探析多藥耐藥基因MDR1在卵巢癌化療中的價值

仲立新范 瑞

（1 河南省南陽市第一人民醫院 腫瘤科，河南 南陽 473000；2 河南省南陽市第一人民醫院 病理科，河南 南陽 473000）

探析多藥耐藥基因MDR1在卵巢癌化療中的價值

仲立新1范 瑞2

（1 河南省南陽市第一人民醫院 腫瘤科，河南 南陽 473000；2 河南省南陽市第一人民醫院 病理科，河南 南陽 473000）

目的探析多藥耐藥基因MDR1在卵巢癌化療中的價值。方法收集我院2012年2月至2014年2月收治的卵巢癌患者160例初治卵巢癌患者腫瘤組織標本，利用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測MDR1基因表達情況，同時用四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法檢測腫瘤細胞對抗癌藥的敏感性。結果91例（56.875%）卵巢癌患者MDR1基因表達陽性；耐藥組和敏感組與MDR1基因表達陽性和陰性的總符合率為81. 08%（P＞0.05）；卵巢癌組織中的MDR1表達與年齡無關（P＞0.05）。MDR1基因表達陽性和陰性與化療預后有關（P＜0. 05）。結論MDR1基因表達陰性患者應用MDR相關藥物是有效的，陽性患者應避免應用MDR相關藥物。MDR1的表達陰陽性的檢測對臨床用藥有一定的指導價值，作為判斷卵巢癌患者預后的一個指標。

多藥耐藥基因MDR1；卵巢腫瘤；化療；價值

卵巢腫瘤是是女性生殖系統中三大惡性腫瘤之一[1]。目前綜合治療方案是以手術為主、輔以化療、放療和生物治療。然而卵巢癌細胞對多種化療藥物產生耐藥性[2]，嚴重影響了卵巢癌患者的化療效果和生存質量。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2012年2月至2014年2月收治的卵巢癌患者160例經術后病理檢查證實的卵巢癌患者腫瘤組織標本，年齡19～71歲，且術前未經MDR相關藥物化療。根據WHO分類標準分化程度進行劃分，其中低分化100例，中分化43例，高分化9例。術中采集標本立即置含營養液的無菌瓶中，盡快送實驗室處理。

1.2 腫瘤細胞制備方法

腫瘤離體后即刻進行無菌取材，并用膠原酶消化腫瘤組織制成單細胞懸液備用。

1.2.1 MTT比色法

將單細胞懸液濃度調整為（1～5）×105個/毫升，設培養液對照組、腫瘤細胞對照組及加不同抗腫瘤藥物的實驗組，每組設3個平行孔，每孔接種200 μL，實驗組內每孔加抗腫瘤藥物20 μL培養2 d，培養液對照組、腫瘤細胞對照組各加20 μL MTT培養4 h，1000 r/min離心10 min，棄上清，然后加入200 μL DMSO，搖勻，用SLT-400AT型酶標儀測定每孔在570 nm和630 nm波長處的吸光度值，按抑制率（%）=（1-實驗孔A值/細胞對照孔A值）×100%，（A值=A570-A630）計算各種敏感藥對腫瘤細胞的抑制率。按抑制率≥50%為敏感，否則為耐藥。

1.2.2 MDR1基因檢測

①RNA制備：將單細胞懸液用Trizol試劑提取細胞總RNA。取1 μg總RNA，利用Promega公司提供的逆轉錄試劑盒標準條件進行的逆轉錄反應，合成cDNA的PCR反應模板。引物為北京賽百盛公司合成的MDR1（擴增片段長度為157 bp）及內參照引物為β2微球蛋白（β2-MG）（擴增產物為114 bp）。②PCR擴增：PCR反應：逆轉錄產物（cDNA）和10×buffer各3 μL，MgCl2為1.5 mmol/L，MDR1及β2微球蛋白引物各0.5 μmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，MgCl21.5 mmol/L，TaqDNA聚合酶1U。PCR反應條件依次為95 ℃時間30 s，55 ℃時間30 s，72 ℃時間60 s，循環35次，最后72 ℃時間5 min結束。③PCR產物電泳：取10 μLPCR擴增產物在電壓為80V的含溴化乙錠的2%瓊脂糖凝膠中電泳1 h，用紫外透射儀觀察114 bp和157 bp擴增條帶。若出現此基因特異性擴增條帶者，為MDR1基因表達陽性，否則為陰性。

1.3 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件，兩組間差異應用t檢驗，P＜0.05說明兩組間比較差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 β2-MG在所有組織標本中均有表達，證明了逆轉錄所得cDNA樣品是完整的。按有無MDR1基因表達分為兩組，陽性組91例，占56.875%；陰性組69例，占43.125%。

2.2 MDR1基因表達與細胞耐藥水平。對MDR1基因表達陰陽性與細胞耐藥水平進行統計學t檢驗，耐藥組和敏感組與MDR1基因表達陽性和陰性的總符合率為82.44%（P＞0.05）。說明MDR1基因表達陰性患者應用MDR相關藥物是有效的，陽性患者應避免應用MDR相關藥物。MDR1的表達陰陽性的檢測對臨床用藥有一定的指導價值。

2.3 MDR1基因表達與預后的關系。本文160例卵巢癌患者隨訪資料149例，且均在半年以上，病情穩定者133例，其中12例MDR1基因表達陽性；病情嚴重、復發甚至死亡者27例，其中25例MDR1基因表達陽性，經統計學t檢驗，二者差異具有顯著性（P＞0.05）。MDR1基因的表達陰陽性可作為判斷卵巢癌患者預后的一個指標。如表1所示。

3 討 論

表1 MDR1基因表達與各因素關系的分析

多藥耐藥性是指癌細胞通過過度表達位于其細胞表面的糖蛋白，以利用鈣通道加快化療藥物向細胞內外輸送而產生的抵抗抗癌藥物的一種自我保護措施。本實驗選擇臨床上常用的11種抗癌藥物，應用MTT法進行體外藥敏試驗，其中MDR相關有7種藥物，即絲裂霉素（MMC）、更生霉素（DACT）、阿霉素（ADM）、表阿霉素（E-ADM）、長春新堿（VCR）、鬼臼乙叉甙（VP16）和平陽霉素（PYM）；其他為噻替哌（TSPA）、卡鉑（JM 8）、順鉑（CDDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）。DACT、ADM、E-ADM、VCR和VP16對卵巢癌細胞抑制率的差異有顯著性，其中VP16抑制率差異有高度顯著性，其余則無顯著性。結果說明耐藥組和敏感組與MDR1基因表達陽性和陰性的總符合率較高。據癌組織中MDR1的表達與否，對耐藥患者采用藥敏方案治療可助于提高療效，還可以對卵巢癌患者進行預后判斷。

[1] Munksgaard PS,Blaakaer J. The association between endometriosis and gynecological cancers and breast cancer: a review of epidemiological data[J]. Gynecol Oncol,2011,123(1):157-163.

[2] Nooter K. Multidrug resistance(mdr)genes in human cancer[J].Br J Cancer,1991,63:663-669.

R737.31

B

1671-8194（2014）22-0205-02