血漿uPA、uPAR與鼻咽癌臨床分期的相關性研究

朱俊秀周理想李相鴻梁大虎陳艾東*

（1 蕪湖市弋江區醫院，安徽 蕪湖241001；2 皖南醫學院弋磯山醫院臨床藥學部， 安徽 蕪湖 241001）

血漿uPA、uPAR與鼻咽癌臨床分期的相關性研究

朱俊秀1周理想2李相鴻2梁大虎2陳艾東2*

（1 蕪湖市弋江區醫院，安徽 蕪湖241001；2 皖南醫學院弋磯山醫院臨床藥學部， 安徽 蕪湖 241001）

目的探討尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）及其受體（uPAR）的血漿濃度與鼻咽癌臨床分期和惡性程度的相關性。方法收集86例鼻咽癌患者血液標本，35例健康人血液標本作對照。用酶聯免疫吸附法（ELISA法）分別檢測uPA和uPAR的血漿濃度。結果與健康對照患者比較，鼻咽癌組血漿uPA濃度明顯升高（P＜0.05），且鼻咽癌組血漿uPA、uPAR在鼻咽癌各期之間均有顯著性差異（P＜0.05）。結論鼻咽癌的臨床分期和惡性程度與血漿uPA濃度高度正相關，可作為鼻咽癌診斷和預后估計的指標及治療的新靶點。

尿激酶型纖溶酶原激活物；尿激酶型纖溶酶原激活物受體；鼻咽癌

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）好發于中國南方各省及東南亞地區，其病因涉及EB病毒、遺傳因素（遺傳易感性）、多種癌基因和抑癌基因的相互作用以及環境和飲食因素。近年來人們通過對腫瘤的深入研究，認識到癌變是一個涉及多重基因事件的復雜過程。鼻咽癌發生、發展及其生物學行為的研究也已進入基因水平。在已知的蛋白酶中，尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）是一種絲氨酸蛋白酶類[1]，uPAR是uPA的特異性受體，它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細胞提供局限在細胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細胞外基質和基底膜成分，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移[2]。本研究分析鼻咽癌與健康者之間的uPA，uPAR血漿濃度，分析以上各項指標與鼻咽癌的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源：皖南醫學院附屬醫院2009年7月至2011年7月收治的鼻咽癌患者86例，年齡22～69歲，其中男67例，女19例，均未接受放化療治療，所有患者均經鼻咽腔組織病理活檢確診，中國鼻咽癌2008臨床分期標準進行分期。健康對照組為皖南醫學院附屬醫院體檢的正常人35例，年齡22～66歲，其中男27例，女8例。健康對照組均經病史、體檢、血常規、血生化、心電圖、胸透及五官、眼科等專科檢查確定為健康人群，且2周內均未接受抗凝及溶栓治療。

1.2 主要儀器：Q/FTH008-2000 PCR擴增儀（日本株式會社）；

DU640核酸定量分析儀（美國Bio-Rad）；UVP-8000凝膠紫外光成像儀（美國UVP）；超低溫冰箱（丹麥Harris）；雙蒸水儀（美國Millipore）。

1.3 主要試劑：人尿激酶型纖溶酶原激活因子ELISA試劑盒為美國原裝生產，大連信邦生物試劑公司分裝。

1.4 方法：清晨抽空腹靜脈血2 mL于EDTA-K2抗凝管中，立即顛倒混勻，6 h內4000 rpm離心10 min，分離血漿和白細胞層，分裝Epp管中，-80 ℃保存待用。采用ELISA試劑盒測定。在全自動酶標儀上測出A450的值和濃度，最后乘以稀釋倍數，計算出uPA的血漿濃度（ng/mL）。

1.5 統計學處理：采用SPSS 19.0統計學軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

鼻咽癌組血漿uPA、uPAR濃度與正常對照組之間均有顯著性差異（P＜0.05）；uPA、uPAR在鼻咽癌各期之間均有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。

表1 86例鼻咽癌患者各臨床分期uPA血漿濃度與正常對照組比較

3 討 論

鼻咽癌是一種具有明顯的地區聚集性的上皮起源性的惡性腫瘤，可在疾病早期原發病灶不明顯時便發生頸部淋巴結轉移或遠處轉移。然而，鼻咽癌發生和轉移的確切分子機制仍不很清楚。研究發現，腫瘤發生侵襲、轉移與其自身分泌蛋白酶密切相關，在人類惡性腫瘤組織中，已知有絲氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶可能參與腫瘤的浸潤生長和轉移，絲氨酸蛋白酶是參與這一復雜過程蛋白酶中的關鍵酶之一[3]。尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在乳腺癌，胃癌，軟組織肉瘤，肝細胞癌等均發現高水平[4]，且與腫瘤的淋巴結轉移、復發、短生存期等呈正相關。

尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）屬于一種絲氨酸蛋白酶類，有兩條二硫鍵相連的多肽鏈，一個C端的絲氨酸蛋白區和一個N端A鏈。最初分泌出來的uPA為單鏈的酶原形式（prouPA），在一些酶的作用下，轉變為雙鏈有活性的uPA，它激活無活性的纖溶酶原轉變為纖溶酶。uPAR是uPA的特異性受體，當N端122個氨基酸切去后，以糖基化磷酸肌醇（GPI）的形式錨泊在胞膜上。它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細胞提供局限在細胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細胞外基質和基底膜成分，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移。本研究顯示，鼻咽癌患者血漿中uPA明顯升高，與健康對照組比較具有顯著性差異。此外，鼻咽癌患者血漿中的uPA血漿濃度隨著臨床分期的增加而升高，且各分期間均有顯著性差異，提示uPA的持續升高與疾病的分期有關，與鼻咽癌的病程進程相關。本資料所得結論與黃濤等[5]用ELISA法檢測鼻咽癌患者血漿uPA的結論相一致。

uPAR是uPA的特異性受體，它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細胞提供局限在細胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細胞外基質和基底膜成分，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移。本研究結果顯示，鼻咽癌患者血漿中uPAR的血漿濃度明顯升高，同樣，鼻咽癌患者血漿中uPAR隨著臨床分期的增加而增高，提示血漿中uPAR血漿濃度與鼻咽癌的病程進展呈正相關，其可能是促進鼻咽癌發生發展、浸潤和轉移的原因之一，同時也提示鼻咽癌的發生發展、浸潤和轉移可能是uPA、uPAR共同作用的結果。

綜上所述，uPA及uPAR在鼻咽癌的生長、浸潤和轉移的過程中起著重要作用。隨著研究的逐漸深入，機制的闡明，以及大量臨床試驗的進行，uPA、uPAR可在臨床上為鼻咽癌的診斷及預后評估提供參考，并可能成為鼻咽癌治療的靶向目標。

[1] Halámková J,Kiss I,Tomá?ek J,et al.Significance of urokinase and its inhibitors in the invasiveness and metastasing of malignant tumors[J]. Vnitr Lek,2012,58(2):129-134.

[2] Breuss JM,Uhrin P.VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/ uPAR system[J].Cell Adh Migr,2011,6(6):535-615.

[3] Rabbani SA,Mazar AP.The role of the plasminogen activation system in angiogenesis and metastasis[J].Surg Oncol Clin N Am,2001,10(2):393-415.

[4] Binder BR,Mihaly J,Prager GW.uPAR-uPA-PAI-1 interactions and signaling: a vascular biologist's view[J].Thromb Haemost,2007, 97(3):336-342.

[5] 黃濤,符生苗,梁茱,等.鼻咽癌組織中UPA及UPAR蛋白的表達及其臨床意義[J].臨床耳鼻喉頭頸外科雜志,2009,23(11):517-519.

R739.63

B

1671-8194（2014）24-0075-02

皖南醫學院弋磯山醫院引進人才基金（2010621）安徽省高等學校省級自然科學基金（KJ2012B202）

*通訊作者