蜂膠對(duì)感染根管常見(jiàn)菌抑菌活性的實(shí)驗(yàn)研究

趙海英

【摘要】根管內(nèi)微生物感染導(dǎo)致牙齒根尖周炎。諸多學(xué)者認(rèn)為厭氧菌是牙髓、根尖周病的優(yōu)勢(shì)菌，為其細(xì)菌總數(shù)的2/3以上。在臨床治療中一般采用藥物消毒法對(duì)根管消毒。近年來(lái)，已有相關(guān)報(bào)道已經(jīng)證實(shí)蜂膠對(duì)人體無(wú)毒、無(wú)刺激性、無(wú)致癌性，不產(chǎn)生耐藥性等，并且可以安全的用于口腔疾病的治療。本文針對(duì)國(guó)產(chǎn)水溶性蜂膠對(duì)中間普氏菌、具核梭桿菌及二者混合菌的抑菌活性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，可以作為臨床推廣應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】蜂膠；抑菌；試驗(yàn)；臨床研究

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.163文章編號(hào)：1004-7484（2014）-04-1947-02牙髓病和根尖周病屬于口腔常見(jiàn)疾病，根管治療術(shù)是治療牙髓和根尖周病最基本有效的方法，根管治療的重要步驟是根管消毒。臨床上根管消毒有很多種方法，包括藥物消毒、電解治療、高頻電療、微波治療以激光治療等，但臨床最常用的消毒方法為藥物消毒。近年來(lái)，在醫(yī)療保健上，天然藥物引起了人們的廣泛興趣。在新藥開(kāi)發(fā)中天然藥物已經(jīng)成為重要策略之一。蜂膠作為天然產(chǎn)物具有廣泛的藥理作用，有抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗氧化、消炎、止痛等多種藥物學(xué)作用，還能促進(jìn)組織愈合和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力。目前，諸多學(xué)者已經(jīng)對(duì)蜂膠做了大量的研究，但是針對(duì)蜂膠作為根管消毒藥物方面研究報(bào)道較少。因此，本文針對(duì)國(guó)產(chǎn)水溶性蜂膠對(duì)中間普氏菌、具核梭桿菌及二者混合菌的抑菌活性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，可以作為臨床推廣應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料①厭氧手套箱；②超凈工作臺(tái)；③高壓蒸汽滅菌器；④電子天平；⑤試管、刻度吸管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等；⑥水溶性固體蜂膠。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1蜂膠儲(chǔ)存液的制備把蜂膠放于冰箱內(nèi)凍存24h，使其呈不具粘性的固體狀態(tài)。用電子天平精密稱量并取其蜂膠固體11.8g，取75ml蒸餾水，將二者混合，并調(diào)整PH值為（6.8-7.0），經(jīng)過(guò)98℃的水浴加熱制備成濃度為15.4%的蜂膠水溶液。溶液冷卻后，經(jīng)濾紙過(guò)濾，將得到的濾渣烘干。再稱取濾渣重量以計(jì)算蜂膠溶液的準(zhǔn)確濃度。然后加蒸餾水使得蜂膠水溶液濃度達(dá)到1%，放于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2蜂膠實(shí)驗(yàn)液的制備取1ml已制備的1%蜂膠溶液，加入9mlBHI+Hemin培養(yǎng)基，制成0.1%的蜂膠實(shí)驗(yàn)用液。分別加入不同量的BHI+Hemin培養(yǎng)基將0.1%的蜂膠實(shí)驗(yàn)用液分別稀釋成0.1%0.05%、0.025%、0.0125%、0.0062%等五個(gè)濃度的蜂膠溶液備用。

1.2.3藥物平板的制備分別取備用的五個(gè)不同濃度的蜂膠實(shí)驗(yàn)液，且在保證無(wú)菌的條件下，分別加入溫度在48℃-50℃融化狀態(tài)的BHI血瓊脂中，混合后注入直徑為90mm平板中。每個(gè)平板為一個(gè)藥物濃度，須標(biāo)記清楚，每個(gè)濃度藥液量為2ml、瓊脂培養(yǎng)基量18ml。

1.2.4對(duì)照平板的制備在制作藥物平板的同時(shí)，制作一個(gè)只加BHI血瓊脂不加蜂膠的平板作為陽(yáng)性對(duì)照平板。再制作一個(gè)只加蜂膠不加BHI+Hemin培養(yǎng)基的平板作為陰性對(duì)照平板。

1.2.5菌懸液的制備用BHI液體培養(yǎng)基分別將具核梭桿菌和中間普氏菌的干燥菌粉溶解，根據(jù)分區(qū)劃線法分別將兩種細(xì)菌接種于BHI血瓊脂培養(yǎng)基上，在溫度為37℃且厭氧環(huán)境（80%N2，10%H2，10%CO2）培養(yǎng)48h，在顯微鏡觀察下將其分離，分別移取大小形態(tài)相當(dāng)?shù)木淙苡贐HI液體培養(yǎng)基中，再將其第二次接種在BHI血瓊脂培養(yǎng)基上，在溫度為37℃厭氧環(huán)境（80%N2，10%H2，10%CO2）培養(yǎng)48后，加入BHI+Hemin液體培養(yǎng)基配成1.5×108CFU/ml菌懸液，備用。

1.2.6體外抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)藥液配制采用瓊脂稀釋法。在含蜂膠瓊脂平板以及陽(yáng)性對(duì)照瓊脂平板的底部劃分并標(biāo)記成12個(gè)區(qū)。用點(diǎn)種儀取實(shí)驗(yàn)菌液，分別接種于5種濃度的蜂膠瓊脂平板表面的記號(hào)區(qū)內(nèi)。分別在1-4、5-8、9-12記號(hào)區(qū)內(nèi)接種6μl的具核梭桿菌菌液，6μl的中間普氏菌菌液，具核梭桿菌菌液和中間普氏菌菌液各3μl（使其形成混合液）。接種完畢后，將各瓊脂平板放置于溫度為37℃且厭氧環(huán)境中（80%N2，10%H2，10%CO2）培養(yǎng)48h?？梢杂萌庋壑苯佑^察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為殺菌的最低濃度（MBC）。重復(fù)6次上述實(shí)驗(yàn)。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果