化療對晚期胃癌患者細胞免疫及調(diào)節(jié)T細胞的影響

廖娟

【摘要】目的：探討晚期胃癌患者化療前后細胞免疫及調(diào)節(jié)T細胞（Tregs）的變化及其臨床價值。方法 采用流式細胞術檢測健康志愿者及晚期胃癌患者化療前后外周血CD4+T、CD8+T細胞及調(diào)節(jié)T細胞的比例變化。結果 晚期胃癌患者化療前外周血CD4+T細胞所占比例和CD4+T/CD8+T均較化療后低，且二者均低于健康對照組（P<0.05）。晚期胃癌患者CD4+CD25+T細胞和Tregs細胞所占比例化療后較化療前有所降低，二者均明顯高于健康對照組。結論 化療能明顯減輕晚期胃癌患者的腫瘤免疫耐受，改善免疫狀況。

【關鍵詞】免疫調(diào)節(jié)T細胞；胃癌；化療；細胞免疫；

【Abstract】Objective To investigate the changes of cellular immune function and CD4+ CD25+ regulatory T cells （Tregs） in peripheral blood of patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy and their clinical implications. Methods The proportion of CD4+ CD25+ Tregs among CD4+ T lymphocytes and the proportion of CD4+ and CD8+ T cells of PBMC in peripheral blood of 32 patients with advanced gastric cancer was determined by flow cytometry before 1 day and 1 week after chemotherapy. Results Compared with control group， the levels of CD4+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ T lymphocytes decreased in patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy， but the data after treatment was higher than before. The percentage of CD4+CD25+ T cells and Tregs among CD4+ T lymphocytes significantly changed after chemotherapy as compared with that before chemotherapy， the difference was significant between the patients and the healthy subjects. Conclusion chemotherapy can improve the immune function of patients with advanced gastric cancer.

【key words 】immunoregulatory cells ； gastric cancer； chemotherapy； cellular immunity

【中圖分類號】R735.2 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0004-01

胃癌是我國發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，病死率高；與其他惡性腫瘤一樣，胃癌的發(fā)生與發(fā)展與腫瘤的免疫耐受相關，調(diào)節(jié)T細胞作為主要的免疫負向調(diào)節(jié)細胞促進腫瘤的免疫耐受，從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。化療作為臨床治療胃癌的重要方法之一， 能否影響胃癌患者細胞免疫及調(diào)節(jié)T細胞，目前報道甚少。本研究從腫瘤免疫角度，初步探討化療對晚期胃癌患者調(diào)節(jié)T細胞及細胞免疫功能的影響，為胃癌治療的療效觀察提供一定的免疫學依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

胃癌患者均為川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院2010年9月～2013年4

月就診的經(jīng)病理及臨床確診為晚期胃癌患者，共45例，其中男性29例，女性16例，年齡44～80歲，中位年齡59歲。病理組織學類型：乳頭狀腺癌18例、管狀腺癌11例、粘液腺癌9例、印戒細胞癌7例，組織分級：高分化18例，中分化16例，低分化11例。所有患者均無免疫相關性疾病，未使用抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)治療。本研究中所有患者均統(tǒng)一采用PLF方案化療（氟尿嘧啶+亞葉酸鈣+奧沙利鉑），化療期間水化，止吐等常規(guī)藥物輔助治療。正常對照由我院體檢中心提供的健康體檢者20例，男性12例，女性8例，年齡22～65歲。分別設化療前和化療后為A組和B組，對照組為C組。

1.2 主要的試劑及設備

FITC標記鼠抗人CD4抗體、PE標記鼠抗人CD25抗體、PE-CY5標記的鼠抗人CD8抗體，F(xiàn)ITC、PE及PE-CY5標記的鼠抗人IgG1同型對照抗體（均購自美國eBioscience公司）；流式細胞檢測儀（P07900102，美國BD公司）。

1.3 實驗方法

采用流式細胞技術。用EDTA-K2抗凝劑采血管收集胃癌患者化療前前1天及化療后1周和健康志愿者的靜脈血3ml，取100μl當天行流式細胞學檢測CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞占CD4+T細胞的比例、CD4+T淋巴細胞及CD8+T淋巴細胞占單個核淋巴細胞（PBMC）的比例。

1.4 統(tǒng)計學處理

計量資料均以X±s表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)（采用One-way ANOVA，其中兩兩比較用LSD或Dunnett's T3檢驗）。

2 結果：

2.1 胃癌患者外周血T細胞亞群變化

3 討論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳易感性、環(huán)境等諸多因素相關，機體的免疫功能狀況在胃癌的促成中亦扮演了重要的角色。機體抗腫瘤免疫以細胞免疫為主， T淋巴細胞的免疫調(diào)控、監(jiān)視作用對防止腫瘤的發(fā)生發(fā)展尤其重要。CD4+T/CD8+T細胞比值變化反映機體免疫狀態(tài)的變化，其比值降低，宿主免疫功能低下致抗腫瘤作用減弱，有利于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。 我們發(fā)現(xiàn)，胃癌患者外周血CD4+T及CD4+T/C8+T比值均較正常人明顯下降，提示胃癌患者細胞免疫功能降低，利于腫瘤的發(fā)生與進展。

引起胃癌患者細胞免疫功能低下原因很多，其中調(diào)節(jié)性T細胞（CD4+CD25highTreg）的作用日益凸顯。調(diào)節(jié)性T細胞屬T細胞亞群，在維持機體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應答方面起重要作用，可誘導腫瘤的免疫耐受關系到惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預后[1]。已有研究證明，肝癌

、前列腺癌、肺癌等多種實體腫瘤患者體內(nèi)Tregs數(shù)量顯著增加，通過抑制多種免疫細胞的作用導致腫瘤免疫耐受 [2-4]，使腫瘤逃避機體的免疫監(jiān)視不斷生長，亦是導致腫瘤治療療效不理想的重要因素。我們通過檢測胃癌患者外周血發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性T細胞在胃癌患者體內(nèi)表達增多，從而誘導腫瘤的免疫耐受；同時CD4+/CD8+比例下降，說明胃癌患者Tregs細胞可能通過抑制CD4+T細胞的增殖， 導致T淋巴細胞亞群之間的比例失調(diào)致免疫耐受，從而逃避機體的免疫監(jiān)視不斷生長。

腫瘤生長的局部環(huán)境與其發(fā)展密切相關，多種惡性腫瘤組織及浸潤淋巴細胞中也可以檢測出Treg[5]。腫瘤分泌的VEGF、COX-2、TGF-β等因子，可直接或間接地誘導Treg的擴增及轉化，使腫瘤組織中Treg顯著增多[6-7]，而Treg通過抑制NK細胞等各種免疫活性細胞使惡性腫瘤逃脫宿主的免疫監(jiān)視而持續(xù)生長。由此可見，Treg與腫瘤細胞互為因果形成惡性循環(huán)，減少調(diào)節(jié)性T細胞在腫瘤患者體內(nèi)的表達可能阻斷這一循環(huán)從而達到抑制腫瘤生長的目的。已有報道，手術可下調(diào)胃癌患者體內(nèi)調(diào)節(jié)T細胞的表達，化療是目前廣泛用于晚期胃癌患者的重要治療方法之一，其能否改善患者免疫狀況、能否通過影響調(diào)節(jié)性T細胞打破腫瘤的免疫耐受，目前并不清楚。我們通過檢測胃癌患者化療前后的外周血，發(fā)現(xiàn)經(jīng)化療后，胃癌患者外周血Treg明顯下降、CD4+T及CD4+T/CD8+T比例不同程度上升，說明化療可下調(diào)胃癌患者體內(nèi)Treg的表達，減輕腫瘤的免疫耐受，增強機體抗腫瘤免疫，其具體機制有待進一步研究。這一發(fā)現(xiàn)，從腫瘤免疫角度對胃癌化療療效提供了理論基礎，為制定胃癌綜合治療方案提供了新的思路。

參考文獻

[1]Ke X， Wang J， Li L， et al. Roles of CD4+CD25（high） FOXP3+ Tregs in lymphomas and tumors are complex[J]. Front Biosci， 2008， 13： 3986-4001.

[2] Feng X， Li B， et al.Increased frequency of CD4+CD25（high）FoxP3+ regulatory T cells in patients with hepatocellular carcinoma. [J]Arch Immunol Ther Exp （Warsz）. 2011 Aug；59（4）：309-14.

[3]Yokokawa J， Cereda V， et al.Enhanced functionality of CD4+CD25（high）FoxP3+ regulatory T cells in the peripheral blood of patients with prostate cancer. [J] Clin Cancer Res. 2008 Feb 15；14（4）：1032-40.

[4] Shimizu K， Nakata M， et al.Tumor-infiltrating Foxp3+ regulatory T cells are correlated with cyclooxygenase-2 expression and are associated with recurrence in resected non-small cell lung cancer. [J] Thorac Oncol. 2010 May；5（5）：585-90.

[5] Pandiyan P， Zheng L， Ishihara S， et al. CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4+ T cells[J]. Nat Immunol， 2007， 8（12）： 1353-1362.

[6] Sharma S， Yang SC， Zhu L， et al. Tumor cyclooxygenase-2/prostaglandin E2-dependent promotion of FOXP3 expression and CD4+ CD25+ T regulatory cell activities in lung cancer[J]. Cancer Research， 2005， 65（12）： 5211-5220.

[7] Liu XQ， Lu K， et al. Up-regulated expression of indoleamine 2，3-dioxygenase 1 in non-Hodgkin lymphoma correlates with increased regulatory T-cell infiltration. [J].Leuk Lymphoma. 2014 Feb；55（2）：405-14.