振源膠囊的生物限度測定方法分析

鄭洪梅

振源膠囊的生物限度測定方法分析

鄭洪梅

目的探討振源膠囊的生物限度測定方法。方法本次醫(yī)學觀察以2005版《中國藥典》中對于微生物限度測定方法的相關(guān)規(guī)定為基礎(chǔ)，通過離心稀釋法對振源膠囊的酵母菌、真菌等細菌類型進行常規(guī)的檢查和驗證。結(jié)果兩組稀釋劑的試驗菌回收率均在70%以上。通過常規(guī)方法對控制菌進行試驗，未檢出陰性對照菌，但檢出陽性對照菌。結(jié)論由本次醫(yī)學研究結(jié)果可知，振源膠囊中的生物限度測定結(jié)果符合2005版《中國藥典》中對于微生物限度測定方法的相關(guān)規(guī)定。

振源膠囊；生物限度；測定方法

針對含抑菌成分的中成藥微生物限度檢查，須消除供試液抑菌活性后，再依據(jù)《中國藥典》規(guī)定的相應方法檢查，并對使用的檢測方法進行驗證試驗，進而確定試品的抑菌活性及確保測定方法的可靠性。本文以振源膠囊為例，證實了生物限度測定法是符合相關(guān)規(guī)定的，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 設(shè)備 所用設(shè)備包括江蘇常熟雙杰側(cè)試儀器廠生產(chǎn)的 T500型電子天平，臺洲市淑江無星機械儀器有限公司生產(chǎn)的YJA電動勻漿儀，鐵嶺市醫(yī)療器械總廠生產(chǎn)的628型高壓蒸汽滅菌器，上海躍進醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的GZX-DH-40×45型25℃恒沮培養(yǎng)箱以及35℃恒沮培養(yǎng)箱。

1.1.2 培養(yǎng)基 所用培養(yǎng)基包括中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)的 040525玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、0508252PH7.0氯化鈉-蛋白胨溶液、050104營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、040409改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、050915改良馬丁培養(yǎng)基以及050613膽鹽乳糖培養(yǎng)基。

1.1.3 菌種 所用菌種包括中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)的CMCC（F）黑曲霉菌、CMCC（F）98001白色念珠菌、CMCC（B）44102大腸埃希菌、CMCC（B）26003金黃色葡萄球菌以及CMCC（B）63501枯草芽孢桿菌。

1.1.4 藥物 振源膠囊（國藥準字 Z22026091，吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）。

1.2 方法

1.2.1 酵母菌、霉菌和細菌的計數(shù)方法

1.2.1.1 供試品的制備 取 10g供試品，與100ml的PH7.0氯化鈉-蛋白胨溶液相互混合，電動攪拌搖勻后，溶解在 45℃的水中，制備成 1:10濃度的供試品，取供試品10ml，以500r?min-1的速度進行連續(xù)5min的離心處理，取2ml上層清液，分別置于兩個等量平皿中。

1.2.1.2 菌液制備 分別對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮斜面培養(yǎng)物鉑金耳在37℃的環(huán)境中留置18～24h，并加入適量0.9%氯化鈉溶液，其濃度相當于標準比濁液，作為原液，將經(jīng)過滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml加入1ml原液中，10倍稀釋至10-6～10-7，細菌數(shù)約50～100cfu?ml-1，對控制菌和活菌進行計數(shù)。取 1ml連續(xù)18～24h在25℃中培養(yǎng)的白色念珠菌液體培養(yǎng)物，加入滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml，10倍稀釋為 10-7，細菌數(shù)約 50～100cfu?ml-1，對活菌進行計數(shù)。取5ml連續(xù)7d在25℃中培養(yǎng)的黑曲霉菌新鮮斜面培養(yǎng)物，將經(jīng)過滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml逐管10倍稀釋至10-5，細菌數(shù)為50至100cfu?ml-1，逐管對活菌數(shù)進行計算。

1.2.1.3 回收率檢查 ①稀釋液對照組：取1ml稀釋液，對稀釋液對照試劑中的菌落數(shù)進行測定。②供試品對照組：對供試品本底菌落數(shù)進行測定。③菌液組：對各個菌株的試驗菌落數(shù)分別進行測定。④試驗組：取1ml濃度為1:10的供試品，將其置于平皿中，分別加入1ml細菌數(shù)約50至100cfu?ml-1的菌株實驗菌液，立即加入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在其完全凝固后，連續(xù) 24～72h內(nèi)將其置于恒定溫度內(nèi)進行觀察[1]。

1.2.1.4 菌落計數(shù)方法 連續(xù)48h內(nèi)使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基對細菌進行培養(yǎng)，對細菌數(shù)進行逐日點計算，每48小時報告一次菌落數(shù)檢測結(jié)果。連續(xù)72h使用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基對酵母菌和真菌進行培養(yǎng)，對細菌數(shù)進行逐日點計算，每72小時報告一次菌落數(shù)檢測結(jié)果[2]。

1.2.2 控制菌測定方法 ①陰性菌對照組：將100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基加入1ml和10ml的1:10供試品中，后加入 1ml細菌數(shù)約 10～100cfu?ml-1的金黃色葡萄球菌，根據(jù)相關(guān)規(guī)定對控制菌測定方法進行檢查[3]。②試驗組：將100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基加入1ml和10ml的1:10供試品中，后加入1ml細菌數(shù)約10～100cfu?ml-1的大腸埃希菌，根據(jù)相關(guān)規(guī)定對控制菌測定方法進行檢查[4]。

2 結(jié)果

本次醫(yī)學研究利用常規(guī)法對振源膠囊微生物限度進行檢查，結(jié)果如表1所示。

表1 酵母菌、真菌和細菌的技術(shù)方法及結(jié)果

3 討論

本研究根據(jù)2005年版《中國藥典》中對于微生物限度檢查法的相關(guān)規(guī)定，對振源膠囊中的醉母菌、真菌和細菌數(shù)進行了測定，每一測定均進行3次獨立的試驗。研究結(jié)果證實，振源膠囊對于枯草芽抱桿菌具有明顯的抑制作用，因而可通過培養(yǎng)基稀釋法和離心處理對振源膠囊中的細菌數(shù)進行檢查，振源膠囊對于酵母菌和真菌則無明顯的抑制作用，因此可通過常規(guī)法對本品的酵母菌和真菌數(shù)進行檢查。

[1] 羅書香.對企業(yè)藥品微生物限度檢查方法驗證資料的審核分析[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2007,27(5):686-687.

[2] 劉佳寧.影響微生物限度檢查方法驗證結(jié)果的若干因素分析[J].中國藥業(yè),2007,9(2):35-36.

[3] 許華玉,杜鵑,湯楊.藥品微生物污染檢測方法驗證的必要性[J].中國藥品標準,2005,6(4):46-47.

[4] 杜鵑,馮為民,楊福河.三類不同藥品的微生物限度檢驗方法驗證比較[J].藥物分析雜志,2006,1(6):840-842.

R284.1

A

1673-5846(2014)01-0051-02

吉林省集安益盛藥業(yè)，吉林通化 134200