Ercc1與大腸癌耐藥蛋白的關系

貝雪艷　李治國

【摘要】大腸癌是臨床最常見的高發腫瘤之一。目前治療仍以手術切除為主，但單純行根治性手術存在高復發、轉移的風險，影響患者后期生存。術后輔助化療可以降低大腸癌患者術后復發、轉移風險及病死率。奧沙利鉑（oxaliplatin）作為輔助化療方案中的主要藥物之一，其療效已經得到了認可。但仍有很大一部分患者因復發轉移而死亡，其原因可能是患者獲得性或先天性的耐藥所致。

【關鍵詞】Ercc1；大腸癌；耐藥；蛋白；關系

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.111文章編號：1004-7484（2014）-04-1906-01大腸癌是臨床最常見的高發腫瘤之一。目前治療仍以手術切除為主，但單純行根治性手術存在高復發、轉移的風險，影響患者后期生存。術后輔助化療可以降低大腸癌患者術后復發、轉移風險及病死率。奧沙利鉑（oxaliplatin）作為輔助化療方案中的主要藥物之一，其療效已經得到了認可。但仍有很大一部分患者因復發轉移而死亡，其原因可能是患者獲得性或先天性的耐藥所致。研究認為核酸切除修復（nucleotide excision repair，NER）是患者產生鉑類耐藥的重要機制之一，切除修復交叉互補基因l（excision repair cross-complementingl，ERcc1）是NER途徑中的關鍵基因。為此，我們通過研究探討了大腸癌組織ERCCI表達及其與術后奧沙利鉑治療療效及預后的關系。1資料與方法

1.1材料收集人民醫院普外科手術切除的大腸癌標本共50例，均有完整的臨床資料和明確的病理診斷；同期正常大腸切緣粘膜組織（簡稱：正常大腸組織）40例。50例大腸癌病人中，男性36例，女性14例；病人年齡24-82歲，平均年齡58.5歲；大體分型：隆起型16例，潰瘍型29例，其它5例；組織學分級：高分化10例，中分化33例，低分化7例；腫瘤部位：直腸28例，結腸22例；淋巴結轉移：有28例，無22例；r1NM分期（AJCC腫瘤分期標準，第六版）：I期7例，II期16例，III期22例，IV期5例。全部病例術前均未接受過化療和放療。同期正常大腸切緣粘膜組織40例中男性22例，女性18例，病人年齡26-78歲，平均年齡61歲。所有組織均用10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋。

1.2實驗方法Erccl具體步驟如下：①4um石蠟切片3張常規脫蠟及水化（其中一張HE染色用）。②PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。③枸椽酸高壓修復3分鐘。④置室溫10分鐘。⑤PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑥3%H2O2室溫孵育10分鐘。⑦PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑧加一抗ERCCI（1：70），4℃過夜。⑨PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑩滴加試劑1，37℃放置20分鐘。○11PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。○12滴加試劑2，37℃放置25分鐘。○13PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。○14DAB顯色5分鐘。○15自來水充分沖洗，蘇木素復染，脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。用PBS替代一抗作為空白對照。

1.3結果判定Erccl：實驗結果判斷標準參照Fromowitz等綜合計分法，由陽性著色細胞所占百分數與細胞著色強度二者結合起來計算.陽性細胞百分數為10個視野陽性細胞的平均數占這10個視野中細胞數的百分比：<5%計0分；5%-25%計1分；26%-50%計2分；51%-75%計3分；）75%計4分。細胞著色強度：不著色計0分；淡黃色計1分；棕黃色計2分；棕褐色計3分。二者積分相加：0-1分為陰性，2分為陽性。

1.4統計分析采用SPSS13.0統計軟件包進行統計學分析，ERCCI表達與生存期的生存率采用Log-rank檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。總體生存分析的比較用Kapla-Meier生存曲線表示。影響大腸癌預后的多因素分析采用COX回歸分析。2結果

2.1ERCCI主要在腫瘤細胞核內，呈棕黃色，顆粒狀；在某些腫瘤細胞的胞質中也有表達，集中于核膜周圍。

2.2在研究的總體病例中，術后經奧沙利鉑化療后的患者5年DFS為52.0%，5年OS為68%。其中ErccI陰性表達為49例，5年DFS為73.5%，5年05為81.6%（40/49）；陽性表達為51例，5年DFS為31.4%，5年OS為54.9%（28/51）；Kaplan-Meier生存曲線顯示陰性表達組DFS和OS優于陽性組，Log—rank檢驗兩者總體DFS（P=0.000）和OS（P=0.000）比較有統計學差異。3討論