hMMS2基因對結腸癌細胞耐藥逆轉的影響

張蕾, 隋御, 王婷, 李利堅, 李元杰, 金彩霞, 徐方

1. 寧夏醫科大學檢驗學院, 寧夏生殖與遺傳重點實驗室, 銀川 750004;

2. 同濟大學醫學院轉化醫學研究中心, 上海 200072

hMMS2基因對結腸癌細胞耐藥逆轉的影響

張蕾1, 隋御1, 王婷1, 李利堅1, 李元杰1, 金彩霞2, 徐方1

1. 寧夏醫科大學檢驗學院, 寧夏生殖與遺傳重點實驗室, 銀川 750004;

2. 同濟大學醫學院轉化醫學研究中心, 上海 200072

為探討hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因對人結腸癌細胞耐藥逆轉的影響,文章以人高分化耐奧沙利鉑結腸癌細胞(THC8307/L-OHP)為實驗材料, 采用脂質體-質粒轉染技術構建了帶有干擾目的基因hMMS2的miRNA片段并攜帶綠色熒光蛋白標記重組質粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的細胞系, 通過實時熒光定量 PCR(qRT-PCR)和免疫熒光技術(Immunostaining technique)檢測該細胞系的干擾效率。選擇 hMMS2低表達具有統計學意義的上述細胞系作為實驗組細胞, 同時將未曾作過處理的 THC8307/ L-OHP細胞作為空白對照組, 轉染綠色熒光蛋白空質粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的 THC8307/L-OHP細胞作為陰性對照組, 以噻唑藍比色分析實驗(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成實驗(Colony formation assay)對 3組細胞的存活率和克隆形成率進行檢測, 結果顯示：實驗組細胞的奧沙利鉑半數抑制濃度(Half inhibition concentration, IC50)、耐藥指數(Resistance index, RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency, CFE)均比對照組細胞明顯降低(P＜0.05), 而相對逆轉率(Relative reverse efficiency, RRE)增高(P＜0.05), 提示實驗組細胞增殖能力減弱; 以羅丹明123實驗(Rhodamine 123 assay)結合倒置熒光顯微鏡、流式細胞儀檢測技術等觀測細胞的凋亡變化, 結果顯示, 實驗組細胞的凋亡率較對照組細胞顯著增高(P＜0.05); 兩對照(空白、陰性)組間并無細胞增殖或凋亡的顯著性差異。研究結果提示：下調hMMS2基因表達可逆轉人高分化耐奧沙利鉑結腸癌細胞對L-OHP的耐藥性并促進結腸癌細胞的凋亡。……