間也各有不同, 有芽孢的細菌、放線菌以及霉菌等保存時間通常為2~4個月, 1次移種；酵母菌保存時間則為2個月。細菌移種應(yīng)保持在每月1次。斜面低溫保存多見于工廠以及實驗室菌種室, 屬于常用保存法, 其便于操作、簡單實用, 無需投入特殊設(shè)備,并可對菌株進行實時檢查, 確認其是否變異或死亡。但此法保存實驗菌種有較大缺陷, 實驗菌種容易發(fā)生變異。究其原因為培養(yǎng)基并不具備嚴格恒定的物理和化學(xué)特性, 微生物代謝會隨著多次傳代而發(fā)生改變, 導(dǎo)致微生物性狀受到影響,污染雜菌的幾率較高所致［3］。

2.2 液體石蠟保存 ①取三角燒瓶, 將液體石蠟裝入后以棉塞封口, 外以牛皮紙包扎, 置于121.3℃環(huán)境下行30 min滅菌處理, 然后貯存于40℃溫箱內(nèi), 蒸發(fā)掉水汽后備用。②在斜面培養(yǎng)基中取保存菌種進行培養(yǎng), 進而獲取健壯孢子或菌體。③將滅菌所用液體石蠟用滅菌吸管抽取, 并注入菌種已良好繁殖的斜面上, 注入量應(yīng)保持不低于斜面頂端1 cm, 徹底將空氣與菌種隔絕開來。④直立試管, 貯存于室溫或者低溫下。液體石蠟保存法效果較好且實用性較強。芽孢細菌、放線菌以及霉菌菌種保存期可延長至少2年, 期間菌種可保持活力不死；酵母菌保存期限則為1~2年, 通常來說無芽胞細菌保存期限也在1年左右；難以用常規(guī)保存方法處理的腦膜炎球菌在37℃恒溫溫箱內(nèi)用此法也可保存3個月［4］。液體石蠟保存法簡單易行, 無需增加特殊設(shè)備, 同時也不像斜面低溫保存法那樣經(jīng)常移種。但此法在保存菌種時裝置需保持直立, 占據(jù)較大空間, 不利于攜帶, 且取出培養(yǎng)移種后, 經(jīng)火焰燒灼時接種環(huán)內(nèi)培養(yǎng)物以及液體石蠟殘留部分容易受熱飛濺, 對此應(yīng)給予重視。

2.3 濾紙保存法 ①裁剪濾紙, 均分為0.5 cm×1.2 cm的條狀, 取1~2張放入安瓿管內(nèi), 并以棉塞充填, 置于121.3℃環(huán)境下行30 min滅菌處理。②在斜面培養(yǎng)基中對需保存菌種加以培養(yǎng), 確保其充分生長。③在滅菌培養(yǎng)試管或培養(yǎng)皿內(nèi)滴入1~2 ml滅菌脫脂牛奶, 在牛乳內(nèi)溶入數(shù)環(huán)菌苔, 混勻處理后制備為濃懸液。④將安瓿管中條狀濾紙用滅菌鑷子取出并在菌懸液內(nèi)浸泡, 吸附飽和后放回安瓿管, 并以棉塞充填。⑤將安瓿管放入干燥器(吸水劑為五氧化二磷), 將其中空氣抽干。⑥在管內(nèi)充塞入棉花, 熔封后于低溫下保存。⑦取用菌種并實施復(fù)活培養(yǎng)時, 應(yīng)用火焰加熱瓿管口, 然后再加熱區(qū)域滴冷水促使玻璃碎裂, 將口端玻璃敲掉, 開啟安瓿管后將濾紙取出, 置于培養(yǎng)基內(nèi), 并在溫箱內(nèi)培養(yǎng)。此法可用于保存絲狀真菌、酵母菌以及細菌, 其中細菌以及酵母菌保存時間可達2年, 少數(shù)絲狀真菌保存時間則長達14~17年［5］。

2.4 液氮冷凍保存法 ①取材質(zhì)為硼硅鹽酸玻璃的安瓿管,規(guī)格為75 mm×10 mm, 或容積為1.2 mm；②在進行霉菌孢、酵母菌以及細菌等容易分散的菌種時應(yīng)取棉塞充填安瓿管,并置于121.3℃環(huán)境下行15 min滅菌處理；③取10%甘油蒸餾水, 將菌種加入制備為菌懸液, 裝入安瓿管后熔封。④以1℃/min的速率降溫, 將安瓿管逐漸凍結(jié), 最終溫度保持為-30℃, 然后將安瓿管置入液氮冷凍保藏器內(nèi)。液態(tài)氣氮內(nèi)部溫度為-196℃。

3 實驗菌種保存期間的定期檢查

在實驗菌種保存和管理期間, 定期檢查是其中一項最基本內(nèi)容, 利用定期檢查的開展可對菌種形態(tài)特征、存存活情況、生理生化特征正常與否以及保存技術(shù)是否有效予以直接考查。定期檢查應(yīng)對保存菌種干燥程度、外觀以及真空度等保存狀況進行觀察。

4 小結(jié)

藥品檢驗菌種在其保存以及管理過程中應(yīng)嚴格遵循相關(guān)規(guī)范, 同時還應(yīng)注意安全防護事項以及妥善的菌種處理措施,只有在管理實驗菌種中嚴格遵循實驗操作規(guī)程, 菌種的安全以及有效性才可得到有效保證, 才能更好地服務(wù)于藥品檢驗。

［1］ 李秋菲,黨琳琳,張芹,等.微生物菌種的使用、保存和管理.中國藥業(yè), 2008,17(14):10.

［2］ 李家琪,章激,曹軍華,等.藥品衛(wèi)生學(xué)檢測中奶粉圓片菌種保存方法探討.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2007,27(4):556-558.

［3］ 許少洪.基層細菌實驗室菌種保存和使用方法的探討.中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2008,18(4):734.

［4］ 李志明.一種沙門菌和志賀菌保存用培養(yǎng)基.中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2008,18(9):1913.

［5］ 孫燕萍,凌霞,彭浩,等.1份半固體培養(yǎng)基保存的模擬肛拭樣品鑒定結(jié)果分析.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2009,36(23):4542-4543.

462000 漯河市食品藥品檢驗所