高效液相色譜法鑒別史國公藥酒中羌活和紅曲的研究

姚亮元黃 云戴 波*

（1 湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品藥品職業(yè)學(xué)院，湖南 長沙 410128）

高效液相色譜法鑒別史國公藥酒中羌活和紅曲的研究

姚亮元1黃 云2戴 波2*

（1 湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品藥品職業(yè)學(xué)院，湖南 長沙 410128）

目的建立高效液相色譜法鑒別史國公酒中的羌活和紅曲的分析方法。方法采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測。結(jié)果高效液相色譜法分別成功鑒別史國公酒中的羌活和紅曲中成分，陰性無干擾。結(jié)論本法簡便、準(zhǔn)確、精確，適用于史國公酒中的羌活和紅曲的鑒別。

史國公藥酒；羌活；紅曲；阿魏酸；洛伐他汀；高效液相色譜法

史國公藥酒又名國公酒，為骨傷科用藥。由川芎、當(dāng)歸、羌活、紅曲等30味中藥材組成的復(fù)方酒劑，具有祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)的功效。常用于風(fēng)寒濕痹，骨節(jié)疼痛，四肢麻木[1]。阿魏酸是川芎、當(dāng)歸和羌活中的主要成分[2-4]，洛伐他汀是紅曲中的主要成分[5]。現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)采用理化鑒別，難以控制產(chǎn)品質(zhì)量。由于處方藥味多，有多組不同藥材含有相同成分化合物，實(shí)驗(yàn)研究，薄層鑒別相互干擾，無法將薄層鑒別用于本品中川芎、當(dāng)歸、羌活等藥材的鑒別。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，確保用藥安全、有效，提高現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)采用了高效液相色譜法分別鑒別史國公藥酒中的羌活和紅曲，操作簡便，結(jié)果可靠。

1 材 料

1.1 儀器：Agilent 1100液相色譜儀（美國安捷倫公司，紫外檢測器，自動進(jìn)樣器，色譜數(shù)據(jù)工作站）；XP205型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）

1.2 試藥：史國公藥酒樣品9批，批號分別為20060908、20060907、20060906、060301、061101、061201、061202、20040408、20040910；阿魏酸（供含量測定用，批號：110773-9910）；洛伐他汀（供含量測定用，批號：100600-200502）；羌活對照藥材（供鑒別用，批號：120918-200406）；紅曲對照藥材（供鑒別用，批號：209641-121658）均購自中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 羌活的鑒別

2.1.1 色譜條件：色譜柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；檢測波長：316 nm；進(jìn)樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃。

2.1.2 溶液的配制

①供試品溶液：取本品50 mL，加乙醚50 mL，振搖提取，乙醚液加2%碳酸鈉溶液50 mL振搖提取，棄去乙醚液，堿液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，加乙醚50 mL振搖提取，乙醚液揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得。②缺羌活的陰性對照溶液：按處方稱取缺羌活的其他藥材，按制備工藝制成缺羌活的三陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。③阿魏酸對照品溶液：取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。④羌活對照藥材溶液：按處方稱取羌活對照藥材量，按制備工藝制成對照樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.3 專屬性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液、對照品溶液、缺羌活的陰性對照溶液、羌活對照藥材溶液分別進(jìn)樣。結(jié)果在供試品色譜圖中，檢出與對照品阿魏酸色譜圖相同保留時(shí)間的色譜峰2、與羌活對照藥材溶液色譜圖保留時(shí)間相同的色譜峰1和阿魏酸色譜峰2（圖1～圖3），缺當(dāng)歸、川芎、羌活的陰性對照不干擾羌活的鑒別（圖4）。

圖1 阿魏酸對照溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 羌活對照藥材溶液色譜圖

圖4 缺羌活的陰性對照溶液色譜圖

2.1.4 樣品測定

分別取對照品溶液、供試品溶液和羌活對照藥材溶液依法進(jìn)樣測定。結(jié)果均檢出與對照品色譜圖、羌活色譜圖相同保留時(shí)間的色譜峰。

2.2 紅曲的鑒別

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（55∶45）；檢測波長：238 nm；進(jìn)樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃。

2.2.2 溶液的配制

①供試品溶液：取本品100 mL，用乙醚100 mL振搖提取，棄去乙醚液，水溶液蒸至近干，加硅藻土4 g及丙酮適量（5～10 mL）攪拌成小顆粒狀，置錐形瓶中，加丙酮80 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，即得。②對照品溶液：取洛伐他汀對照品，加甲醇制成每1 mL含4 μg的溶液，即得。③紅曲對照藥材溶液：按處方稱取紅曲對照藥材量，按制備工藝制成對照樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。④缺紅曲的陰性對照溶液：按處方稱取缺紅曲的其他藥材，按制備工藝制成缺紅曲的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液、對照品溶液、缺紅曲的陰性對照溶液分別進(jìn)樣。結(jié)果在供試品色譜圖中，有洛伐他汀對照品、紅曲對照藥材色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰3（圖5、6、7），缺紅曲的陰性對照無干擾（圖8）。

2.2.4 檢測限

圖5 洛伐他汀對照溶液色譜圖

圖6 供試品溶液色譜圖

圖7 紅曲對照藥材色譜圖

圖8 缺紅曲的陰性對照溶液色譜圖

精密吸取2.2.2項(xiàng)下的對照品溶液0.2 μL， 注入液相色譜儀，測定，洛伐他汀的檢測限（S/N≈3）為0.38ng/ mL。

2.2.5 樣品測定

分別取對照品溶液和供試品溶液依法進(jìn)樣測定。結(jié)果均檢出與對照品色譜圖相同保留時(shí)間的色譜峰。

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

采用紫外-可見分光光度法對對照品溶液在200～400 nm紫外區(qū)進(jìn)行掃描，在316 nm處阿魏酸有最大吸收，238 nm處洛伐他汀有最大吸收。并參照文獻(xiàn)[6-8]，最終選用316 nm處鑒別羌活，238 nm處鑒別紅曲。

3.2 流動相的選擇

實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-水系統(tǒng)、乙腈-水系統(tǒng)和甲醇-乙腈-水系統(tǒng)，結(jié)果確定了乙腈-0.1%磷酸為流動相，色譜峰對稱性好，基線平穩(wěn)，加入磷酸鹽緩沖液，可以有效防止拖尾。且主峰與其他成分得到良好的分離，陰性樣品無干擾。

3.3 紅曲鑒別供試品溶液制備方法考察

鑒別紅曲時(shí)，實(shí)驗(yàn)采用了兩種供試品溶液制備方法。結(jié)果在2.2.2項(xiàng)下方法制備的供試品溶液色譜圖中，洛伐他汀主峰位置附近雜質(zhì)峰少，分離度好。

3.4 中藥復(fù)方制劑標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)仍多采用理化鑒定，這樣雖簡便，但終究不準(zhǔn)確，不法商家利用同類或有相似結(jié)構(gòu)或官能團(tuán)也能與顯色劑發(fā)生反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行復(fù)方制劑的慘假，嚴(yán)重?cái)_亂的中藥復(fù)方制劑市場秩序。本實(shí)驗(yàn)在研究中，曾采用多種薄層色譜法鑒別羌活和紅曲，均未能排除陰性干擾。故采用高效液相色譜法對史國公藥酒中川芎和紅曲進(jìn)行鑒別，陰性無干擾，操作簡便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。適合用于史國公藥酒制劑的質(zhì)量控制。

[1] 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第九冊》[S].1994:62.

[2] 葉璟.川芎中主要有效成分的綜合提取分離工藝研究[J].中成藥,2009,31(2):217-220.

[3] 古麗娜,沙比爾,郭洪祝,等.HPLC法測定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和異歐前胡素[J].中草藥,2006,37(6):937-940.

[4] 莊志宏,吳劍坤,陳志峰,等.不同產(chǎn)地當(dāng)歸中中阿魏酸的含量測定[J].北京中醫(yī)藥,2011,30(8):624-625.

[5] 宋洪濤,宓鶴鳴,郭濤.中藥紅曲的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,1999,17(3):172-174.

[6] 楊銀芝,周小江.婦良膠囊中阿魏酸的含量測定[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2008,4(1):35-37.

[7] 張秀麗.HPLC法測定川芎中阿魏酸的含量[J].中國藥事,2009, 23(5):469-471.

[8] 宋更申,姜建國,高燕霞,等.HPLC法測定洛伐他汀含量的不確定度評估[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(13):48-49.

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1671-8194（2014）22-0087-02

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