血小板膜糖蛋白與缺血性腦血管病關(guān)系的研究

胡曉芳，李 娜，2，王玉紅，張英輝，鄭 偉＊

血小板膜糖蛋白與缺血性腦血管病關(guān)系的研究

胡曉芳1，李 娜1，2，王玉紅1，張英輝1，鄭 偉1＊

（1.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽110840；2.遼寧醫(yī)學(xué)院研究生院，遼寧錦州121001）

目的探討血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物表達(dá)水平與缺血性腦血管病的相關(guān)性。方法分別檢測(cè)缺血性腦血管病患者和健康對(duì)照組血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物和血小板聚集率水平。結(jié)果缺血性腦血管病患者血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物和血小板聚集率水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.01）。相關(guān)分析結(jié)果顯示，缺血性腦血管病患者血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物和血小板聚集率水平呈正相關(guān)（r＝0.684，P＜0.01）。結(jié)論血小板膜糖蛋白表達(dá)水平的增高明顯增強(qiáng)了血小板的聚集功能和活化狀態(tài)。而缺血性腦血管病的發(fā)生正是GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物高表達(dá)與血小板聚集共同作用的結(jié)果。

血小板膜糖蛋白；缺血性腦血管病；血小板聚集率

隨著老齡化人口的不斷增加，腦血管事件的發(fā)病率也不斷攀升，腦血管病已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)成年人致殘的主要原因［1］。缺血性腦血管病占腦血管病的80%。因此，進(jìn)一步闡明缺血性腦血管病的發(fā)病機(jī)制是目前亟待解決的重點(diǎn)課題。

研究顯示，缺血性腦血管病的發(fā)生與血液的高凝狀態(tài)有關(guān)，血小板在維持血液凝固過程中發(fā)揮著舉足輕重的作用［2］。其中，血小板膜糖蛋白作為介導(dǎo)血小板功能的關(guān)鍵效應(yīng)分子，其表達(dá)水平明顯影響著血小板的功能和活化狀態(tài)。本研究聚焦于缺血性腦血管疾病患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物的表達(dá)水平及血小板聚集率的變化特點(diǎn)，旨在探討二者在缺血性腦血管疾病發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)而為缺血性腦血管病診斷提供有益的新的線索。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

選擇2012年1月至2013年12月沈陽軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科缺血腦血管病住院患者221例（ICVD），男121例，女100例，平均年齡61.14± 10.01歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：患者均有顱腦CT和／或MRI的影像證據(jù)，診斷符合1995年全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。排除有肝、腎疾病、糖尿病、惡性腫瘤、甲狀腺功能異常、妊娠、服用抗驚厥藥物者。無酗酒史，未服用免疫抑制劑、多種維生素及葉酸。對(duì)照組為我院健康體檢者115例，男61例、女54例，平均年齡60.85±10.33歲。兩組在年齡、性別方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測(cè)

病例組（于確診入院的第1天清晨）以及對(duì)照組體檢者在空腹?fàn)顟B(tài)下采集前臂無抗凝靜脈血和109 mmol／L枸櫞酸鈉抗凝靜脈血各3ml。無抗凝靜脈血1h內(nèi)離心（3 000rpm，10min）分離血清后，置于－70℃保存待測(cè)。采用GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物ELISA試劑盒（上海繼錦化學(xué)生物工程有限公司）檢測(cè)血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物濃度，所有操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。應(yīng)用LBY－NT4血小板聚集儀（北京普利生公司），檢測(cè)血小板聚集率。

1.2.2 血小板聚集率測(cè)定

1 000rpm離心制備富含血小板血漿（PRP），并計(jì)數(shù)，剩余部分3 000rpm離心10min制備乏血小板血漿（PPP），PPP血小板計(jì)數(shù)為10×109／L～20 ×109／L，用PPP調(diào)整PRP至100×109／L－300× 109／L。按儀器要求，以PPP管透光度為100%，以PRP管初始透光度為0%，在RPR管中加入誘導(dǎo)劑（ADP或AA），測(cè)定不同誘導(dǎo)劑在不同濃度下（1 μmol／L，2μmol／L，5μmol／L ADP；0.1mg／L，0.2 mg／L，0.5mg／L AA），分別記錄血小板聚集率曲線和最大聚集率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料用表示，組間比較用t檢驗(yàn)、方差分析。相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。以上比較采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1缺血性腦血管?。↖CVD）組與對(duì)照組血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物水平的比較

ICVD組血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物水平（753.27±151.72U／ml）明顯高于對(duì)照組（717.42 ±134.95U／ml），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.418，P＝0.016）。ICVD組的血小板聚集率為（74.78± 6.57）%明顯高于對(duì)照組（42.13±5.17）%（t＝52.875，P＜0.01），差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 不同組別血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物的測(cè)定結(jié)果

2.2ICVD患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物水平與血小板聚集率的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示：ICVD組血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ與血小板聚集率復(fù)合物的表達(dá)水平呈正相關(guān)。（r＝0.684，P＜0.01），見圖1。

圖1 ICVD患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物水平與血小板聚集率的相關(guān)性比較

3 討論

血栓形成是缺血性腦血管病發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)，而血小板的活化在血栓的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。有研究顯示，在血小板初始的粘附過程中，GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物是介導(dǎo)血小板與血管壁受損位點(diǎn)結(jié)合的關(guān)鍵效應(yīng)分子［4］。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦血管病的血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物的濃度明顯高于正常對(duì)照組。由此提示，血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物表達(dá)的增加與缺血性腦血管病的發(fā)病密切相關(guān)。其機(jī)理可能為，血小板膜糖蛋白受體活化、表達(dá)增加、密度上調(diào)，隨后其與纖維蛋白原結(jié)合，使血小板聚集，進(jìn)而纖維蛋白原更多地連接到血管內(nèi)皮、血小板聚集率升高，促進(jìn)血小板血栓形成［5］，從而介導(dǎo)缺血性腦血管病的發(fā)生。

血小板聚集率是反映血小板聚集功能和活化的重要指標(biāo)，光學(xué)比濁法血小板聚集率實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)血小板聚集功能的金標(biāo)準(zhǔn)［6］。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦血管病組的血小板聚集率明顯高于正常對(duì)照組。由此提示，血小板聚集功能和活化與缺血性腦血管病的發(fā)病密切相關(guān)。值得關(guān)注的是，通過相關(guān)性分析顯示：血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物與血小板聚集率的表達(dá)量呈顯著的正相關(guān)。由此我們有理由推測(cè)，血小板介導(dǎo)缺血性腦血管病的發(fā)生依賴于GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物與血小板聚集的共同作用。

綜上，血小板膜糖蛋白作為介導(dǎo)血小板功能的關(guān)鍵效應(yīng)分子，其表達(dá)水平的增高明顯增強(qiáng)了血小板的聚集功能和活化狀態(tài)。而缺血性腦血管病的發(fā)生正是GPⅠb／ⅠX／Ⅴ復(fù)合物高表達(dá)與血小板聚集共同作用的結(jié)果。

［1］Atul Ashok Kalanuria，Paul Nyquist，and Geoffrey Ling.The prevention and regression of atherosclerotic plaques：emerging treat－ments［J］.Vasc Health Risk Manag，2012，8：549.

［2］Andrews RK，Gardiner EE，Shen Y，et al.Glycoprotein Ib－IX－V［J］.Int J Biochem Cell Biol，2003，35：1170.

［3］中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì).各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)－腦卒中患者臨床神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（1995）［J］.中華神經(jīng)科雜志，1996，29（6）：379.

［4］Pavkovic M，Petlichkovski A，Strezova A，et al.Gene frequencies of human platelet antigens in the Macedonian population［J］.Tissue Antigens，2006，67（3）：241.

［5］Lominadze D，Dean WL，Tyagi SC，et al.Mechanisms of fibrinogen induced microvascular dysfunction during cardiovascular disease［J］.Acta Physiol，2010，198（1）：1.

［6］Paul A，Gurlbel MD，Richard C，et al.Platelet function momtofing in patients with coronary artery disease［J］.J Am Coil Cardiol，2007，50（19）：1822.

Study on the relationship of platelet membrane glycoprotein with ischemic cerebrovascular disease

HU Xiao－fang，LI Na，WANG Yu－h(huán)ong，et al.（Department of Experimental Techonology，General Hospital of Shenyang Military Command，Shenyang110840，China）

ObjectiveTo investigate the relationship of platelet membrane glycoprotein（GPI）with ischemic cerebrovascular disease（ICVD）.MethodsSerum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex level was measured by enzyme－linked immunosorbent assay.Turbidimetry was applied for detecting platelet agglutination rate（PAR）levels in all groups.ResultsSerum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex and PAR levels in ICVD group were significantly higher than those in control group（P＜0.05，P＜0.01）.Meanwhile，correlation analysis results showed that serum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex levels were positively correlated with PAR levels in ICVD group（r＝0.684，P＜0.01）.ConclusionHigh levels of serum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex obviously elevated the agglutination and action of platelet，which is a key factor mediating the occurrence of ICVD.

platelet membrane glycoprotein；ischemic cerebrovascular disease；platelet agglutination rate（Chin J Lab Diagn，2014，18：1988）

R743.34

：A

胡曉芳，女，51歲，主任技師，主任，碩士生導(dǎo)師，研究方向：腦血管病的實(shí)驗(yàn)室診斷。

2014－03－12）

1007－4287（2014）12－1988－03

＊通訊作者