紅薯葉黃酮對糖尿病模型大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

傅 莉

紅薯葉黃酮對糖尿病模型大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

傅 莉

（攀枝花市攀鋼集團(tuán)總醫(yī)院內(nèi)分泌科（密地院區(qū)），四川攀枝花617063）

近年研究表明，2型糖尿病（T2DM）是一種由T細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫疾病，免疫異常在其發(fā)生、發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用［1］。自天然植物中篩選、提取既能控制血糖，又兼有免疫調(diào)節(jié)作用的成分已成為當(dāng)前的研究熱點。紅薯葉黃酮（FIBL）是自紅薯葉提取的活性物質(zhì)，目前發(fā)現(xiàn)其具有降糖、抗氧化、抗腫瘤作用，但對其免疫調(diào)節(jié)作用的研究甚少，本研究重點觀察FIBL對T2DM大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響。

1 材料與方法

1.1材料

鏈脲佐菌素（STZ）購自美國Sigma公司，以檸檬酸鈉－檸檬酸緩沖溶液（pH＝4.5）配制濃度為20 mg／mL溶液。FITC標(biāo)記CD4、CD8抗體購自上海博耀生物工程有限公司；流式細(xì)胞儀（型號：FACSVerseTM）為美國Becton Dickinson公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1 FIBL制備 將新鮮紅薯葉烘干，充分碎成粉末，稱取200g入1 500ml乙醇（95%），超聲波提取0.5h后抽濾出濾液，濾渣再次提取、抽濾。收集的兩次濾液濃縮至50ml，倒入容量瓶，用60%乙醇稀釋至100mL，即為FIBL樣品液。

1.2.2 糖尿病大鼠模型制備 雄性SD大鼠（清潔級）48只，體重（200±10）g，由武漢大學(xué)實驗動物中心提供［合格證號SCXK（鄂）2008－0004］。給予大鼠高糖高脂飲食（飼料含10%豬油、20%蔗糖、2.5%膽固醇、1%豬膽鹽）4周，大鼠腹腔一次性注射STZ 30mg／kg制備T2DM大鼠模型，以空腹血糖≥16.7mmol／L為標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.2.3 分組及采集血液 造模成功大鼠40只，隨機(jī)分為4組：對照組和FIBL低（25mg／kg）、中（FIBL 50mg／kg）、高（FIBL 100mg／kg）劑量組，F(xiàn)IBL組按劑量每日灌胃1次，對照組灌等量生理鹽水。8周后，大鼠腹腔麻醉，摘眼球取全血，收集于EDTA－2K抗凝管。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測 每個EP管加入50μl大鼠全血，加入FITC標(biāo)記的抗體各15μl，室溫避光孵育20min；每個EP管內(nèi)加500μl紅細(xì)胞裂解液，避光10min；PBS液洗滌2次；去上清，以500μl PBS液重懸，上機(jī)檢測。

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD－t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

FIBL對糖尿病大鼠外周血T細(xì)胞亞群的影響FIBL低劑量組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與對照組比較，F(xiàn)IBL中、高劑量組CD4＋、CD4＋／CD8＋均升高，CD8＋降低（P＜0.05）；與中劑量組比較，F(xiàn)IBL高劑量組變化更為顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 FIBL對糖尿病大鼠外周血T細(xì)胞亞群的影響（x—±s）

3 討論

T2DM患者由于高血糖、免疫異常及廣泛的微血管病變，容易導(dǎo)致感染，不易治愈，死亡率較高。單純使用胸腺肽、免疫球蛋白等提高免疫力的藥物，不僅價格昂貴，而且不能根治。近年來研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IBL具有抗癌、抗氧化、降血糖的作用，對糖尿病大鼠腎臟具有保護(hù)作用，但對T2DM大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用報道甚少。

本研究觀察FIBL對T2DM大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響，結(jié)果顯示：25mg／kg FIBL對大鼠外周血T細(xì)胞亞群無明顯的影響，50mg／kg的FIBL能增高大鼠外周血CD4＋比率及CD4＋／CD8＋比值；100mg／kg的FIBL對T細(xì)胞亞群的影響更為顯著。結(jié)果分析：①STZ引發(fā)糖尿病的主要機(jī)制是選擇性進(jìn)入胰島β細(xì)胞，通過釋放NO自由基破壞β細(xì)胞膜，激活免疫反應(yīng)而損傷胰島［3］。②國內(nèi)外學(xué)者［4－5］的研究已經(jīng)證實，F(xiàn)IBL對糖尿病大鼠及斑點叉尾魚均有良好的抗氧化作用；Nagai M等［6］發(fā)現(xiàn)，紅薯葉通過抑制低密度脂蛋白的氧化而發(fā)揮抗氧化能力。③本研究觀察到FIBL能改善T2DM大鼠T細(xì)胞亞群失衡，提高大鼠的免疫能力，推測其機(jī)制可能與其減少STZ引起β細(xì)胞釋放自由基，削弱氧化應(yīng)激引起的免疫損傷有關(guān)，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入探討。

［1］夏瑢，陳華群，邵國民.超微粉化瓜蔞根對2型糖尿病SD大鼠免疫異常的干預(yù)研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29（2）：267.

［2］張文蘭，胡同平，張翼翔.蠅蛆粉、南瓜粉、茶葉粉及魔芋精粉混合物對2型糖尿病大鼠免疫功能影響的研究［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，37（8）：1530.

［3］趙 蕊，李青旺，張 濤.紅薯葉黃酮對老齡糖尿病模型大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用［J］.中國老年學(xué)雜志，2010，5（30）：1395.

［4］趙 蕊，李青旺，李 星，等.紅薯葉黃酮對糖尿病模型大鼠腎的保護(hù)作用［J］.解剖科學(xué)進(jìn)展，2011，17（4）：321.

［5］Lochmann RT，Islam S，Phillips H，et al.Effects of dietary sweet potato leaf meal on the growth，non－specific immune responses，total phenols and antioxidant capacity in channel catfish（Ictalurus punctatus）［J］.J Sci Food Agric.2012Aug 28.doi：10.1002／jsfa.5898.［Epub ahead of print］.

［6］Nagai M，Tani M，Kishimoto Y，et al.Sweet potato（Ipomoea batatas L.）leaves suppressed oxidation of low density lipoprotein（LDL）in vitro and in human subjects［J］.J Clin Biochem Nutr，2011，48（3）：203.

2014－04－15）

1007－4287（2014）12－1919－02