依達拉奉對腦缺血-再灌注大鼠的神經保護作用及其機制研究

金培彧關敬之* 袁少飛

（1 內蒙古科技大學包頭醫學院第二附屬醫院藥劑科，內蒙古 包頭 014030；2 內蒙古自治區國際蒙醫醫院藥劑科，內蒙古 呼和浩特 010065）

依達拉奉對腦缺血-再灌注大鼠的神經保護作用及其機制研究

金培彧1關敬之2* 袁少飛1

（1 內蒙古科技大學包頭醫學院第二附屬醫院藥劑科，內蒙古 包頭 014030；2 內蒙古自治區國際蒙醫醫院藥劑科，內蒙古 呼和浩特 010065）

目的探討分析采用依達拉奉藥物對腦缺血-再灌注大鼠的神經保護作用機制。方法對12只大鼠，隨機平分為假手術組、腦缺血再灌注組以及依達拉奉組，分別于再灌注后3 d、7 d，測定與對比丙二醛（MDA）含量、腦組織含水量、水通道蛋白4（AQP-4）的表達水平以及一氧化氮合酶（NOS）活性。結果再灌注后3 d腦缺血再灌注組MDA含量、腦組織含水量、AQP-4的表達水平與NOS活性，均高于假手術組，差異具有統計學意義（均P＜0.05），而依達拉奉組與腦缺血再灌注組相比，差異具有統計學意義（均P＜0.05）；再灌注后7 d，三組在MDA含量、腦組織含水量與NOS活性等指標對比，差異無統計學意義（均P＞0.05），而依達拉奉組AQP-4的表達水平顯著低于腦缺血再灌注組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論依達拉奉藥物能夠降低腦缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、腦組織含水量，抑制AQP-4的表達，從而起到減輕腦水腫，保護大鼠神經的作用。

依達拉奉；腦缺血-再灌注；神經保護

依達拉奉對治療急性腦梗死具有較好的效果，同時它也是一種新型的腦神經保護藥物，在諸多的動物模型試驗結果中發現，依達拉奉能夠有效清除自由基，進一步抑制大腦神經細胞的死亡[1]，從而改善神經缺損癥狀，而AQP-4與腦水腫癥狀具有十分密切的關系。因此，本研究通過對腦缺血-再灌注大鼠模型的相關指標測定，觀察AQP-4的表達水平以及腦含水量等的變化情況，旨在探討分析依達拉奉對腦缺血-再灌注大鼠的神經保護作用機制，具體過程匯報如下。

1 材料與方法

1.1 動物分組與模型制備

①選取12只遠交群（SD）雄性大鼠，隨機平分為假手術組、腦缺血再灌注組以及依達拉奉注射組等3組，每組均3只。②采用線栓法，制備局灶性腦腦缺血-再灌注大鼠試驗模型，當動物麻醉清醒后，剔除神經功能缺陷評分為0分與4分的，并補充1～3分的大鼠，其中神經功能缺陷評分標準韓秋等[2]的評定方法進行。

1.2 試驗藥品與試劑

依達拉奉注射液規格為30 mg/20mL（國瑞藥業公司生產）；采用南京建成生物工程所究所提供的檢測試劑盒，包括丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）等；采用武漢博士德生物工程公司生產的SP免疫組織化學檢測試劑盒、二氨基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒；兔抗大鼠抗體（美國ADI公司生產）。

1.3 試驗方法

①對依達拉奉組大鼠于腹腔部位注射依達拉奉5 mg/kg，每12 h，行同法、同量給藥，假手術組大鼠不行藥物給予，腦缺血再灌注組與依達拉奉同樣劑量，同法注射生理鹽水。②分離3組大鼠腦組織標本，制備腦組織勻漿，并行離心后，取上清液，分別于再灌注后3 d、7 d后，采用化學比色法與測定NOS活性，按照李高義等[3]的方法，測定MDA含量，采用干、濕重測定法測定腦水含量，對腦組織切片進行常規步驟制備后，采用免疫組化法以及光學顯微鏡圖像分析法，檢測AQP-4的表達水平。

表1 再灌注后3 d三組大鼠測定指標對比

表1 再灌注后3 d三組大鼠測定指標對比

注：與假手術組相比，*P＜0.05，與腦缺血再灌注組相比，#P＜0.05

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表2 再灌注后7 d三組大鼠測定指標對比（

表2 再灌注后7 d三組大鼠測定指標對比（

注：與假手術組相比，*P＜0.05，與腦缺血再灌注組相比，#P＜0.05

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1.4 數據處理

本文研究所收集到的相關資料以及其他記錄數據，采用統計軟件SPSS17.0單因素方差分析進行分析處理，組間差異采用t檢驗，實驗結果采用（xˉ±s）表示，P＜0.05表示對比差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 再灌注后3 d三組大鼠測定指標對比

再灌注后3 d腦缺血再灌注組MDA含量、腦組織含水量、AQP-4的表達水平與NOS活性，均高于假手術組，差異具有統計學意義（均P＜0.05），而依達拉奉組與腦缺血再灌注組相比，差異具有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 再灌注后7d三組大鼠測定指標對比

再灌注后7 d，三組在MDA含量、腦組織含水量與NOS活性等指標對比，差異無統計學意義（均P＞0.05），而依達拉奉組AQP-4的表達水平顯著低于腦缺血再灌注組，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

3 討 論

進行腦缺血-再灌注后，往往容易產生大量的氧自由基，進而損傷細胞膜，使得細胞膜的通透性功能異常[4]，最終導致細胞發生毒性水腫。而丙二醛（MDA）是氧自由基通過引發脂質過氧化反應后，形成的一種降解產物[5]，有研究[6]指出，通過測定MDA的變化，可以反映出腦組織中氧自由基含量的改變情況；一氧化氮合酶（NOS）在調節一氧化氮含量的環節中，具有十分重要的地位，而一旦發生腦缺氧，則可增強NOS的活性，生產出大量的一氧化氮，進而導致細胞線粒體受到損傷，所以測定NOS的活性，可以在一定程度上評估腦組織損傷程度；水通道蛋白4（AQP-4）是腦組織中含量最豐富的水孔蛋白物質，據相關[7]研究資料表明，AQP-4的表達水平的高低，與腦梗死等疾病引起的腦水腫癥狀有關。而臨床上使用的依達拉奉，正好是治療腦水腫癥狀的藥物，因此，在臨床試驗研究中，我們通過測定動物模型的以上相關指標，以尋找出依達拉奉對腦缺血-再灌注大鼠的神經保護作用機制。

已經有研究[8]證實，依達拉奉可以抑制AQP-4的表達，降低丙二醛（MDA）含量、大鼠腦組織含水量以及一氧化氮合酶（NOS）活性，而在本次研究中，再灌注后3 d對依達拉奉組大鼠的相關指標，進行測定后發現，MDA含量、NOS活性、腦組織含水量與AQP-4表達水平分別為：（5.18±0.13）nmol/mg、（40.12±2.12）U/mg、（76.87 ±1.11）%與（86.71±1.17），與腦缺血再灌注組相比，均顯著降低，與相關研究報道[9]結果相似，充分說明，依達拉奉對降低MDA含量、NOS活性、組織含水量以及抑制AQP-4的表達，具有顯著性效果。而在再灌注后7 d測定發現，以上相關指標的數值，均在不同程度上恢復至正常水平，但從AQP-4方面分析，依達拉奉組的AQP-4表達水平，仍然顯著低于腦缺血再灌注組，再次證明，依達拉奉對抑制AQP-4的表達的有效性。此外，有研究[10]指出，于再灌注后的6 h、1 d、3 d分別對以上指標進行測定，可以發現指標值在升高，這需要本文進一步分次測定時間，并擴大研究樣本的容量，為臨床試驗結論提供更可靠依據。

綜上所述，依達拉奉藥物能夠降低腦缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、腦組織含水量，抑制AQP-4的表達，從而起到減輕腦水腫，保護大鼠神經的作用。

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[4] 龔筱倩,徐漢榮.依達拉奉對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠caspase-3、Bcl-2表達的影響[J].中風與神經疾病雜志,2008,25(1): 53-56.

[5] 鄧洪波,胡信群,李友元,等.依達拉奉合用尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦損傷的保護作用[J].中國新藥與臨床雜志,2006, 25(1):36-38.

[6] 謝惠芳,徐如祥,魏繼鵬,等.依達拉奉對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后細胞凋亡及caspase-3蛋白表達的影響[J].中華神經醫學雜志,2008,7(10):1009-1012.

[7] 雷立芳,涂秋云,資曉宏,等.依達拉奉對腦缺血再灌注大鼠血腦屏障通透性及MMP-9表達的影響[J].廣東醫學,2008,29(7):1128-1130.

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R743.3

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1671-8194（2014）24-0070-02

*通訊作者