益心解毒方對Ameroid縮窄環致氣虛血瘀小型豬證候表征的影響*

仇 琪 王 勇 楊克旭 李 春 所 偉 啜文靜 王 偉 林 陽△

(1.首都醫科大學附屬北京安貞醫院臨床藥理中心，北京 100029;2.北京中醫藥大學，北京 100029)

冠心病心功能不全是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的嚴重階段，是心肌長期慢性缺血致能量供應不足或能量代謝失衡時機體的綜合表現[1]。氣虛血瘀是冠心病心功能不全患者最常見的中醫證候[2，3]。患者體征表現為神疲乏力、少氣懶言、自汗、舌胖或有齒印、脈虛無力(弱、軟、濡等)伴胸痛、舌質紫黯、或有瘀點瘀斑等，生活質量顯著下降。大量臨床研究表明，中藥復方給藥能夠顯著緩解患者氣虛血瘀證表征[4，5]。本研究應用Ameroid縮窄環致小型豬心功能不全氣虛血瘀證病證結合模型對益心解毒方改善氣虛血瘀證表征療效進行評價的同時，對該模型氣虛血瘀證的診斷進行反證。

1 材料

1.1 動物

健康四川巴馬小型豬22只，體質量20±2kg，月齡6～10個月，雌雄各半，購自中國農業大學清潔級實驗動物飼養基地(許可證號SYXK(京)2011-0006)。

1.2 儀器

麻醉機(美國，North American Drager);CV-2000電腦高頻電刀(中國，北京康威電子技術有限公司);FX-7202便攜式心電圖機(日本，福田電子株式會社);D100數碼相機(日本，Nikon)。

1.3 藥品及耗材

Ameroid縮窄環 (Ameroid constrictor)，內徑2.75mm(Research Instrument SW，USA);安爾碘(上海利康消毒高科技有限公司，批號20050808);鹽酸氯胺酮注射液(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號KH050302);地西泮注射液(天津金輝氨基酸有限公司，批號0506131);地高辛(上海醫藥集團有限公司信誼制藥總廠，批號100505);益心解毒方(由黃芪、丹參、銀花等藥材組成，所有藥材均購于北京同仁堂制藥有限公司，北京中醫藥大學中藥學院以水提醇沉工藝進行加工)。

2 方法

2.1 造模方法

實驗小型豬術前禁食24 h，適量飲水。肌肉注射氯胺酮25 mg·kg－1誘導麻醉，并建立耳緣靜脈通路維持。模型組動物18只，于冠狀動脈左前降支第一對角支上方，距心耳邊緣0.5～1 cm處放置直徑2.75 mm的Ameroid環[6]，關胸。另制作假手術動物4只，不放置Ameroid環，其他操作均與模型組一致。

2.2 分組及給藥

所有動物于術后3周末行冠脈造影、宏觀體征、超聲心動及凝血相關指標檢查。模型組根據左心室射血分數(EF)檢查結果隨機分為模型組6只，地高辛組6只(每日1次，每次0.0125 mg·kg－1，益心解毒方組6只(每日2次，每次1 g·kg－1)。于評價后次日(術后4周)開始給藥，持續8周。

2.3 指標檢測

2.3.1 宏觀體征氣虛血瘀證證候積分 于給藥前、給藥后第2、4、8周末對各組動物宏觀表征進行觀察，觀察指標包括擺尾次數、精神狀態、被毛、舌色、爪甲、鼻盤等。對各部位觀察結果進行證候積分(滿分10分)并用攝像機攝錄，其中擺尾次數以1 min內擺尾次數計算，攝錄3次共3 min，取平均值。

2.3.2 局部照片采集 于給藥前后第2、4、8周末采集小型豬足底、鼻盤、舌面圖像，圖像采集過程以頂棚日光燈照明方式在室內完成，固定對光角度。將小型豬2/3常規劑量麻醉，拍照時保證比色卡與小型豬被觀察部位處于同一平面。

2.3.3 圖像分析 使用Adobe Photoshop 8.0.1軟件對圖像進行分析。首先，根據Casmatch比色卡說明將待分析圖像進行歸一化處理，再采用“直方圖”工具，對圖像選定區域內的R、G、B(即紅、綠、藍色度值)均值進行記錄，輸入Excel表格待統計分析[7]。

2.4 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，數據結果以均數±標準差(s)表示。相同時間點各指標組間比較采用ANOVA方差分析法進行統計分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

觀察時間窗內，模型動物宏觀體征呈現精神緊張、易激惹、目光晦暗無神、皮毛疏松雜亂且少澤、單位時間內擺尾次數減少且尾部縮、行動緩慢、鼻盤干燥、趾蹼間肌膚甲錯、舌青紫暗紅、舌態欠靈活等特點。

3.1 心功能不全氣虛血瘀證小型豬宏觀體征血瘀證證候積分分析

表1顯示，不同時間點各組動物宏觀體征血瘀證證候積分結果顯示，給藥前心功能不全模型動物血瘀證積分與假手術組比較顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)。藥物治療后，各治療組動物證候積分逐漸下降，至給藥后8周，與模型組比較差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。

表1 不同時間點各組宏觀體征血瘀證證候積分比較(s，min)

表1 不同時間點各組宏觀體征血瘀證證候積分比較(s，min)

注:與假手術組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別 例數 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周假手術組△△

3.2 心功能不全氣虛血瘀證小型豬局部圖像色度分析

3.2.1 各組間動物舌部圖像色度分析 表2-1顯示，給藥后8周，益心解毒方組動物舌RGB、R、G、B值與模型組比較均顯著降低(P＜0.01)。

3.2.2 各組間動物鼻部圖像色度分析 表2-2顯示，給藥前，假手術組鼻部圖像RGB、R、G、B值均顯著高于模型動物(P＜0.01或P＜0.05);給藥后4周及給藥后8周，益心解毒方組RGB、R、G、B值與模型組比較均顯著上升(P＜0.01或P＜0.05)。

3.2.3 各組間動物前蹄圖像色度分析 表2-3顯示，給藥后4周，模型組前蹄RGB值、B值及地高辛組R、G值均顯著高于假手術組(P＜0.01)，益心解毒方組 RGB、R、G、B值顯著低于模型組(P＜0.01);給藥后8周，模型組、地高辛組動物前蹄RGB、R、G、B 值顯著高于假手術組(P ＜0.01)，益心解毒方組上述指標測定值顯著低于模型組(P＜0.05)。

4 討論

證候表征是中醫診斷和治療的核心，也是中藥干預的對象。病證結合動物模型的建立和評價是目前中醫藥臨床前研究過程中的熱點和難點問題。望診是實驗動物表征采集的重要方式[8]。將患者的證候診斷指標與動物表征指標的病理意義進行比較后，對患者與動物模型進行證候屬性同質性判定是目前被廣泛接受的證候表征判斷方式[9，10]。然而，評價方法的客觀化和標準化一直是廣大學者關注的重點。

表2-1 各時間點舌部色度組間比較 (s)

表2-1 各時間點舌部色度組間比較 (s)

注:與假手術組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值假 手 術 組 4 115.28±18.04 106.91±12.05 106.16± 8.00 98.25±32.96模 型 組 6 127.76± 7.58 124.03± 8.88 121.50±11.22 151.33±13.50＊＊地 高 辛 組 6 120.53±25.17 112.93±25.71 116.19±13.59 129.99±19.73*益心解毒方組 6 130.33±14.93 113.22±24.12 109.50±15.53 88.08±26.74△△R值組假 手 術 組 4 142.91±17.56 131.81±11.25 134.04±12.97 124.14±38.80模 型 組 6 152.49±10.63 150.78± 8.87 147.60±13.76 181.92± 9.97＊＊地 高 辛 組 6 148.86±31.74 141.39±22.90 145.79±11.05 156.33±16.36益心解毒方組 6 155.83±16.45 142.58±23.23 132.29±16.20 106.31±33.35△△G值組假 手 術 組 4 99.96±14.88 94.43±15.25 95.24±10.04 85.66±30.76模 型 組 6 116.33±7.39 110.27±10.10 110.23±9.87 138.17±13.21地 高 辛 組 6 112.85±27.99 100.54±26.79 102.80±17.70 119.54±23.18益心解毒方組 6 119.43±14.78 102.19±25.21 98.82±16.34 80.62±25.28△△B值組假 手 術 組 4 100.49±20.34 92.49±10.79 92.69± 7.33 84.93±30.23模 型 組 6 114.46± 9.10 111.05± 9.14 106.67±11.00 133.89±18.32＊＊地 高 辛 組 6 110.50±27.05 96.87±28.23 101.01±15.64 111.90±20.90益心解毒方組 6 115.73±14.91 94.88±24.15 97.39±14.26 77.32±24.10△△

表2-2 各時間點鼻部色度組間比較 (s)

表2-2 各時間點鼻部色度組間比較 (s)

注:與假手術組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值 組假 手 術 組 4 147.98± 8.86 148.53± 5.14 139.68±10.07 149.63±22.76模 型 組 6 127.20± 2.90＊＊ 133.36± 5.43* 120.32±14.13* 117.84±12.78＊＊地 高 辛 組 6 120.59± 6.24＊＊ 129.00±5.02＊＊ 117.82± 6.20* 126.87± 4.46*益心解毒方組 6 132.66± 6.71* 132.67± 8.02* 137.69± 7.71△ 145.59±12.70△△R值組假 手 術 組 4 178.12±3.02 176.49±8.43 170.99±3.23 185.73±21.42模 型 組 6 152.80±15.26＊＊ 163.86± 9.24 147.51±17.78* 149.95±16.95＊＊地 高 辛 組 6 151.71±10.35＊＊ 161.09±9.72 152.50±6.96* 156.04±5.44*益心解毒方組 6 161.02± 6.72* 159.28±6.57 165.45± 7.23△ 174.62±12.43△G值組假 手 術 組 4 135.99±11.59 131.70± 4.22 130.09±18.63 135.77±21.26模 型 組 6 119.00± 6.27 124.26±10.30 111.41±15.15 106.04±13.48＊＊地 高 辛 組 6 109.23±7.22＊＊ 119.09±8.44 104.43±8.47* 115.21±11.29益心解毒方組 6 124.17±10.64 124.69±11.53 130.24± 7.50△ 136.63±12.04△△B值組假 手 術 組 4 129.84±11.98 127.40± 8.35 117.95±10.28 127.40±25.67模 型 組 6 109.80± 2.94* 111.95±10.17* 102.04±10.09 97.52±10.39＊＊地 高 辛 組 6 100.82± 7.38＊＊ 106.82±7.97＊＊ 96.51± 5.09* 109.35± 6.88益心解毒方組 6 112.81± 6.53* 114.03±12.01 117.37±10.98△ 125.52±14.28△△

課題組在前期研究中，根據1986年《血瘀證診斷標準》與1986年5月修訂的《中醫虛證辨證參考標準》，通過 casmatch標準比色卡校準，采用Photoshop軟件將動物局部色質轉化為R、G、B值進行定量分析;小型豬的活動度、乏力懶動等癥狀結合中獸醫學經驗，以搖尾實驗進行分析;結合一般狀況如毛發、精神狀況及掙扎力度等運用中醫基礎理論進行辨證，確定模型動物的基本證候，認為Ameroid縮窄環致心肌缺血小型豬術后4～12周具備氣虛血瘀證指征[11]。筆者針對大鼠血瘀證前期研究結果顯示，模型動物舌色、足底、耳廓的圖像色度改變與血液流變學指標改變呈顯著相關[12]。結合上述研究結果，本實驗選擇術后第4周初作為給藥起始時間點，以地高辛為對照藥物，于給藥前、后第2、4、8周對各組動物宏觀體征進行動態監測，以觀察藥物對模型動物氣虛血瘀證表征的改善作用。

表2-3 各時間點前蹄色度組間比較 (s)

表2-3 各時間點前蹄色度組間比較 (s)

注:與假手術組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值 組假 手 術 組 4 155.54±13.56 147.92±11.75 141.87±113.91 128.12±11.54模 型 組 6 157.52±13.17 163.80±15.28 165.97± 10.95＊＊ 155.85±10.42＊＊地 高 辛 組 6 148.84±11.41 153.20±12.43 159.72± 10.85 157.46±16.84＊＊益心解毒方組 6 151.53±17.63 153.39±23.34 138.98± 12.06△△ 136.16±11.56△R值組假 手 術 組 4 188.00±8.47 183.24±4.84 176.77±14.43 166.75±11.51模 型 組 6 192.56±12.00 198.25± 9.94 197.45± 9.58* 193.14±14.00＊＊地 高 辛 組 6 189.91± 8.05 185.89± 9.26 196.60± 10.68* 193.23±10.28＊＊益心解毒方組 6 187.11±16.28 188.20±21.16 173.82± 9.04△△ 178.93± 5.17△△G值組假 手 術 組 4 148.06±14.78 136.88±14.53 134.93± 12.33 122.39± 7.64模 型 組 6 152.25±14.40 158.20±19.29 159.92± 13.25* 144.43±11.62*地 高 辛 組 6 138.42±11.75 147.47±14.94 154.68± 13.04 150.20±19.10*益心解毒方組 6 144.53±20.25 147.38±26.83 131.31± 14.77△△ 128.25±16.27 B值組假 手 術 組 4 130.55±17.52 118.65±15.00 113.92± 15.11 95.23±18.78模 型 組 6 127.76±14.48 134.95±19.02 140.53± 13.61* 129.08± 9.83＊＊地 高 辛 組 6 118.18±14.95 126.25±14.72 127.76± 11.93 128.93±21.91＊＊益心解毒方組 6 122.97±17.20 124.59±22.57 111.82± 14.51△△ 101.31±13.75△△

心氣虛衰導致心血瘀滯、煉聚成毒犯心，心脈不通、胸陽不振是冠心病心功能不全中醫病機之根本。益心解毒方以益氣溫陽、活血解“毒”立法，由黃芪、丹參、銀花等藥物組成，主要針對冠心病心功能不全氣虛血瘀證的治療[13]。結果顯示，地高辛給藥8周后動物證候積分與模型動物比較顯著改善，與地高辛改善心功能療效相關，但該藥物對動物局部圖像色度無顯著改善。益心解毒方能夠改善模型動物宏觀體征，降低證候積分，同時改善局部圖像色度，減輕血瘀癥狀。此項結果進一步證實了模型動物體表局部色度改變可以作為證候的評價指標，而氣虛血瘀對證治療的效果顯著亦對Ameriod縮窄環致小型豬心功能不全氣虛血瘀證的存在進行了反證。

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