高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定虛汗停顆粒中黃芪甲苷的含量

鄭 琰王雅靜

（1 朝陽市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 朝陽 12200；2 朝陽市食品藥品安全監(jiān)督所，遼寧 朝陽 122000）

高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定虛汗停顆粒中黃芪甲苷的含量

鄭 琰1王雅靜2

（1 朝陽市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 朝陽 12200；2 朝陽市食品藥品安全監(jiān)督所，遼寧 朝陽 122000）

目的探討利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定虛汗停顆粒中黃芪甲苷含量的方法。方法采用KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），流速1.0 mL/min。結(jié)果黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.1950～4.8750 μg(r=0.9998)線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率99.44%，RSD=1.2%(n=6)。結(jié)論利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于虛汗停顆粒中的質(zhì)量控制。

虛汗停顆粒；黃芪甲苷；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

虛汗停顆粒由黃芪、浮小麥、大棗、糯稻根和牡蠣（煅）制備而成，收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)，具有益氣，養(yǎng)陰，固表斂汗功效，用于氣陰不足之自汗、盜汗及小兒盜汗。由于原標(biāo)準(zhǔn)只有薄層色譜法對(duì)黃芪的定性分析，無定量分析，達(dá)不到對(duì)黃芪的質(zhì)量控制及藥品本身的療效控制，故建立HPLC法對(duì)黃芪進(jìn)行含量測(cè)定[1]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2424型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；Waters Empower色譜工作站。

1.2 試藥：黃芪甲苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110781-200613）；虛汗停顆粒（批號(hào)：120501，120801，121002）乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0 mL/min；柱溫：28 ℃；ELSD檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度：50 ℃；氣流（壓縮空氣）壓力：400 Pa；理論板數(shù)：按黃芪甲苷計(jì)算不低于4000[2]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：經(jīng)減壓干燥的黃芪甲苷精密稱取適量作為對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取虛汗停顆粒，研細(xì)，取粉末1.6 g，精密稱定，精密加入甲醇100 mL，稱定重量，密塞，冷浸過夜，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，把提取液合并，取40 mL用濃氨試液洗滌，充分洗滌3次后棄去洗滌液，蒸干提取液，用5 mL量瓶收集殘?jiān)蛹状贾量潭龋瑩u勻，即得供試品溶液[3]。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備：取缺黃芪的以外的其他藥工材，按所確定的工藝生產(chǎn)陰性樣品，方法同2.2.2項(xiàng)制備，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)：分別精密吸取按照以上方法制備的對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，依法測(cè)定。在黃芪甲苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液在此峰位無吸收。見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品溶液1、5、10、15、20、25 μL注入液相色譜儀，測(cè)定黃芪甲苷的峰面積。根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)取對(duì)照品進(jìn)樣量，縱坐標(biāo)取峰面積積分值，經(jīng)計(jì)算回歸方程為：Y=124511X-308431，r=0.9998，結(jié)果顯示：黃芪甲苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.1950～4.8750 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)：取供試品（批號(hào)120501），精密稱取1.6 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密量取20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，色譜峰面積的RSD為0.18%，結(jié)果顯示，儀器的精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)（120501）樣品6份，分別精密稱取1.6 g，按”2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每次進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，經(jīng)測(cè)定黃芪甲苷的平均含量為0.2164 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果顯示，利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定方法重復(fù)性良好[4]。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于0、2、4、8、12 h分別進(jìn)樣20 μL，分別進(jìn)樣分析，測(cè)定黃芪甲苷峰面積的RSD為0.28%，結(jié)果顯示，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的同批樣品（批號(hào)120501，黃芪甲苷含量為0.2164 mg/g）6份，每份0.8 g，精密稱定，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液(0.1950 mg/mL)2 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表2 樣品中黃芪甲苷的測(cè)定結(jié)果（n=5）

圖1 HPLC色譜圖（a 陰性對(duì)照；b 對(duì)照品；c供試品）

2.3.7 樣品測(cè)定：分別取以上3批樣品，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，測(cè)定樣品中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討 論

黃芪甲苷屬于四環(huán)三萜類皂苷，僅有微弱的紫外末端吸收，檢測(cè)靈敏度低，干擾因素多，尤其是溶液噪音比較大，故現(xiàn)在多采用HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷的含量[5]。本文在文獻(xiàn)的流動(dòng)相的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了漂移管的溫度和載氣壓力。為了提高測(cè)定的靈敏度，在保證溶劑完全揮發(fā)的前提下，應(yīng)選擇較低的載氣壓力。本方法所用流動(dòng)相簡(jiǎn)單，結(jié)果重現(xiàn)性好，故可作為虛汗停顆粒中黃芪甲苷含量測(cè)定的參考標(biāo)準(zhǔn)。

[1] 施法,侯峰,隋添爽,等.虛寒胃痛顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2013,13(3):184-188.

[2] 丁如賢,李霞,李一珺,等.黃芪藥材、飲片中黃芪甲苷含量測(cè)定方法的改進(jìn)[J].世界中醫(yī)藥,2013,8(6):669-671.

[3] 王慧森,劉明,李更生.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法在中藥研究中的應(yīng)用[J].中醫(yī)研究,2008,21(8):61-64.

[4] 吳清華.反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方黃芪口服液中黃芪甲苷的含量[J].空軍醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(4):187-189.

[5] 邢婕,秦雪梅,張麗增.HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷含量供試品溶液制備方法改進(jìn)[J].山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,31(4): 577-579.

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1671-8194（2014）35-0071-02