RP-HPLC法測定不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量

冷英梅董向光

RP-HPLC法測定不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量

冷英梅1董向光2

目的建立采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量。方法采用Hypersil ODS2 C18色譜柱，以甲醇-水（45:55）為流動相，檢測波長為274nm。結果丹皮酚在0.046～9.200μg/L范圍內呈現良好的線性關系（r為0.9996），平均回收率為99.3%，RSD為2.16%。結論本法簡便、快捷、重復性好，可用于不同產地牡丹皮藥材中丹皮酚的含量測定。

高效液相色譜法；牡丹皮；丹皮酚

牡丹皮在我國已有近2000年的藥用歷史，占有十分重要的地位。隨著對牡丹皮需求的不斷擴大，各地人工種植的規模亦逐漸增大，牡丹皮中主要活性丹皮酚，不同產地牡丹皮中含量有比較大的差異，影響藥材質量[1]。為提高臨床治療的效果，本文采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法對不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量進行測定，為合理選用藥材及原藥材質量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料丹皮酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110708-200507）；不同產地牡丹皮原藥材均購自河北安國藥材市場，經鑒定為牡丹皮，乙腈（山東禹王試液有限公司禹成化工廠，色譜純）、甲醇（上海振興化工一廠，色譜純），其余試劑均為分析純。

1.2 儀器超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀（Agilent 1100色譜泵，Agilent 1100自動進樣器紫外檢測器，Agilent 1100色譜工作站）；AL104/01電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱為Hypersil ODS2 C18色譜柱；丹皮酚的色譜條件以甲醇-水（45:55）為流動相，流速1ml/min；檢測波長為274nm。

1.3.2 丹皮酚對照品溶液的制備 精密稱定丹皮酚對照品適量，置于10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹皮酚對照品，濃度為9.2μg/L，備用。

1.3.3 供試品溶液的制備 取牡丹皮粉末（過45目篩）0.5g，精密稱定，置于100ml具塞的錐形瓶中，加入75%甲醇30ml超聲（500W，40Hz）提取45min，放冷，補足減失的重量，靜置10min后濾過。精密量取續濾液1ml，置于10ml的量瓶中，用甲醇適量定容，即得。

1.4 方法學考察

1.4.1 線性關系的考察 精密吸取丹皮酚對照品溶液0.05、0.5、1、2、5ml置于10ml量瓶中，定容，吸取對照品溶液20μl，測定，以濃度（X）與峰面積（Y）作圖得標準曲線，經回歸得 Y1=1.9325X＋7.1648，r=0.9996。結果表明，丹皮酚在 0.046～9.200μg/L范圍內呈現良好的線性關系。

1.4.2 精密度實驗 取供試品溶液，在色譜條件下，連續進樣5次，每次進樣20μl，測定丹皮酚的峰面積，RSD值為1.46%。表明精密度良好。

1.4.3 穩定性實驗 取供試品溶液，在色譜條件下，每隔2h精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，連續進樣7次，測定峰面積，RSD值為0.96%。表明供試品溶液中丹皮酚在12h內基本穩定。

1.4.4 重復性實驗 取同一批樣品，按照“2.3”項下方法平行制備5份供試品溶液，精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，按照丹皮酚的色譜條件測定丹皮酚的峰面積，計算含量。RSD值為1.25%。表明此方法測定丹皮酚的含量，重現性良好。

1.4.5 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的同一批牡丹皮藥材粉末（過45目篩）樣品6份，每份0.2g，按比例加入丹皮酚對照品，按照“2.3”項下方法制備溶液，分別精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測定丹皮酚的峰面積，計算回收率。丹皮酚回收率為99.3%，RSD值為2.16%，回收率符合相關規定。

1.4.6 樣品含量測定 按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照色譜條件測定8個不同產地牡丹皮樣品中丹皮酚的峰面積，按照回歸方程，計算各樣品中丹皮酚的含量。

2 結果

不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量，見表1。

表1 不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量(%)

3 討論

牡丹皮是一種較為常用的大宗藥材，《中國藥典》2010年版規定[2]，牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，具有清熱涼血、散瘀活血等功效，臨床主要用于熱入營血、溫毒發斑、無汗骨蒸、經閉痛經等。在臨床中應用非常廣泛。牡丹皮中主要活性成分為丹皮酚，研究表明，丹皮酚具有抗菌消炎、抗心律失常、保肝護肝、增強免疫等作用[3]。本研究采用 RP-HPLC測定不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量，可客觀評定不同產地藥材的質量，有利于選用合適的藥材。

本文研究結果表明，不同產地牡丹皮藥材中丹皮酚的含量差別非常大，藥材質量參差不齊。出現差異的原因可能是由生長環境、生產管理等多因素造成。為保證牡丹皮藥材的質量，須從源頭抓起在，生產基地實施GAP種植。

[1] 李向陽,屠萬倩,張留記.RP-HPLC法測定不同產地的牡丹皮中芍藥苷和丹皮酚的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2011,22(5):563-565.

[2] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典Ⅰ部[S].北京:化學工業出版社, 2010:160-161.

[3] 李方軍.牡丹皮化學成分及藥理作用研究進展[J].安徽醫藥, 2004,8(1):9-10.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0211-02

1 山東省海陽市食品藥品稽查大隊，山東煙臺 265100

2 山東省海陽經濟開發區管理委員會，山東煙臺 265100