牛奶中三聚氰胺殘留量的高效液相色譜檢測分析

黃儒添 廖少平 葉小玲

（廣東省博羅縣疾病預防控制中心檢驗科，廣東 惠州 516100）

牛奶中三聚氰胺殘留量的高效液相色譜檢測分析

黃儒添 廖少平 葉小玲

（廣東省博羅縣疾病預防控制中心檢驗科，廣東 惠州 516100）

目的 利用高效液相色譜法對牛奶樣品中三聚氰胺殘留量進行測定。方法 抽取本縣牛奶批發(fā)或零售點的50份牛奶樣品，均采用高效液相色譜法測定樣品中三聚氰胺含量，對結果進行分析探討。結果 三聚氰胺在1.0～100 mg/mL濃度范圍內線性關系良好，回歸方程：y=39500x-1920（y為樣品峰面積，x為樣品濃度），相關系數r=0.9997；檢測方法準確度與精密度均符合殘留分析的要求；50份牛奶樣品中48份未檢出三聚氰胺，1份殘留量0.7 mg/kg（未超標），1份6.2 mg/kg（超標），本次抽檢牛奶樣品三聚氰胺殘留量超標率2.0%。結論 高效液相色譜檢測分析牛奶中三聚氰胺殘留量的操作簡便，重現(xiàn)性好，可滿足我科對液態(tài)牛奶中三聚氰胺殘留量的分析檢測要求。

三聚氰胺；牛奶；高效液相色譜法；檢測

此前，在嬰兒乳制品中發(fā)現(xiàn)了三聚氰胺而引發(fā)了史上最大規(guī)模的全球食品召回事件。一些不法商人將三聚氰胺加入劣質牛奶中用以提高劣質牛奶的表觀蛋白質含量，人服用后會導致腎結石，嬰幼兒的臟器功能發(fā)育未完全，攝入三聚氰胺可能死亡。因此，檢測原料乳與乳制品中三聚氰胺的殘留量，對保護消費者的經濟權益及人身安全有著重要意義。三聚氰胺檢測方法包括重量法、苦味酸法、電位滴定法等[1,2]。本文對50份牛奶樣品采用高效液相色譜法檢測三聚氰胺含量，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

為本縣每一個牛奶批發(fā)站、零售站編上號碼，用隨機數字表法從中抽取50個作為調查對象，取新鮮牛奶樣品進行三聚氰胺殘留量測定。

1.2 儀器及試劑

1.2.1 儀器：Waters 2695高效液相色譜儀；Waters 2487紫外檢測器；Waters SCX陽離子交換固相萃取柱（60 mg/3 mL）；固相萃取裝置；分析天平（感量0.00001 g）；離心機（＞10000 r/min）；振蕩器；渦旋混合器；超聲波水浴；50 mL帶塞離心管；0.22 μm濾膜；有機相。

1.2.2 試劑：三聚氰胺標準品（含量99.6%，國家飼料中心提供）；檸檬酸（分析純）；水（超純水）；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；氨水（濃度25%～28%）；三氯乙酸（分析純）；辛烷磺酸鈉（色譜純）；鹽酸溶液（濃度0.1 mol/L）；乙腈水溶液（濃度75%）；氨水甲醇溶液（含氨水5%）；三氯乙酸溶液（濃度1%）。

1.3 溶液配制

1.3.1 流動相B：稱取檸檬酸2.10 g、辛烷磺酸鈉2.16 g于1000 mL容量瓶中，用超純水溶解、定容到1000 mL。

1.3.2 三聚氰胺標準液：精密稱取三聚氰胺標準品50 mg于100 mL量瓶中，用乙腈溶解、定容，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩７謩e精密吸取三聚氰胺標準中間液用流動相B稀釋、定容至10 mL容量瓶中，得到1.0、2.0、20.0、40.0、80、100 μg/mL標準液。

1.3.3 待測樣品溶液：準確稱取牛奶樣品5 g于50 mL帶塞離心管中，加乙腈5 mL、三氯乙酸溶液15.0 mL，劇烈振蕩25 min，離心5 min，取上清液待測。

1.4 測定方法

陽離子交換固相萃取柱依次用3.0 mL甲醇、3.0 mL超純水活化，加入5.0 mL待測樣品溶液，依次用3.0 mL鹽酸（0.1 mol/L）、3.0 mL甲醇洗柱，用3.0 mL氨水甲醇溶液洗脫收集，用50 ℃氮氣吹干。1.0 mL流動相B溶解殘渣，有機相濾膜過濾后供高效液相色譜分析。稱取空白牛奶5 g按以上方法處理后進行空白試驗，取空白牛奶5 g加入適量三聚氰胺標準液處理后按以上方法處理后進行色譜分析。

1.5 含量計算

待測樣品溶液中三聚氰胺殘留量以質量分數x表示，單位mg/kg，x=[A×Cs×V×1000）/(As×m×1000)]×f。A：待測樣品溶液中三聚氰胺的峰面積，Cs：三聚氰胺標準液中三聚氰胺的濃度（μg/mL），V：溶解樣品最終定容的體積，As：三聚氰胺標準液中三聚氰胺的峰面積，m：樣品的稱取量（g），f：分取倍數（20/5）。

2 結果分析

2.1 標準曲線

三聚氰胺在1.0～100mg/mL濃度范圍內線性關系良好，回歸方程：y=39500x-1920（y為樣品峰面積，x為樣品濃度），相關系數r=0.9997。

2.2 方法的準確度及精密度分析

稱取空白牛奶5g進行空白試驗，色譜分析結果顯示樣品中的雜質峰對三聚氰胺出峰無影響。取空白牛奶5g加入3個不同濃度的三聚氰胺標準液處理后進行色譜分析，每個樣品重復分析3次，回收率范圍為89.0%～105.0%，相對標準偏差3.14%～4.97%，其準確度與精密度均符合殘留分析的要求。樣品添加回收率見表1。

表1 牛奶樣品添加回收率分析

2.3 樣品分析

50份牛奶樣品中，48份未檢出三聚氰胺，1份檢出三聚氰胺殘留量0.7 mg/kg，1份檢出三聚氰胺殘留量6.2 mg/kg。按照我國衛(wèi)生部門的規(guī)定，液態(tài)奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值2.5 mg/kg，本次抽檢的牛奶樣品中三聚氰胺殘留量超標率為2.0%（1/50）。

3 討 論

三聚氰胺簡稱三胺，學名三氨三嗪，分子式C3N6H6，本品可溶于乙腈、甲醇、甲醛、乙酸等，在乙二醇、乙醇、甘油中微溶，難溶于水，可于硫酸、鹽酸、草酸等成鹽，是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料[3]。三聚氰胺的動物實驗表明，本品雖無遺傳毒性也無致癌作用，但攝入量大、時間長可在泌尿系統(tǒng)形成結石，引起腎功能衰竭，甚至死亡。

三鹿牌嬰幼兒奶粉時間發(fā)生后，食品安全問題再次引起人們的關注，得到國家高度重視。國家標準（GB/T22388-2008）中規(guī)定了原料奶、乳制品、含乳制品中三聚氰胺的三種檢測方法為HPLC法、HPLC-MS/MS法、GC-MS/MS法。高效液相色譜檢測分析牛奶中三聚氰胺殘留量的操作簡便、重現(xiàn)性好，可滿足我科對液態(tài)牛奶中三聚氰胺殘留量的分析檢測要求。為了讓企業(yè)確實履行社會責任，此次專項檢查抽查了我縣市場上50批次液態(tài)牛奶，殘留量未超標的可正常銷售，對于檢測不合格的產品要實行產品下架，同時對生產企業(yè)進行整改，切實保障消費者的健康安全。

[1] 國家技術監(jiān)督局.GB/T 9567-1997.工業(yè)三聚氰胺[S].北京:中國標準出版社,1997.

[2] 戚冬偉.電位滴定-聯(lián)機測試法對飼料中的三聚氰胺殘留量分析[J].畜牧與飼料科學,2009,30(1):77-78.

[3] 蔡勤仁,歐陽穎瑜,錢振杰,等.超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺[J].色譜,2008,26(3):339-342.

R155.57

：B

：1671-8194（2014）05-0058-02