血管外膜慢性損傷通過CNP影響大鼠頸動脈舒縮功能的實驗研究

李勇杰 曾定尹

（遼寧省遼陽市第三人民醫院循環內科，遼寧 遼陽 111000）

血管外膜慢性損傷通過CNP影響大鼠頸動脈舒縮功能的實驗研究

李勇杰 曾定尹

（遼寧省遼陽市第三人民醫院循環內科，遼寧 遼陽 111000）

目的 探討血管外膜慢性損傷對動脈血管舒縮反應性影響的可能機制。方法 以硅膠管為實驗研究工具，將大鼠頸動脈進行包裹，構建血管外膜慢性損傷介導早期動脈硬化動物模型以及血管收縮性增強動物模型，詳細觀察正常組與模型組血管組織中，CNP、cGMP、PKGⅠα和PKGⅠβ這四項指標之間的表達變化。結果 就包管側右頸動脈血管組織來講，在CNP、cGMP、PKGⅠα表達上，模型組較正常組雙側頸動脈明顯減少，有顯著的統計學差異（P＜0.01）；對于模型組中的包管側右頸動脈血管組織而言，其中PKGⅠβ這項表達與其他組比較呈下降趨勢，但是組間對比差異無顯著統計學意義（P=0.254）。結論 血管外膜慢性損傷早期階段可以引起血管慢性痙攣，血流量下降，血管對5-HT的反應敏感性增加，局部血管組織中CNP的蛋白表達下調是血管外膜慢性損傷引起血管收縮反應性增強的重要機制之一，并且CNP的降低血管收縮反應性的作用同局部血管組織中PKGⅠα的表達密切相關，同局部血管組織中PKGⅠβ的表達關系不密切。

血管外膜慢性損傷；C-型利尿鈉肽；蛋白激酶G；環磷酸鳥苷

1 資料與方法

1.1 實驗材料

選擇本市某動物實驗科的健康雄性Wistar大鼠，體質量在300～350 kg，周齡在11～14周，所選大鼠為標準環境下飼養。

1.2 實驗方法

在普通飲食喂養1周后，對兩組大鼠進行分組，分成正常組10只和模型組10只，繼續給予正常組大鼠2周的普通飲食，模型組大鼠在普通飲食喂養1周后，以硅膠管為實驗研究工具，將大鼠頸動脈進行包裹，并繼續給予1周左右的普通飲食喂養。硅膠管包裹大鼠頸動脈手術在室溫下實施，麻醉選擇10%水合氯醛0.3 mL/100 g進行，于大鼠腹腔部位注射，并以仰臥形式，在自制的40 cm×60 cm鼠板上進行固定，為其進行頸前脫毛，完成后常規條件下進行消毒，具體可選擇碘酒或酒精等進行，鋪好孔巾，切口定位在大鼠頸部皮膚，可沿正中線縱行實行，鈍性將頸部筋膜、肌肉等進行逐層剝離，在右側頸動脈鞘充分暴露的情況下，將右側頸動脈進行游離，沿縱行方向切開后，選擇內徑為1.5 mm的硅膠管對右側頸動脈進行包裹，另一側不作任何處理，最后對傷口進行常規縫合，待大鼠自行恢復。

表1 各組頸動脈形態學變化分析（n＝6，）

表1 各組頸動脈形態學變化分析（n＝6，）

注：a.與模型組右頸動脈相比P＜0.01

正常組左頸動脈 模型組左頸動脈 正常組右頸動脈 模型組右頸動脈EELA(mm2) 2.43±0.16a 2.44±0.21a 2.42±0.13a 1.78±0.12 IELA(mm2) 1.77±0.16a 1.91±0.18a 1.81±0.09a 1.07±0.11 MA(mm2) 0.65±0.06 0.69±0.09 0.60±0.07 0.70±0.06 MD(um) 109.29±10.95a 107.56±10.19a 102.76±9.61a 173.64±10.12

表2 各組頸動脈血流量變化分析（n＝6，）

表2 各組頸動脈血流量變化分析（n＝6，）

注：a.與模型組右頸動脈相比P＜0.01

正常組左頸動脈 模型組左頸動脈 正常組右頸動脈 模型組右頸動脈基礎血流量(mL/min) 3.48±0.14a 3.67±0.28a 3.49±0.11a 2.60±0.21滴注5-HT后 2.90±0.13 2.97±0.21 2.92±0.10 1.61±0.19血流量變化率(%) 16.87±1.24a 17.90±1.78a 16.35±0.76a 38.22±3.10

1.3 病理學觀察分析：按照常規的病理學觀察方法來進行，先進行實驗材料的選取，選擇符合實驗要求的材料制作病理標本，進而開展HE染色實驗工作。

1.4 酶聯免疫吸附法分析：執行試劑盒說明書操作步驟，從而檢測正常組與模型組血管組織中cGMP含量以及血清中CNP含量的變化。

1.5 蛋白印記（Westen-blot）：遵循蛋白印記方法，檢測模型組與實驗組大鼠右頸動脈局部組織中PKGⅠα、CNP以及PKGⅠβ這三項指標的表達，充分結合Gel-Analyzer軟件，詳細研究目的條帶，檢測目的條帶積分光密度值，進而完成結果分析報告。

2 結 果

2.1 血管形態學改變探究：當正常組與模型組的大鼠雙側頸動脈進行HE染色后，借助普通光鏡進行對比觀察。通過光鏡顯示下圖像發現，模型組左側頸動脈無明顯病理改變，同時正常組雙側頸動脈也無病理改變，但經過7 d觀察后，模型組用硅膠管包裹的大鼠右頸動脈發生病理改變，見圖1。其中病理改變主要體現在6個方面：①血管口徑顯著變小；②內彈力板發生彎曲；③無明顯內膜增生現象；④中膜增厚；⑤外膜出現輕度增生；⑥一部分炎細胞浸潤。

2.2 形態學測量結果

模型組左頸動脈同正常組雙側頸動脈在血管形態上相比，外彈力板內面積、內彈力板內面積、中膜厚度和中膜面積無明顯變化（P＞0.05）；模型組包管側右頸動脈同正常組和自身左頸動脈相比，內彈力板內面積、外彈力板內面積明顯減小,有顯著統計學差異（P＜0.01），中膜面積沒有明顯改變，中膜厚度明顯增加且有顯著統計學差異（P＜0.01），提示硅膠管包裹頸動脈早期階段血管腔縮小主要是源于中膜平滑肌的慢性收縮（表1）。

2.3 各組大鼠頸動脈血流量的變化

結合以上形態學的結果，提示血管外膜損傷刺激引起的血管平滑肌的慢性持續性收縮，導致血流量下降；滴注藥物后各組血流量均減少，但正常組雙側頸動脈、模型組左側頸動脈的血流量變化率同模型組包管側右頸動脈的血流量變化率相比有顯著統計學差異（P＜0.01），表明模型組右頸動脈對5-HT的敏感性增加。見表2和圖2。

2.4 CNP在血清中的表達情況

運用ELISA的方法測定兩組血清中的CNP含量，結果發現：同正常組血清CNP（15.81±1.48）ng/L相比，模型組的血清CNP（13.81± 1.14）ng/L有所減少，但無統計學差異（P＝0.064）。

圖1 硅膠管包裹對頸動脈形態學影響（HE染色：a×100倍；b×200倍）

圖2 各組頸動脈血流量變化分析（n＝6）

3 討 論

CNP作為鈉尿肽家族的新成員，其生理作用十分廣泛，功能上它與NO有著驚人的相似之處，二者相互作用、相互影響，保持著生物學功能上的完整性。總之，CNP是一種強的非內皮依賴性的血管擴張劑，實驗證實CNP在心臟組織、外周血管及循環血中均有一定的分布，但較ANP為少，表明它是一種新型心血管活動的輔助調節活性多肽，今后CNP可能作為選擇性心血管調節肽在調節血管張力中起重要作用。

R543.4

：B

：1671-8194（2014）05-0053-02

國家重點基礎研究項目“973”計劃資助項目（課題編號：2005CB523310）