溫陽活血通絡方對硬皮病小鼠作用研究

姚海青

【摘要】探討溫陽活血通絡方對博萊霉素引起的小鼠硬皮病的治療作用。方法：把60只清潔級Balb/c小鼠隨機分為對照小組（10只）和模型組（50只），用博萊霉素選取模型組小鼠背部左側區域皮下注射，持續28天，對照小組用PBS在相同部位皮下注射。待小鼠皮膚切片觀察造模成功后，再把模型組分為中西藥小組（10只）、西藥小組（10只）、中藥小組（10只）、模型對照小組（10只）。分別灌藥，持續28天后再處死小鼠，剪去注射部分表皮組織，通過HE染色和皮膚厚度測量對比各組藥物的治療效果。結果：中西藥小組的皮膚組織恢復最明顯，其次是中藥組，最后是西藥組。結論：中西藥結合應用可以最有效的改善硬皮病小鼠的皮膚組織病變。

【關鍵詞】硬皮病；溫陽活血通絡方；Balb/c小鼠

【中圖分類號】R285.5 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0173-01

硬皮病（SD）是一個發病原因及機制當今還尚不十分清楚的與免疫、環境等緊密聯系的結締組織病.目前關于硬皮病的發病機制存在著許多的假說，但是具體病因還不十分的明確，大多數學者研究認為該病可能與遺傳、人種、環境、藥物、免疫異常、血管異常、結締組織異常、性別等因素有關。悉尼學者曾做過關于硬皮病與遺傳關系的研究，最后發現到，患者一級親屬患病的可能性比普通一般群體要多達11-158倍[1]。

1實驗耗材與方法

1.1實驗耗材

清潔級的Balb/c實驗用小鼠，總計60只，都選雌性，全部為6周齡，購買時稱重每只達到17-22g左右，都從湖北省動物實驗中心購入，合格號：（鄂）2014-0-004。本次實驗所用的溫陽活血通絡方，其中藥組成包括：淫羊藿20g、丹參20g、黃芪20g、竹節參15g、當歸10g、桂枝10g、白芍10g、白芥子10g、甘草5g，加蒸餾水煎煮成湯劑，以上中藥，購自于湖北民族學院附屬民大醫院中藥房。醋酸潑尼松片，5mg/片，從湖北民族學院附屬民大醫院的西藥房購買，國藥準字：H36020039，批號：111257。注射用進口鹽酸博萊霉素粉劑（BLM），15mg/支，從日本化學藥株式會社購買。另外，一些實驗檢測設備等全部由湖北民族學院附屬民大醫院風濕性疾病發生與干預免疫實驗室與病理科提供。

1.2實驗方法

在適應性飼養7天后，將60只Balb/c小鼠取出，隨機地把它們分成10只的對照小組和50只的模型組。造模前，選取背部左側區域消毒，先用彎頭剪刀剃去小鼠背部左側相同部位的被毛。

將準備好的400ug/ml的博萊霉素從模型組小鼠的背部左側脫毛皮膚區皮下注射0.1ml，每天1次，持續注射總計28天，將準備好的對照小組在相同的地方皮下注射PBS0.1ml，每天1次，持續注射總計28天。

硬皮病小鼠制作成功后，需要進行分小組灌胃治療，將模型組隨機平均分成四小組（西藥小組10只，中藥小組10只，中西藥小組10只、模型對照小組10只）。從造模成功后的第2天起開始分小組給于不同的藥物，療程共28天，每天灌胃一次，其中，中西藥小組要先后依次灌入中藥湯劑與西藥溶劑，兩者灌服給藥時間的間距大約1個小時左右。本次給藥嚴格采用《中藥藥理研究方法學》中的“等效劑量”法[2]實施。

（1） 模型對照小組小鼠：按照5ml.kg-1的計算方法，每天用生理鹽水灌服。

（2） 中藥小組小鼠：按照20.55g .kg-1（大約為正常成人使用量的12.33倍，正常成人按60kg算）的計算方法，每天用溫陽活血通絡方灌胃。

（3） 西藥小組小鼠：將5mg醋酸潑尼松片取出，每天一片用滅菌苯研成粉末狀，倒進50ml的生理鹽水中充分攪勻，按照6mg .kg-1的計算方法，每天用強的松混溶液灌服。

（4） 中西藥小組小鼠：西藥、中藥聯合應用，按5ml.kg-1的計算方法灌入，兩者灌服時間的間距大約為1小時。

1.3檢測方法

將小鼠皮膚組織切片各免疫組化染色后在顯微鏡下察看，擇取出5個視野（從每張切片中隨機選擇），并且測量器其皮膚厚度，所有數據都將通過“均數±標準差”來測量， 使用用于處理數據的SPSS軟件系統，t 檢驗進行各小組比較，P的分析結果小于0.05算作有統計學意義。

2實驗結果

2.1皮膚組織病理學改變

（1）根據相關的皮膚組織圖可發現，模型組小鼠與對照小組相比，皮膚真皮層厚度明顯增加，膠原纖維增生，毛囊等皮膚附屬器減少，在真皮小血管四周存在炎癥細胞浸潤，血管腔有些縮小，血管壁變厚硬化，有一些甚至堵塞。

（2）根據相關的皮膚組織圖可發現，中西藥小組小鼠皮膚組織恢復最是明顯，最接近于對照小組，如皮膚厚度變薄等（如表1）。其次是中藥小組，最后是西藥小組，兩者差距不大。

3 討論

硬皮病是一種目前病因還不十分清楚的結締組織病。美國的一個研究顯示，硬皮病可發生于任何年齡，在女性患者尤為常見，大約四倍于男性患者，兒童患者比較罕見。溫陽活血通絡方在湖北民族學院附屬民大醫院與川北醫學院長期臨床治療硬皮病中取得了良好的療效，其中淫羊藿、丹參、黃芪為共為君藥，竹節參、當歸為臣，桂枝、白芍、白芥子為佐，甘草為使，各種藥物的相扶搭配，既能祛邪和通絡調血，又能補益諸虛。

由于硬皮病的病因病機十分復雜，且病情反復，虛實駁雜，?？衫奂皟扰K，臨床上單方單藥難以有效控制病情發展。多數醫家經過長期反復的臨床實踐，認為中西藥合用可以達到取長補短，有效控制病情發展的目的。中醫西醫的結合用藥，不但更能提高西藥在抗炎、抑制纖維化、調整免疫等方面的藥效，而且能彌補西藥在增強病人體質、調節臟腑功能等方面的缺失，，減輕兩者的副作用，從而綜合提高治療效果。

參考文獻

[1]陳奇主編.中藥藥理研究方法學[M].人民衛生出版社，2006，1168

[2]張乃崢主編.臨床風濕病學[M].上海：上?？茖W技術出版社，1999，275